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PCA3基因在前列腺组织发育中的表达被引量：1: 2009年; 探索PCA3基因在前列腺组织发育过程中的表达情况。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(FQ-RT-PCR)方法检测18例胎儿、27例良性前列腺增生(BPH)患者和15例前列腺癌(PCa)患者前列腺组织中的PCA3 mRNA、AMACR mRNA和PSA mRNA的表达情况。结果在胎儿前列腺组18例标本中均未检测到PCA3 mRNA的表达,不同胎龄组(13～17周、18～21周、22～25周)中PSA mRNA含量无统计学差异(P>1.05),13～17周组与18～21周组、13～17周组与22～25周组中AMACR mRNA含量都有显著性差异(P<0.05),18～21周组与22～25周组AMACR mRNA含量无统计学差异(P>0.05)。胎儿前列腺组、BPH组和PCa组中的AMACR mRNA和PSA mRNA含量逐步增加,且差异有统计学意义(P<0.05)。PCA3基因在胚胎组织中不表达,在前列腺肿瘤时过表达,提示PCA3基因可能是作为前列腺肿瘤发生时的重要的调节基因。而AMACR和PSA基因在胚胎组织中表达,只是在前列腺肿瘤发生时过表达。; 郑彦博胡王强郭飞陶志华沈默陈占国周武戴美洁; 关键词：PCA3 胎儿前列腺 AMACR PSA

白介素10-819 C>T位点多态性与浙江汉族人群膀胱癌易感性的关系: 2012年; 目的探讨白介素-10基因-819 C>T位点多态性与膀胱癌易感性的关系。方法以病例对照研究方法,应用等位基因特异性PCR(AS-PCR)分别检测400例膀胱癌患者和400例健康体检者的IL-10-819 C﹥T基因多态性,对各基因型和等位基因进行统计学分析。结果膀胱癌组变异纯合TT基因型的频率(54.5%)高于对照组基因型(42.0%),差异有统计学意义[χ2=4.740,P<0.05,OR=1.977(95%CI:1.064～3.674)],膀胱癌组携带变异T等位基因的频率(72.0%)高于对照组基因型(63.0%),差异有统计学意义[χ2=7.385,P<0.01,OR=1.510(95%CI:1.121～2.035)];IL-10-819 C>T的基因型频率在浅表型和浸润型膀胱癌之间无统计学意义。结论 IL-10-819 C﹥T基因多态性与浙江汉族人群膀胱癌易感性有关。; 陈占国席徐翔周武胡王强余志贤陶志华; 关键词：膀胱癌易感性

实时荧光定量PCR检测血HBV DNA的疑难结果分析及其对策被引量：6: 2013年; 目的分析实时荧光定量PCR检测血HBV DNA过程中出现的疑难结果，并探讨制定相应的处理对策，以提高HBV DNA检测质量。方法用实时荧光定量PCR检测温州医学院附属第一医院2008至2011年期间，115154份血标本中HBV DNA含量，结合当次HBV DNA定量结果与历史结果、PCR扩增图、乙型肝炎血清5项指标及临床诊断，建立本实验室疑难结果复查标准，回顾性分析2008至2011年本实验室所有送检标本的疑难结果，同时用原试剂（careHBV PCR Kit）和验证复查试剂（careHBV PCR Kit V2）对1969份疑难结果标本进行复查；统计2次结果一致性和不一致的比例，并分析试剂与非试剂因素等造成2次结果不一致的比例，其中试剂因素包括无扩增曲线造成的假阴性和有扩增曲线但扩增效率低2种情况，非试剂因素包括操作污染、标本等其他因素；最后统计careHBV PCR Kit的漏检率。结果2008至2011年共定量检测115154份HBV DNA血标本，疑难结果标本1969份，占总检测标本的1．71％；2次结果一致的为1588份（80．65％）；2次结果不一致为381份（19．35％），其中，4年中试剂因素造成结果不一致的比例分别为18．87％、20．23％、51．33％和59．57％，呈逐年上升趋势，原试剂因素的漏检率分别为2．49％、4．08％、10．09％、14．47％，呈逐年上升趋势；4年中非试剂因素造成结果不一致所占比率分别为81．13％、79．77％、48．67％和40．43％，呈逐年下降趋势。结论用2种不同的试剂复查疑难结果标本，可降低HBV DNA定量检测的漏检率，避免试验误差，有效保证HBV基因突变标本的HBV DNA准确定量，以正确指导乙型肝炎患者的抗病毒治疴0（中华检验医学杂志，2013，36：217-221）; 陈占国周武王忠永金娅蕾陶志华; 关键词：聚合酶链反应肝炎病毒乙型病毒

