北京市自然科学基金(7102034)
- 作品数：5 被引量：5H指数：2
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- 相关机构：首都医科大学潍坊医学院中国科学院更多>>
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- Met-RANTES在rd小鼠遗传性视网膜变性中的作用
- 2014年
- 目的研究CC趋化因子拮抗剂Met-RANTES对rd小鼠视网膜外核层形态的影响,探讨其在rd小鼠遗传性视网膜变性中的潜在治疗作用。方法以出生后7d rd小鼠作为研究对象,随机分为5组,分别给予腹腔注射Met-RANTES、PBS和玻璃体腔注射不同浓度Met-RANTES、PBS,直到rd小鼠出生后14d,过量麻醉法处死后摘取眼球制作冰冻切片,HE染色后观察测量视网膜后极部外核层厚度。结果腹腔注射met^RANTES、玻璃体腔注射0.7μl Met-RANTES rd小鼠与对照小鼠视网膜外核层细胞层数无明显变化(P>0.05)。玻璃体腔注射1.0μl Met-RANTES和1.5μl Met-RANTES眼球视网膜外核层比对照眼球视网膜外核层厚,有统计学差异(P<0.05)。结论 CC趋化因子拮抗剂Met-RANTES对rd小鼠遗传性视网膜变性可能存有潜在治疗作用。
- 陈星星曾惠阳刘谦卢清君唐胜建
- 关键词：视网膜变性小鼠
- β趋化因子受体CCR1在遗传性视网膜变性小鼠视网膜中的表达
- 2013年
- 目的探讨β趋化因子主要的受体之一β趋化因子受体1(CCR1)在视网膜变性模型小鼠(rd小鼠)的视网膜变性过程中的表达及其在感光细胞凋亡中的病理作用。设计实验研究。研究对象出生后8、10、12、14、16及18天的rd小鼠各10只(共60只)及同龄C57BL/6N对照小鼠各10只(共60只)。方法小鼠断颈处死,取双眼眼球制作冰冻切片或分离新鲜视网膜组织。逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)测定各鼠龄rd小鼠及对照鼠视网膜CCR1mRNA的表达水平。免疫组织化学法观察CCR1蛋白在各鼠龄rd小鼠视网膜的定位表达。CCR1在感光细胞及凋亡细胞中的表达由免疫荧光双标法确定。主要指标视网膜CCR1mRNA及蛋白的表达、CCR1的细胞定位及与凋亡细胞的关系。结果 CCR1mRNA在对照组及各鼠龄rd小鼠视网膜中均有表达,但在出生后12、14天rd小鼠视网膜中表达明显升高(光密度值分别为0.986±0.17和1.152±0.22,P=0.010和0.008)。CCR1阳性染色细胞开始出现于出生后8天的rd视网膜外核层,并于12及14天达到高峰。对照组视网膜外核层无CCR1阳性染色。CCR1与视紫红质、CD11b或TUNEL染色免疫荧光双标结果显示,CCR1表达于感光细胞而非小胶质细胞中,部分CCR1表达于凋亡的感光细胞中。结论在rd小鼠视网膜中CCR1表达于感光细胞并随其变性程度加重表达升高。CCR1的活化可能在rd小鼠感光细胞凋亡中发挥作用。(眼科,2013,22:383-388)
- 曾惠阳陈星星唐胜建卢清君刘谦
- 关键词：小胶质细胞感光细胞凋亡RD小鼠
- β趋化因子通过小胶质细胞活化引起小鼠感光细胞凋亡的实验研究被引量：1
- 2017年
- 目的观察β趋化因子对小鼠小胶质细胞的活化及诱导感光细胞凋亡的作用。设计实验性研究。研究对象β趋化因子、小鼠BV-2小胶质细胞系及661w感光细胞系。方法将β趋化因子(RANTES、MIP-1α及MIP-1β)加入到BV-2细胞中,观察BV-2细胞活化反应。然后将被激活的BV-2细胞培养液上清加入661w细胞中,观察661w的凋亡情况。或将β趋化因子直接加入到661w细胞中,观察其凋亡情况。事先加入β趋化因子抑制剂met-RANTES后,重复上述操作。主要指标钙内流、ROS及NO的产生、TUNEL阳性感光细胞百分比。结果β趋化因子加入BV-2细胞后,细胞内钙流曲线明显上升、细胞外ROS及NO产生较对照组均明显增高(P<0.01);将激活后的BV-2细胞上清加入到661w细胞中,后者凋亡率增加30%。β趋化因子直接加入661w细胞中,上述指标无明显变化。在加入β趋化因子之前先加入其抑制剂met-RANTES,BV-2细胞的ROS产生较未加抑制剂组明显降低(P<0.01)、NO产生较未加抑制剂组降低(P=0.0187),661w细胞凋亡明显减少。结论β趋化因子可活化小鼠小胶质细胞导致感光细胞凋亡。β趋化因子抑制剂可抑制遗传性视网膜变性小鼠小胶质细胞活化,保护感光细胞。
- 刘谦陈艳王沿强曾惠阳
- 关键词：小胶质细胞感光细胞
