国家重点基础研究发展计划(2002CB513208)
- 作品数：4 被引量：7H指数：2
- 相关作者：王希良董梅张松乐杨海荣张良艳更多>>
- 相关机构：军事医学科学院西北农林科技大学银川市第一人民医院更多>>
- 发文基金：国家重点基础研究发展计划更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学更多>>
- 炭疽AVA疫苗特异性抗体分泌细胞检测方法的建立被引量：1
- 2007年
- 目的 应用酶联免疫斑点（ELISPOT）技术,建立一种检测炭疽AVA免疫后特异性抗体分泌细胞的方法,用于检测和评价炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体形成细胞的功能.方法 无菌分离小鼠脾细胞,建立一系列特异性ELISPOT检测炭疽无菌培养滤液抗原特异性抗体分泌细胞的参数：包括抗原最佳包被浓度、细胞最适孵育时间、反应体系中细胞浓度以及亲和素抗体工作浓度的确定,同时检测上清中抗体效价,并以不相关抗原包被,检验方法的敏感性和特异性.结果 当抗原包被浓度为7.5μg/mL时,不同细胞浓度反应曲线最稳定 细胞数为5×10^6/mL时,不同包被浓度形成的斑点数适量,易于计数 且在抗体稀释度相同情况下,脾细胞孵育时间为3～6 h所获得的斑点数最清晰,背景着色最浅,容易被仪器识别 同时,特异性抗原包被组所获得的斑点频数高于无关抗原包被组（P＜0.01） 反应体系上清中未检测到抗原特异性抗体.结论 该方法敏感、特异,可用于AVA抗原免疫后体液免疫评价.
- 吕进张松乐董梅何蕊江海燕张良艳邢丽杨海荣王希良
- 炭疽芽孢杆菌PA蛋白的表达及免疫保护效果研究被引量：2
- 2006年
- 扩增了炭疽芽孢杆菌PA基因,构建了原核表达质粒pET-28a-PA,并对其进行了诱导表达,对表达产物免疫原性和免疫保护效果进行了研究。结果表明,PA基因的长度约为2 205 bp,PA蛋白的相对分子质量为83 ku;rPA蛋白具有良好的免疫原性,初免后10 d即可检测到特异性抗体,第3次免疫后抗体水平明显升高,可达1∶12 800;rPA蛋白刺激小鼠产生的特异性抗体亚型以IgG 1为主;rPA蛋白在体外对小鼠脾脏细胞有促进生长和增殖作用。rPA免疫组小鼠脾脏中CD4+细胞显著增加,免疫应答趋向T h2型反应,说明rPA介导的免疫反应以体液免疫为主。rPA具有一定的免疫保护作用,保护率达到50%。
- 谢应国吴秀芳武素琴王希良何维明
- 关键词：炭疽芽孢杆菌保护性抗原免疫基因工程疫苗
- 炭疽杆菌培养上清液抗原的制备及免疫保护效果测定被引量：4
- 2006年
- 目的制备炭疽培养上清液抗原并对其免疫效果进行测定。方法将炭疽A16r菌种接种于培养基中培养,收集无菌滤液,并进行超滤浓缩,经Al(OH)3佐剂吸附后,皮下免疫Balb/c小鼠,用炭疽Vollum(s)强毒株腹腔攻击测定其免疫效力。结果制备出具有高保护性的上清液抗原,9 h产物对Balb/c小鼠免疫效果良好(94.4%)。结论本研究为进一步研究炭疽疫苗免疫保护机制和炭疽疫苗改进研究打下基础。
- 董梅马丽娟张松乐张良艳郭习勤邢丽杨海荣王希良
- 关键词：炭疽杆菌培养上清液
- 炭疽芽孢杆菌A16R株无菌培养滤液的蛋白质组学分析
- 2009年
- 目的:初步分析由我国炭疽疫苗株A16R所生产的无菌培养滤液中的主要成分。方法:运用免疫蛋白质组学的手段,从炭疽A16R疫苗株无菌培养滤液的二维凝胶电泳中选择与保护性抗体结合和不与该血清结合但丰度高的蛋白质点,进行质谱鉴定和信号肽分析。结果:共选择73个点,从炭疽芽孢杆菌数据库中鉴定出66个。在66个点中,有43个点与保护性血清结合;23个为高丰度蛋白,不与该血清结合。在与保护性血清结合的43个点中,13个点为不同大小的PA分子,其中相对分子质量83×103和63×103占主导,相对分子质量较小的片段仅4个。其余成分包括炭疽表面蛋白EA1、Sap、胶原黏附蛋白、伴侣分子DnaK等。结论:我们制备的炭疽无菌培养滤液中含有PA成分,PA是炭疽疫苗的重要保护性抗原。但PA以外的其他成分在抗炭疽免疫中起何种作用,是否参与诱发机体免疫应答有待进一步研究。
- 董梅庄汉澜王希良
- 关键词：炭疽炭疽疫苗二维凝胶电泳