白细胞介素10-1082G/A位点单核苷酸多态性与膀胱癌的相关性被引量：2: 2012年; 目的探讨白细胞介素-10(IL-10)基因启动子区域-1082G/A位点单核苷酸多态性与膀胱癌危险性的关系。方法选取浙江汉族人群中膀胱癌患者400例为病例组,400例健康体检者为对照组,以等位基因特异性扩增(allele specific PCRamplification,AS-PCR)结合DNA测序方法,检测病例组和对照组的IL-10-1082G/A基因型,比较不同基因型与膀胱癌危险性以及膀胱癌临床分期之间的关系。结果病例组和对照组的IL-10-1082G/A位点基因型分布和等位基因频率之间差异有统计学意义(χ2=8.375,P<0.05;χ2=8.322,P<0.01);AA基因型的个体与携带G等位基因型的个体(GG型和GA型)相比,携带等位基因A的个体与携带等位基因G的个体相比,其患膀胱癌危险性分别增加2.055倍和1.990倍(OR=2.055,95%CI:1.252～3.374;OR=1.990,95%CI:1.237～3.203);IL-10-1082G/A位点基因型与膀胱癌的临床分期无直接相关性。结论 IL-10-1082G/A多态性与膀胱癌危险性相关,该位点SNP检测可作为膀胱癌可能的分子标志物。; 陈占国何杰周武余志贤吴秀玲陶志华; 关键词：白介素单核苷酸多态性基因型膀胱癌

尿液中PCA3 mRNA和融合基因TMPRSS2:ERG mRNA的检测在前列腺癌早期临床诊断中的应用被引量：7: 2011年; 目的研究前列腺按摩后尿液中PCA3 mRNA联合融合基因TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA的定量检测在早期前列腺癌临床诊断中的应用价值。方法收集前列腺癌(PCa)患者53例和前列腺增生(BPH)患者37例,收集前列腺按摩后尿液,离心取细胞沉淀物,提取总RNA,用实时荧光定量RT-PCR的方法检测PSA mRNA、PCA3 mRNA和T1E4 mRNA的含量,以PSA mRNA来校正尿液中的前列腺癌细胞。以PCA3 mRNA/PSA mRNA表示PCA3 mRNA的含量,以T1E4 mRNA/PSA mRNA表示融合基因T1E4 mRNA的含量。用ROC曲线对T1E4 mRNA及PCA3 mRNA诊断PCa的性能进行分析。结果尿T1E4 mR-NA/PSA mRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.802(95%CI:0.709～0.895),以0.007为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度分别为56.6%和94.6%。尿PCA3 mRNA/PSA mRNA比值诊断PCa的ROC曲线下面积(AUC)为0.646(95%CI:0.533～0.758),以0.001为截断值时,其诊断前列腺癌的敏感度和特异度为47.2%和73.0%。PCa组PCA3 mRNA(P=0.009)及T1E4 mRNA(P=0.000)的含量均高于BPH组,T1E4 mRNA联合PCA3 mRNA定量检测的敏感度为81.1%,比单独应用PCA3 mRNA和T1E4 mRNA检测的敏感度分别提高了33.9%和24.5%。结论前列腺癌按摩后尿沉渣中可以检测到TMPRSS2:ERG亚型T1E4 mRNA,联合PCA3 mRNA和T1E4 mRNA两个指标定量检测,可以显著提高检出前列腺癌的敏感度。此联合检测方法可以用于早期的前列腺癌诊断。; 戴美洁孔凡慧沈默周武陈伟吴秀玲翁志梁陶志华; 关键词：前列腺癌融合基因尿液

