中医药行业科研专项(201107011)
- 作品数：14 被引量：181H指数：7
- 相关作者：魏建和隋春徐洁森孙晶陶韵文更多>>
- 相关机构：中国医学科学院北京协和医学院教育部东北林业大学更多>>
- 发文基金：中医药行业科研专项国家自然科学基金北京市自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生农业科学生物学更多>>
- 北柴胡细胞色素P450酶基因的克隆及其植物过量表达载体的构建被引量：5
- 2012年
- 目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的细胞色素P450酶基因,构建其过量表达载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序获得5'和3'端部分cDNA序列的基础上,利用LD-PCR方法获得全长cDNA,根据全长cDNA序列设计含有酶切位点的PCR引物,利用高保真酶,以RNA反转录产物为模板PCR扩增细胞色素P450酶基因的开放读框,扩增产物与pEASY-T1 Simple载体连接,转化大肠杆菌DH5α;重组质粒pT1-P450经菌液PCR和酶切方法验证后测序,采用NCBI在线Blastx、DNAman和MEGA4软件对序列进行生物信息学分析,随后将pT1-P450的酶切产物插入双元载体pCAMBIA-SUPER 1300,菌液PCR和酶切验证重组质粒p1300-P450。结果:扩增到了北柴胡细胞色素P450酶基因BcCYP87E,构建了这一基因的过量表达载体。结论:细胞色素P450酶基因的克隆和转基因载体的构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。
- 徐洁森魏建和赵立子隋春徐艳红
- 关键词：北柴胡细胞色素P450酶基因克隆植物表达载体
- 植物细胞色素P450在三萜皂苷生物合成中的功能研究进展被引量：12
- 2012年
- 三萜皂苷是许多药用植物的药效成分,其生物合成通常可分为前体形成、骨架构建以及后修饰3个部分。后修饰过程是植物调控形成众多种类单体皂苷的重要过程,其机制至今尚未完全阐明。植物细胞色素P450是由少数几个超基因家族编码的,参与多种生物过程,包括三萜皂苷次生代谢的后修饰过程。目前,已在少数植物中克隆到了催化个别单体皂苷生物合成的P450基因,其功能研究取得了一定进展。将就此进行综述,为进一步开展相关研究提供借鉴。
- 徐洁森魏建和陶韵文孙晶隋春
- 关键词：三萜皂苷生物合成细胞色素P450基因克隆
- 不同种质黄芩中黄酮类成分测定及分析被引量：9
- 2016年
- 目的:对不同种质黄芩中3种黄酮类成分和总黄酮进行测定和综合评价,为遴选黄酮类成分含量高的黄芩种质提供依据。方法:采用改进的高效液相色谱法测定不同种质黄芩根中黄芩苷、黄芩素和汉黄芩素的含量,采用UV-可见分光光度法测定总黄酮含量,应用主成分分析和灰色模式识别法验证并综合评价不同种质黄芩的化学质量。结果:黄芩苷、汉黄芩素及总黄酮含量在不同种质间差异显著,其中13号黄芩种质黄芩苷和总黄酮含量最高,1号、7号黄芩种质黄芩苷、黄芩素与总黄酮含量均较高。主成分分析和灰色模式识别法分析结果验证了本次试验中1号、7号、13号为优良种质,可以作为黄芩新品种选育对象。结论:采用改进后的HPLC法可较好地测定黄芩3种黄酮类成分,不同种质黄芩中黄酮类成分含量均存在显著差异;应用主成分分析和灰色模式识别法均遴选出了目标种质,该方法适用于不同种质药材质量的综合评价。
