国家自然科学基金(30300097)
- 作品数：13 被引量：206H指数：4
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- 相关机构：第三军医大学新桥医院第三军医大学江西医学院第一附属医院更多>>
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- 基因电路研究进展被引量：1
- 2005年
- 将不同基因按一定规则连接在一起即构成基因电路(geneticcircuits),上游基因的蛋白产物调控下游基因的表达活性,环环相扣,从而完成特定的生物学功能。基因电路构成的基本原理是各种逻辑门(logicgate),最基本的两个逻辑门是“变极器”和“AND”,在此基础上可构成各种复杂的基因电路。BioSPICE软件是目前常用的一种基因电路设计程序,但其尚需进一步完善。“定向进化”(directedevolution)法是新近提出的一种基因电路设计方法。基因电路在未来的肿瘤诊治中将发挥重要作用。
- 王卫东陈正堂王志新
- 关键词：细胞
- 放射诱导HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达的研究被引量：5
- 2007年
- 目的构建放射诱导的同步放大基因电路,通过基因电路调控HSV-TK基因在肺癌细胞中靶向、高效性表达,以提高放射-基因治疗的有效性和靶向性。方法利用分子克隆的方法将HSV-TK基因插入到同步放大基因电路载体的下游,并采用脂质体介导重组载体和对照载体转染肺癌细胞A549;G418筛选阳性克隆,转染细胞给予2Gy X线照射后,检测照射前后不同时相点细胞内TK表达情况,及不同浓度前药GCV对转染重组载体和对照载体的肺癌细胞的生长抑制率。结果照射后转染同步放大重组载体的细胞内TK的表达明显强于对照组,且随时间的推移而逐渐增强,以照射后16h最为明显。同一浓度的GCV对转染同步放大载体的A549细胞的抑制率明显高于对照组和未转染组,IC50也明显低于对照组和未转染组。结论同步放大基因电路明显增强了靶细胞内HSV-TK基因的表达,进一步完善了放射-基因治疗这一新的肿瘤治疗模式。
- 康保国王卫东陈正堂李德志
- 关键词：肺肿瘤HSV-TK基因
- 缺氧反应元件对肺癌放射-基因治疗的乏氧增敏实验研究被引量：3
- 2004年
- 目的 实体瘤的缺氧微环境限制了放射 基因治疗的效果。本研究利用缺氧反应元件 (hypoxiaresponseelements,HREs)实现放射诱导及缺氧增强肿瘤坏死因子α(TNF α)表达 ,以提高乏氧实体瘤的放射 基因治疗效果。方法 将HREs与放射敏感性Egr 1启动子串联 ,构建缺氧 /辐射双敏感性HRE Egr启动子及其调控的TNF α表达载体 ,用脂质体介导该载体转染肺癌A5 4 9细胞 ,予以照射 (6Gy)和 /或缺氧 (1 %氧浓度 )处理后 ,ELISA法检测转染细胞TNF α表达水平。通过细胞剂量 存活曲线及其参数D0 值 ,计算氧增比 (OER)及增敏比 (SER)。建立裸鼠A5 4 9皮下移植瘤模型 ,计算 5 0 %肿瘤控制所需照射剂量 (TCD50 )及SER。结果 HREs可使缺氧下转染细胞照射后的TNF α表达水平较常氧条件下增加到 3.4倍 ,且转染组D0 (1 .341Gy)和OER(0 .81 )均显著低于对照组 (6 .1 72Gy ,2 .6 5 ) ,SER(4 .6 0 )则显著升高 (P <0 .0 1 )。两组皮下移植瘤亦有相似的改变。 结论 成功构建了缺氧 /辐射双敏感性HRE Egr启动子及其调控的TNF α表达载体 ,该载体转染的A5 4 9细胞及其移植瘤 ,均有显著的放射乏氧增敏作用。