受体酪氨酸激酶基因及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达及意义被引量：1: 2011年; 目的探讨RONmRNA及其变异体在膀胱肿瘤组织中的表达与临床意义。方法选择63例膀胱移行上皮癌（TCCB）、7例膀胱内翻性乳头状瘤（IPB）、9例膀胱低度恶性潜能尿路上皮瘤（PUNLMP）患者和12例外伤性膀胱破裂且经病理证实无肿瘤细胞的正常膀胱黏膜组织患者。其中，病理Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ级患者分别为30、15和18例，临床Tis＋T1和T2＋t3＋T4期患者分别为44例和15例；用实时荧光定量RT-PCR检测其RONmRNA相对表达量，以GAPDHmRNA为内标物，用RONmRNA／GAPDHmRNA比值表示RONmRNA相对表达量；用RT—PCR检测RONmRNA选择性剪切形成的变异体；用测序检测PCR产物中可能存在的变异体，并分析变异体在不同组织问及TCCB中不同病理分级及临床分期间阳性表达率的差异。结果RONmRNA在TCCB、IPB、PUNLMP及正常膀胱黏膜组织中均见阳性表达，其RONmRNA／GAPDHmRNA比值分别为4．9×10^-3（1．8×10^-3-1．0×10^-2）、3．8X×10^-3（2．4×10^-3．1．7×10^-2）、4．9×10^-3（1．7×10^-3-1．1×10^-2）、1．0×10^-3（4．5×10^-4～2．8×10^-3），且不同组织间的表达差异均有统计学意义（zK.W^2=17．278，P〈0．05）；RONmRNA／GAPDHmRNA比值在TCCB病理Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ级分别为3．7×10^-3（1．3×10^-3～7．5×10^-3）、4．9×10^-3（1．9×10^-3～1．1×10^-2）、8．9×10^-3（2．7×10^-3-8．0×10^-2），且差异有统计学意义（xK.W^2=7．341，P〈0．05）；RONmRNA／GAPDHmRNA比值在TCCB临床Tis＋T1、他＋13＋T4期分别为3．5×10^-3（1．2×10^-3-7．7×10^-3）、9．7×10^-3（2．9×10^-3-5．3×10^-2），差异也有统计学意义（Z=-2．306，P〈0．05）。但正常膀胱黏膜组未发现RONretINA变异体，而在膀胱肿瘤组织中外显子11剪切缺失（E11△）的阳性表达率为70％（55／79）。在TCCB、IPB、PUNLMP中E11A阳性表达率分别为71％（45／63）、57％（4／7）、67％（6／9），而不同病理组织中的E11A阳性表达; 郭飞陈玉华刘永霞朱小丽陈伟胡王强陈占国沈默陶志华; 关键词：膀胱肿瘤受体蛋白质酪氨酸激酶类选择性剪接