- 高晓霞徐荣陈君于晶杨成民刘赛张永清彭艳丽
- 关键词：黄芩黄酮类成分主成分分析
- 3种甘草种质在甘肃民勤种植适宜性研究
- 2012年
- 为了解种质对甘草生物学特性和主要有效成分含量的影响,研究3种甘草种质在甘肃民勤的种植适宜性及其生物学特性,并检测其甘草酸、甘草苷含量。结果表明,3种甘草中胀果甘草在株高、地上部分鲜重、口径粗度、尾径粗度、根径鲜重方面均为最高且其甘草酸含量最高;甘草的条形要好于另外2种甘草,甘草苷含量最高,且甘草的2种有效成分含量达标率最高。因此,在甘肃民勤,胀果甘草亩产量比较高,甘草酸含量较高但甘草苷含量较低,可用于种植提取甘草酸,甘草的甘草酸含量和甘草苷含量较高,符合药典标准,且条形较好,可用于传统饮片生产。
- 邓庭伟周应群张志梅曹海禄朱希玉陈芳田壮汪维云赵润怀
- 关键词：甘草适宜性
- 中药材产地加工过程传统与现代干燥技术方法的分析评价被引量：82
- 2013年
- 中药材产地加工是中药材生产过程的重要组成部分,不仅是为了干燥后有利于运输和贮藏,更是依据各中药材不同理化性质而采用不同的加工方法,以促使其与功效相关的化学物质发生化学转化与生物转化,形成和赋予中药材所特有的药性的过程。因此,先贤们在长期的生产实践中形成了各式各样的中药材产地加工干燥技术和方法,并被现代研究证实这些传统加工技术方法大多是科学合理和适宜的。然而,随着中药材生产过程工业化程度的不断提升,如何建立科学合理、集约高效的适宜干燥技术方法和设备,是实现中药材产地加工规范化、规模化的关键科学问题。本文是在对我国目前中药材产地加工现状深入调查研究的基础上,结合相关领域现代干燥技术进行分析和评价,提出中药材产地加工科学的评价方法和适宜的技术体系,为推进我国中药材产地加工过程的规范化和标准化作出应有的贡献。
- 赵润怀段金廒高振江曾燕钱大玮宿树兰周海燕
- 关键词：中药材分析评价
- 北柴胡UGT基因的克隆及其过量表达和RNAi转基因载体的构建被引量：8
- 2012年
- 目的:克隆北柴胡中可能参与柴胡皂苷生物合成的UGT基因,构建其过表达和抑制表达的转基因载体,为通过转基因验证其功能奠定基础。方法:在454高通量测序已获得部分cDNA序列基础上,通过RACE和LD-PCR方法扩增全长cDNA克隆。设计含有酶切位点的PCR引物,PCR扩增UGT基因的ORF和部分片段后,酶切,分别插入到pCAMBIA-SUPER1 300和pHANNIBAL中。重组的pHANNIBAL经Not I酶切后插入到pART27中。最终以构建出过表达和抑制表达的转基因载体。结果:扩增到了北柴胡1个UGT基因全长cDNA克隆,构建了这一基因的过表达和抑制表达转基因载体。结论:通过UGT基因的全长cDNA克隆和转基因载体构建,为后续开展转基因研究,验证其生物功能奠定了基础。
- 隋春徐洁森赵立子魏建和徐艳红孙鹏
- 关键词：北柴胡转基因载体
- 植物皂苷生物合成中UGT功能研究进展被引量：3
- 2013年
- 植物皂苷(Saponins)是广泛存在于绝大多数植物体中不可或缺的一类次生代谢产物。其中多种植物皂苷具有重要的药理活性。尽管皂苷的生物合成途径还未彻底解析,但近年来,皂苷生物合成途径研究,尤其是合成途径下游多基因家族编码酶催化的反应,取得了很大进展。目前,已在个别植物中克隆到了催化个别单体皂苷生物合成的UGT基因,其功能研究取得了一定进展。本文就皂苷合成途径下游催化皂苷元糖基化的糖基转移酶基因克隆和功能研究做一综述,为加快皂苷生物合成途径的解析提供借鉴。
- 陶韵文徐洁森孙晶魏建和隋春刘娟
- 关键词：生物合成基因克隆晶体结构