- 王卫东陈正堂李德志段玉忠曹正怀
- 关键词：肺肿瘤缺氧反应元件
- 放射诱导抑瘤素M靶向肿瘤表达治疗肺癌实验研究
- 2004年
- 目的 利用放射敏感性调控序列诱导抑瘤素M (OSM )靶向肺癌表达 ,探索肺癌治疗新方法。方法 利用基因重组构建放射可调控的OSM表达载体 pEO ,转染肺腺癌A5 49细胞 ,观察γ线照射后细胞OSM表达及其对细胞相对存活分数和存活曲线的影响。利用肺癌移植瘤观察不同处理的抑瘤效应。结果 γ线可诱导OSM在pEO转染肺癌细胞表达显著上调 ,呈剂量依赖性。pEO转染肺癌细胞株对辐射敏感性增强 ,增殖活性显著受抑。 6Gy照射联合 pEO转染可显著抑制移植瘤生长 ,并可使 3 0 %的移植瘤完全消退。结论 由辐射敏感性启动子驱动的OSM肿瘤靶向性表达 ,可望为肺癌治疗提供一条新途径。
- 王卫东陈正堂李德志段玉忠曹正怀
- 关键词：肺肿瘤抑瘤素M
- 肿瘤缺氧及其靶向治疗研究进展被引量：7
- 2006年
- 缺氧微环境是多数实体瘤的固有特征之一,其主要机制在于肿瘤血管组织分布紊乱和结构异常。缺氧可引起细胞发生一系列适应性改变,包括无氧糖酵解的增强、保护性应激蛋白的表达提高等。研究证实,缺氧不仅导致辐射抗拒,尤其低传能线密度(LET)的照射,也是引起耐药及肿瘤扩散转移的重要因素。同时,缺氧正逐渐成为肿瘤治疗的一个特异性靶点,如缺氧特异性细胞毒药物、乏氧细胞放射增敏剂,以及利用缺氧诱导目的基因靶向肿瘤组织表达等均展现出可喜的应用前景。
- 陈文艳熊建萍
- 关键词：缺氧肿瘤放射疗法化学疗法
- Bcl-2/Bax比率与细胞“命运”被引量：175
- 2007年
- 凋亡过程的启动直接决定了细胞的"命运"。在细胞凋亡的两个进化保守的信号转导途径中,Bcl-2家族成员的构成比例是凋亡调控的关键因素,尤其是Bcl-2/Bax比率是启动细胞凋亡的"分子开关"。Bax和Bcl-2通过形成同源或异源二聚体来调节细胞凋亡:当Bax形成同源二聚体时诱导细胞凋亡;Bax与bcl-2形成异源二聚体时则抑制细胞凋亡。当某细胞系的所有细胞内异源二聚体(Bcl-XL/Bax和Bcl2/Bax)的含量≥50%时,细胞耐受凋亡;而当细胞内Bax同源二聚体>80%时,且在适当信号诱导下则细胞出现凋亡。细胞凋亡的数学模型认为,Bcl-2家族之促凋亡和抑凋亡成员的比率直接决定了线粒体外膜各种通道的开放程度,形成细胞凋亡调控的枢纽;故有学者认为Bcl-2/Bax比率是调控细胞死亡的"可变电阻器"(rheo-stat),在外界因素刺激下,细胞的生死最终取决于Bc-2和Bax两种调控因子的平衡结果。目前关于前列腺癌、直肠癌、白血病、宫颈癌等的临床研究均支持这一理论。
- 王卫东陈正堂
- 关键词：BCL-2BAX细胞凋亡
- 放射控导正反馈基因环路对肺癌wt-p53基因靶向性表达的研究被引量：3
- 2007年
- 目的构建pE_6R_4/p53/GFP重组质粒并检测其在人非小细胞肺癌H1299(p53—/—)细胞的辐射诱导表达。方法用嵌合型增强子E_6R_4取代pci-neo质粒的CMV增强子,将wt-p53cDNA全长序列、IRES_2-EGFP报告基因片段构建于嵌合型增强子E_6R_4下游,获得pE_6R_4/p53/GFP重组质粒,采用脂质体法将重组质粒转染人非小细胞肺癌H1299(p53—/—)细胞;采用RT-PCR方法鉴定wt-p53基因整合情况;Western-blot方法检测不同辐射剂量8mVX线照射后,被转染细胞中wt-p53蛋白表达水平和持续时间。结果酶切和测序鉴定pE_6R_4/p53/GFP重组质粒构建正确;不同剂量8mVX线照射后,4Gy照射剂量时wt- p53基因表达最强,且持续时间延长。结论成功将辐射反应元件和正反馈基因环路技术相结合,实现了wt-p53基因的表达调控,为进一步研究非小细胞肺癌的放射-基因联合治疗奠定了基础。