- NADPH氧化酶在rd小鼠遗传性视网膜变性中的活化表达被引量：2
- 2014年
- 背景研究表明，小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在中枢神经系统神经元损伤及神经变性疾病中发挥重要作用。已有研究证实NADPH氧化酶在rd小鼠视锥细胞退行性改变中的作用，但关于其在rd小鼠视网膜变性早期视杆细胞病变过程中的作用研究较少。目的研究NADPH氧化酶在rd小鼠感光细胞凋亡过程中的活化表达，探讨其在遗传性视网膜变性中的致病作用。方法取出生后8、10、12、14、16、18d的rd小鼠各18只，过量麻醉法处死后提取视网膜总RNA和总蛋白，并制备视网膜切片，分别用实时荧光定量PCR及Western blot法测定在rd小鼠感光细胞凋亡过程中视网膜中NADPH氧化酶亚单位gp91phox mRNA及蛋白的定量表达变化；采用免疫组织化学及gp91phox和CD11b免疫荧光双染法确定gp91phox在不同鼠龄rd小鼠视网膜中的表达及定位，并与其近交系C57BL／6N小鼠进行比较。结果实时荧光定量PCR研究证实，C57BL／6N小鼠视网膜中未见gp91phox mRNA的表达，而生后8d的rd小鼠视网膜中即有少量gp91phox mRNA的表达，随着鼠龄的增加，gp91phox mRNA表达量（gp91phox mRNA／β-actin）逐渐增加，生后14d达到高峰。不同鼠龄rd小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量差异有统计学意义（F=17．81，P=0．00）；生后10、12、14、16、18d的Td小鼠视网膜中gp91phox mRNA表达量均明显高于出生后8d小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．05），以出生后14d表达量最高，为1．136±0．370。随着小鼠鼠龄的增加，视网膜中gp91phox蛋白表达量（A值）与其基因表达变化趋势一致，不同鼠龄及C57BL／6N对照小鼠间视网膜中gp91phox蛋白表达的差异有统计学意义（F=354．00，P〈0．01），不同鼠龄rd小鼠出生后视网膜中gp91phox蛋白表达量均明显高于C57BL／6N对照小鼠，差异均有统计学意义（均P〈0．05）。免疫组织化学法检测表明，rd小
- 陈星星唐胜建邵长君刘谦卢清君曾惠阳
- 关键词：视网膜变性小胶质细胞RD小鼠
- NADPH氧化酶抑制剂对遗传性视网膜色素变性感光细胞凋亡的抑制作用被引量：2
- 2014年
- 背景 我们先前的研究表明,rd小鼠遗传性视网膜色素变性（RP）过程中小胶质细胞活化与感光细胞的凋亡密切相关.研究显示,小胶质细胞中烟酰胺二磷酸腺苷（NADPH）氧化酶的活化在小胶质细胞活化及神经元损伤中发挥重要作用,但NADPH氧化酶在RP过程中作用机制及其抑制剂的作用有待探讨.目的 探讨rd小鼠发生RP过程中NADPH氧化酶产生活性氧簇（ROS）的活化反应及其抑制剂对感光细胞的保护作用. 方法 按抛掷硬币法将60只SPF级rd小鼠随机分为香荚兰乙酮注射组和PBS对照组,香荚兰乙酮注射组小鼠于出生后9d（P9）腹腔内注射NADPH氧化酶抑制剂香荚兰乙酮10 mg/kg（0.01 ml/kg）,每日1次,连续5d（至P13）;PBS对照组rd小鼠以同样方式注射等容量的PBS;C57 BL/6N小鼠10只不注射任何药物作为rd小鼠的野生对照鼠.各组小鼠于出生后14 d（P14）处死并制备视网膜冰冻切片,采用二氢乙锭（DHE）荧光染色法检测3个组小鼠视网膜中ROS的表达;采用实时定量PCR（real-time PCR）法测定2个组rd小鼠视网膜感光细胞中视紫红质mRNA的定量表达;采用苏木精-伊红染色法检查2个组rd小鼠视网膜外核层厚度.结果 DHE荧光染色表明,小鼠视网膜中ROS表达呈红色荧光,注药组小鼠视网膜外核层中ROS的红色荧光明显强于C57BL/6N野生鼠,但明显弱于PBS对照组.Real-time PCR检测表明,香荚兰乙酮注射组小鼠感光细胞中视紫红质mRNA相对表达量为4.21 ±0.33,明显低于PBS对照组的0.93±0.24,差异有统计学意义（t=2.360,P=0.000）;香荚兰乙酮注射组小鼠视网膜外核层厚度为（35.95±1.63） μm,明显厚于PBS对照组的（23.17±1.38） μm,差异有统计学意义（t=3.850,P=0.016）.结论 在rd小鼠视网膜感光细胞变性过程中,NADPH氧化酶生成ROS的活化反应明显增强;香荚兰乙酮能够延缓rd小鼠感光细胞的凋亡过程.
- 丁敏卢清君武坤邓爱军曾惠阳
- 关键词：视网膜变性遗传性RD小鼠小胶质细胞
