山东省自然科学基金(ZR2010HQ047)
- 作品数：3 被引量：14H指数：1
- 相关作者：刘玉庆白华胡明李靖冉齐静更多>>
- 相关机构：山东大学青岛农业大学山东省农业科学院更多>>
- 发文基金：山东省自然科学基金国家自然科学基金山东省优秀中青年科学家科研奖励基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 药敏试验方法的局限性及改进的建议被引量：13
- 2011年
- 以CLSI提出的两种细菌药敏试验方法(纸片扩散法和肉汤稀释法)和对"breakpoint"标准的拟定为例,基于菌群生长动力学和临床对抗菌药物选择的需要,分析现行药敏试验存在的问题,并就病原菌的生态学、breakpoint制定、药敏试验方法的规范和抗药性网络建设等方面提出建议。
- 刘玉庆张怀强胡明赵越白华金建玲高培基
- 关键词：药敏试验抗药性耐药性BREAKPOINT
- 大肠埃希菌过表达lexA基因对恩诺沙星杀菌力和抗药性突变的影响被引量：1
- 2013年
- 目的构建过表达SOS阻遏蛋白编码基因lexA的大肠埃希菌菌株,研究SOS应答对恩诺沙星抗药性突变的影响,并建立SOS应答抑制剂筛选平台。方法构建lexA重组表达质粒pET-22b(+)-lexA,转化大肠埃希菌BL21(DE3)构建重组质粒菌株BL21-lexA,用IPTG诱导BL21-lexA过表达lexA,通过SDS-PAGE和Western blot鉴定LexA蛋白,用荧光定量PCR测定SOS应答基因recA和umuC表达变化;然后用恩诺沙星梯度平板测定恩诺沙星对BL21-unmodified(空质粒菌株)和BL21-lexA的抑菌活性和抗药性突变率。结果重组质粒菌株BL21-lexA在IPTG诱导下过表达LexA,抑制recA和umuC表达,提高了大肠埃希菌对恩诺沙星的敏感性,降低了抗药性突变率。结论通过IPTG诱导BL21-lexA过表达LexA蛋白,能构建稳定的SOS应答抑制模型,用于筛选SOS抑制剂,提高恩诺沙星杀菌力和降低抗药性突变。
- 牛卫卫白华王进文颜世敢齐静骆延波李璐璐贾纪美李靖冉黄娟单虎刘玉庆
- 关键词：LEXA大肠埃希菌恩诺沙星
- 利用重建祖先基因方法研究连续诱导培养大肠杆菌对恩诺沙星抗药性突变的规律
- 2012年
- 目的研究大肠杆菌对氟喹诺酮抗药性突变的规律及基因型与表型的对应关系。方法以质控菌株Escherichia coli ATCC 25922为初始菌株,恩诺沙星浓度由0.031 25μg/mL增加到128μg/mL,分步诱导得到13株稳定的抗药性菌株,检测氟喹诺酮靶酶基因gyrA、gyrB和parC、parE的序列及其突变位点,检测恩诺沙星的最低抑菌浓度(MIC)及抑制外排泵后MIC,分析抗药性表型与基因型、蛋白结构、外排泵及生化特性的关系。结果低浓度氟喹诺酮可诱导GyrA的Ser83-Leu和ParC的Glu84-Lys单一位点突变,致低水平抗药性,而Ser83-Leu逐步与Asp87-Gly、Glu84-Lys组合,导致氟喹诺酮突变决定区突变位点氨基酸的极性、空间位阻变化,影响靶蛋白与DNA和恩诺沙星的结合,可致高水平抗药性。外排泵与基因突变共同作用,使细菌耐受逐步升高药物浓度,M IC基本平行高出培养浓度1倍。结论增加恩诺沙星的使用剂量,能诱导高抗菌株产生,恩诺沙星抗药性表型与基因型具有对应关系和规律性变化。
- 魏甜甜白华李靖冉胡明齐静袁首道张乐萃刘玉庆
- 关键词：大肠杆菌连续传代点突变