- 毛丽伟王卫东李德志陈正堂
- 关键词：X线非小细胞肺癌细胞
- 放射诱导的一氧化氮同步放大基因电路的构建及鉴定
- 2007年
- 背景与目的正反馈基因电路(gene circuits)对基因表达有放大作用,目的基因在细胞内的同步化表达可进一步增强基因治疗效果。本研究旨在构建由放射诱导的一氧化氮(nitric oxide,NO)同步放大基因电路,以探索提高目的基因表达水平、延长表达时间的新途径,从而进一步完善肿瘤放射基因治疗模式。方法将具有放射诱导性的c-fos启动子与诱导性一氧化氮合酶(inducible nitric oxide synthase,i NOS)串联,构建c-fos启动子驱动的i NOS和绿色荧光蛋白(green fluorescent protein,GFP)双顺反子表达载体pfos-i NOS/GFP;用脂质体介导该载体转染肺腺癌A549细胞,予以一定剂量照射,观察照射后不同时相点细胞荧光强度,检测i NOS蛋白表达水平。结果转染载体pfos-i NOS/GFP的细胞照射后细胞荧光强度、iNOS表达水平均较对照组明显增加,其中以照射后16h增加最为明显。结论成功构建了放射诱导的NO同步放大基因电路,大大提高了放射诱导的目的基因的表达水平,为进一步提高肿瘤放射基因治疗的疗效奠定了理论基础。
- 康保国王卫东陈正堂
- 关键词：一氧化氮
- 缺氧/辐射双敏感性启动子调控HSV-TK表达对肺癌移植瘤的作用被引量：11
- 2004年
- 背景与目的放射-基因治疗是近年来国际上肿瘤治疗的新策略,由于实体瘤常处于缺氧状态而对放射敏感性低,放射-基因治疗尚未达理想疗效。本研究拟构建缺氧/辐射双敏感性启动子,增强缺氧条件下放射诱导的HSV-TK表达水平,提高肺癌放射-基因治疗效果。方法利用基因重组构建HRE-Egr启动子及其调控的HSV-TK表达载体;脂质体介导重组质粒转染肺癌A549细胞,分为对照组、放射组(6Gy)、缺氧组(1%氧浓度)和放射合并缺氧组,Northernblot法检测转染细胞中HSV-TK表达,四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测放射、缺氧和GCV处理后的细胞存活率。建立BALB/c裸鼠肺癌移植瘤模型,检测放射合并质粒转染后移植瘤体积变化并计算抑瘤率。结果对照组细胞仅可检测到HyTK的低水平表达(21U),放射组和缺氧组HyTK基因表达水平均显著升高(分别为227U和94U),放射合并缺氧组(769U)显著高于放射组。在缺氧条件下,放射合并GCV处理后细胞存活率为(7.2±1.8)%,显著低于常氧组的(32.7±4.6)%。放射联合GCV可明显抑制HRE-Egr启动子转染肺癌移植瘤,抑瘤率达91.2%。结论HRE-Egr启动子具有辐射/缺氧双重敏感性,并使放射后的HSV-TK表达水平在缺氧下得到显著增强。放射联合HRE-Egr启动子可显著抑制肺癌移植瘤的生长。
- 王卫东陈正堂李德志段玉忠王志新曹正怀
- 关键词：肺肿瘤缺氧反应元件
- 基因电路研究现状及面临的问题
- 2007年
- 将不同基因按一定规则连接在一起即构成基因电路(Genetic circuits),上游基因的蛋白产物调控下游基因的表达活性,环环相扣,从而完成特定的生物学功能。通过构建基因逻辑电路并导入细胞,可以扩展和修饰细胞行为。迄今已构建了自抑制子(Autorepressor)、套环开关(Toggle-switch)、振动子(Oscillator)等原型基因电路。目前主要采用推理法和定向进化法设计和验证基因电路。类似目前的计算机编程,将来我们可随意设计细胞行为。
- 王卫东陈正堂