PCA3基因启动子多态性快速分型的DHPLC法建立: 2010年; 目的建立DHPLC技术分析PCa特异性PCA3基因启动子多态性的技术平台。方法在PCA3基因启动子区域设计1对引物，以本室先前已经建立的11种（C2T6、C2T5、C3T5、C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）已知多态性的PCA3基因启动子的克隆质粒为标准品，通过优化DHPLC检测体系，建立其多态性克隆质粒的标准图谱。采用完全随机设计，从200例病理确诊为PCa患者中选取147例，对其PCA3基因启动子的扩增产物进行DHPLC分析，比较各标本洗脱峰与标准克隆质粒的DHPLC图谱，以判断临床标本PCA3基因多态性类型，并对这些基因型再行克隆测序予以验证。结果通过克隆质粒优化DHPLC检测体系，最适检测体系为：含44．3％A洗脱液（0．1mol／L TEAA、0．025％ACN）和55．7％B洗脱液（0．1mol／L TEAA、25％ACN）的起始洗脱梯度，含35．3％A洗脱液和64．7％B洗脱液的终止洗脱梯度，柱温53℃，流速：0．9ml／min，在该条件下DHPLC用8种杂合型克隆质粒（C2T5／C2T6、C3T5／C3T4、C3T5／C4T5、C3T5／C2T5、C3T5／C2T6、C3T5／C1T8、C2T5／C3T4、C2T6／C2T7）进行重复性验证，结果显示，同一多态性色谱峰中2峰的出峰时间之差的批间CV值在0％～6．67％之间。11种克隆质粒多态性标本仅通过1～2次洗脱，就能根据峰型和各峰的出峰时间将其区分开。147例PCa患者中，144例DHPLC检测结果和克隆测序结果一致（Kappa=1，P=0．000），并出现3种新的峰型，经克隆测序验证为3种新的多态性（C3T5／C1T6、C2T5／C1T8、C3T5／C2T7）。结论成功建立的DHPLC分析PCA3基因启动子多态性的技术方法，可对PCA3基因启动子多态性进行基因型别鉴定。该方法具快速、准确、经济、高通量、重复性好、自动化等特点，为进一步研究PCa基因多态性提供了技术平台。; 胡王强孔凡慧张晓霞周武陈兵华胡理怀陶志华; 关键词：前列腺肿瘤

PCA3(DD3)基因多态性与前列腺癌风险关系的研究被引量：2: 2009年; 目的:探讨PCA3基因多态性与前列腺癌遗传易感性的关系。方法:采用PCR和基因片段直接测序方法,分别检测41例前列腺癌(PCa)患者和40例良性前列腺增生(BPH)患者的PCA3外显子区域的SNP变异情况,分析PCA3基因多态性与PCa的相关性。结果:PCA3基因外显子2区域存在1个SNP位点(A164C),基因型分别为AA型、AC型、CC型;Logistic回归分析显示,AC、CC及AC+CC基因型是PCa的危险因子(OR值=6.171,95%CI=1.877-20.286;OR值=5.400,95%CI 1.421-20.518;OR值=5.891,95%CI=1.915-18.124),等位基因C是PCa的危险因子(OR值=2.353,95%CI=1.252-4.421)。结论:PCA3基因外显子2 SNP A164C多态性与PCa的发病风险高度相关,携带等位基因C的基因型是PCa的遗传危险因素。; 陈占国陶志华陈伟周武陈蕾; 关键词：前列腺癌 PCA3 基因多态性

前列腺癌标本库的初步建立及其应用价值被引量：3: 2011年; 目的有计划地建立前列腺癌标本库，摸索科研标本库建立和管理的合理操作流程，为系统开展前列腺癌研究打好基础。方法采集前列腺癌患者初诊和治疗随访过程中及前列腺增生患者的静脉血及尿液标本，处理得到各类标本保存于一80℃冰箱。获取患者新鲜组织标本，保存于液氮，并收集肿瘤组织石蜡标本保存。结果标本库共计纳入184例病理确诊的前列腺癌患者、294例前列腺增生患者及3例PIN患者，各类标本均按预期方案处理及保存。以标本库工作为基础，课题组进行了大量的科研工作，取得了一定成果。结论前列腺癌标本库建立的流程已基本成熟，初步建立的标本库能为各项研究提供标本和相关资料来源。; 沈默陶志华陈伟吴秀玲许刚胡王强张晓霞孔凡慧; 关键词：前列腺癌标本库数据库

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国家自然科学基金(30872421)

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