- 黄芩药材主、侧根中黄酮类成分含量的比较及其相关性研究被引量：11
- 2011年
- 目的:分析比较黄芩药材主、侧根中黄酮类成分的含量,并对其相关性进行研究,为黄芩品种系统选育过程中为了使主根继续繁殖以保存优良种质,而采用侧根估测整体的黄酮类成分含量提供理论依据。方法:以黄芩中5个主要的黄酮类成分黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、汉黄芩素和千层纸素A为指标,采用高效液相色谱法对黄芩药材主、侧根中5个黄酮类成分的含量进行测定,并对侧根与整体中的黄酮类成分含量进行相关与回归分析。结果:黄芩主根上部、主根下部、侧根及整体中的黄芩苷、汉黄芩苷含量无显著性差异,主根下部的黄芩素、汉黄芩素及千层纸素A含量与主根上部差异显著;侧根中只有汉黄芩素的含量与整体存在显著性差异,其余均无统计学差异。相关与回归分析显示,侧根与整体之间各成分均呈显著的正相关,除汉黄芩素的决定系数较小外,其余化学成分均较高。结论:黄芩药材主、侧根中的黄酮类成分含量分布较均匀,在黄芩品种系统选育过程中为了使主根继续繁殖以保存优良种质,可采用侧根估测黄芩整体的黄酮类成分含量。
- 李凤魏胜利王文全
- 关键词：黄芩主根侧根黄酮类成分
- 北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1的表达分析及其原核表达与蛋白纯化被引量：6
- 2013年
- 本研究分析了北柴胡糖基转移酶基因BcUGT1 ORF序列,预测了其蛋白三维结构,利用qRT-PCR分析了BcUGT1的茉莉酸甲酯诱导表达和组织表达特性。结果表明,BcUGT1可能参与柴胡皂苷生物合成。随后,构建了BcUGT1原核表达载体,成功诱导出目标蛋白,并进行了纯化。原核表达实验中共采用了3种载体:pRSET-A、pET-28a(+)和pET-30a(+),3种宿主菌:BL21(DE3)plysS、BL21A1和BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL,进行了不同诱导条件的探索,包括不同诱导物(L-阿拉伯糖和IPTG)的不同浓度、不同诱导时间和温度,结果以pET-28a(+)和pET-30a(+)为载体,BL21-CodonPlus(DE3)-RIPL为宿主菌,0.5或1 mmol.L 1IPTG,16℃,20 h为条件,诱导出目标蛋白。利用PrepEase His标签蛋白纯化试剂盒,纯化获得了目标蛋白,为后续开展BcUGT1基因的功能研究奠定了基础。
- 陶韵文徐洁森魏建和孙晶徐艳红杨欣张岩刘娟隋春
- 关键词：北柴胡原核表达蛋白纯化
- 不同品系黄芩主要表型性状的差异与相关分析被引量：7
- 2016年
- 探讨不同品系黄芩表型性状的差异与相关性。比较了14个黄芩品系的10个地上部性状和6个根部性状,并运用SPSS 17.0统计软件对数据进行方差分析、相关分析和主成分分析。结果表明不同品系黄芩的表型性状变异十分丰富,多样本方差分析显示F为3.169-71.58,差异显著,参比品系中性状表现最优良的是15号。相关分析显示,除侧根数、根粗、根长外,其余性状之间均存在显著相关性,芦头直径与根鲜重存在极显著性相关,相关系数高达0.877。主成分分析表明黄芩单株整体产量和根粗可作为优良品种选育的综合参考指标。不同品系黄芩的主要表型性状存在显著差异及相关性,可为黄芩品系的性状特征区分、评价及优良品种选育提供理论依据。
- 高晓霞陈君徐荣于晶杨成民彭芳张永清彭艳丽
- 关键词：黄芩表型性状主成分分析
