杭州市科技发展计划项目(20070132N09)
- 作品数：2 被引量：22H指数：2
- 相关作者：刘超赵芸柳爱春徐晓丹张乐更多>>
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- 双重一步法RT-PCR检测2种主要兰花病毒被引量：6
- 2009年
- [目的]研究建兰花叶病毒(CymMV)和齿兰环斑病毒(ORSV)双重一步法RT-PCR检测方法,为病毒的早期快速诊断提供技术支持。[方法]根据2种病毒的外壳蛋白基因的保守序列分别设计两对特异性引物,并进行双重与单一RT-PCR对比试验。[结果]结果在健康蜘蛛兰被人工接种病毒后第10天和第21天用一步法RT-PCR方法分别获得CymMV和ORSV与预期相符的约764和946 bp扩增产物条带;且双重一步法RT-PCR产物经琼脂糖凝胶电泳后,出现两条与单一RT-PCR产物相对应的清晰条带,获得较理想的检出效果;扩增产物的核酸序列经BLAST分析,同源性均在85%以上,证实了检测结果的准确性。[结论]该方法具有更加灵敏、特异、快速和简便的特点,适合于两种主要兰花病毒的同时快速检测。
- 柳爱春赵芸刘超张乐
- 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒
- 利用ELISA检测两种兰花病毒的研究被引量：16
- 2009年
- 建立了三抗夹心酶联免疫吸附法(TAS-ELISA)检测建兰花叶病毒(Cymbidium mosaic virus,CymMV)和双抗夹心酶联免疫吸附法(DAS-ELISA)检测齿兰环斑病毒(Odontoglossum ringspot virus,ORSV)的方法。共检测了浙江省内139个兰科样品和8个百合科样品,结果表明有31.7%的兰花检出CymMV,有28.8%的兰花检出ORSV。根据病毒外壳蛋白基因上下游保守序列设计了检测ORSV的引物,参照周国辉报道设计了检测CymMV的引物并对人工接种两种病毒的兰花进行了逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测,结果表明,RT-PCR检测结果与ELISA结果相一致,进一步证实本研究建立的TAS-ELISA,DAS-ELISA方法稳定可靠,重复性好,可应用于兰花上CymMV和ORSV两种病毒的早期诊断和检测。
- 柳爱春刘超赵芸徐晓丹
- 关键词：建兰花叶病毒齿兰环斑病毒TAS-ELISADAS-ELISA一步法RT-PCR
