常州市卫生局重大招标项目(ZD200709)
- 作品数：6 被引量：30H指数：3
- 相关作者：罗光华张俊徐宁张晓膺徐敏更多>>
- 相关机构：苏州大学附属第三医院瑞典隆德大学常州市第一人民医院更多>>
- 发文基金：常州市卫生局重大招标项目国家自然科学基金江苏省自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- 单核苷酸多态性的碱基淬灭探针技术检测方法的建立被引量：13
- 2009年
- 目的研发建立1种成本低、效率高、操作简便的单核苷酸多态性（SNP）检测技术。方法参照待测SNP所在DNA序列，设计并合成引物及探针。探针的一端标记6-羧基荧光素，依据碱基淬灭荧光的原理，应用PCR技术结合熔解曲线的方法进行SNP分型。同时通过建立检测载脂蛋白M（apolipoprotein M，apoM）基因T-778C多态性位点（rs805296）、磷脂酶A2（PLA2G7，rs1051931和rs1805017）、单核细胞趋化蛋白（MCPI，rs1024611）和L-ficolin（rs3124953、ss32469537、ss32469544和m7851696）等8个多态性位点的方法阐明碱基淬灭探针技术的工作原理；并用DNA测序技术鉴定其准确性。结果8个SNP均只需1对引物和1个单荧光基团标记的探针即可成功进行基因分型，整个实验可在60-90min内完成检测；目的基因不同等位基因的纯合子在2个不同的熔解温度出现熔解曲线谷。4种碱基淬灭探针中G．淬灭探针的最大荧光增加速度[Max（dF／dT）]约为A、T、C淬灭探针的1／2（t=7．569、7．726、10．36，P〈0．01）；一致性Kappa检验显示，4种碱基淬灭探针检测SNP方法与DNA测序技术的检测结果一致（Kappa=1；P=0．00）。结论碱基淬灭探针检测SNP技术简单、快速、准确，适用于大批量基因分型研究。
- 张俊罗光华郑璐张晓膺徐宁
- 关键词：基因型核酸探针
- 冠心病患者脂蛋白相关磷脂酶A2基因多态性研究被引量：7
- 2009年
- 目的探讨脂蛋白相关磷脂酶A2基因R92H和A379V多态性位点与冠心病遗传易感性的关系。方法采用单荧光标记探针技术检测261例冠心病患者、263例正常对照者脂蛋白相关磷脂酶A2基因R92H和A379V基因型。结果（1）92H等位基因携带者患冠心病的风险是92R等位基因携带者的1．75倍（P〈0．01）；（2）冠心病组中单倍型379A92H的频率分布显着高于对照组（P〈0．01）；（3）Logistic回归分析提示，R92H位点等位基因92H是冠心病的独立危险因素。结论脂蛋白相关磷脂酶A2基因R92H多态性与汉族人冠心病遗传易感性独立相关。
- 徐敏孙建辉罗光华白江涛柯海燕刘亚平
- 关键词：脂蛋白相关磷脂酶A2基因多态性冠心病
- 碱基淬灭探针技术单管检测线粒体DNA 12Sr RNA A1555G及C1494T突变被引量：5
- 2012年
- 目的应用碱基淬灭探针技术建立单管同时检测线粒体DNA12Sr RNA A1555G和C1494T突变的方法。方法探针的一端标记6-羧基荧光素，同时构建4个载体做为扩增模板，分别代表可能的4种基因型组合。对117例耳聋患者外周血标本进行线粒体DNA12Sr RNA A1555G和C1494T突变的检测，同时选取15例样本进行DNA测序，验证所建立方法的可靠性和准确性。结果根据熔解曲线可以清晰地对线粒体DNA12Sr RNA1555位点和1494位点的基因型做出判断。117例耳聋患者中3例携带A1555G突变（2．56％），1494位点未检出突变；基于碱基淬灭探针技术的单管检测方法与DNA测序的结果一致。结论碱基淬灭探针单管检测技术可用于临床线粒体DNA突变耳聋基因检测。
- 郑璐罗光华张俊张晓膺徐宁
- 关键词：DNA突变分析听觉丧失
- 金属硫蛋白2A基因-838G/C多态性与冠心病的关联研究被引量：2
- 2009年
- 目的:研究中国江苏汉族人群金属硫蛋白2A(Metallothionein2A,MT2A)基因-838G/C多态性与冠心病的关联性。方法:采用单荧光标记探针技术,检测287例冠心病患者和226例健康对照者的MT2A基因-838G/C多态性。结果:MT2A基因-838G/C多态性基因型和等位基因频率分布在冠心病组和对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。冠心病组MT2A-838C等位基因频率明显高于对照组(31.4%∶24.6%,P=0.016),C等位基因携带者(GC+CC基因型)患冠心病的风险是GG基因型的1.562倍(OR=1.562,95%CI:1.099～2.218,P=0.013),Logistic回归分析显示,携带C等位基因是冠心病的独立危险因素(P<0.05)。冠心病组C等位基因携带者的冠状动脉Gensini积分明显高于非C等位基因携带者(P<0.05)。结论:MT2A基因-838G/C多态性与中国江苏汉族人群冠心病的发生有关联,C等位基因可能是冠心病发病的遗传易感基因,并影响冠状动脉病变的严重程度。
- 杨晓宇孙建辉罗光华张国柱徐敏
- 关键词：冠状动脉疾病金属硫蛋白多态性单核苷酸
- 脂蛋白相关磷脂酶A2基因R92H多态性与汉族人群冠心病易感性的关系被引量：3
- 2008年
- 目的探讨脂蛋白相关磷脂酶A2基因R92H多态性与冠心病遗传易感性及冠状动脉病变程度的关系。方法采用单荧光标记探针技术检测261例冠心病患者及263例正常人脂蛋白相关磷脂酶A2基因R92H多态性。结果冠心病组RH基因型和H等位基因频率显著高于对照组(P<0.05和<0.01)。RH基因型、H等位基因人群冠心病风险增高(P均<0.01)。Logistic回归分析显示,R92H多态性是冠心病的独立危险因素(P<0.05)。冠心病组中RH和HH基因型者总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇水平高于RR基因型者(P<0.05和<0.01),高密度脂蛋白胆固醇水平显著低于RR基因型者(P<0.05)。冠心病组中,RH和HH基因型者多支血管病变率比RR基因型者明显升高(P<0.05)。结论脂蛋白相关磷脂酶A2基因R92H多态性与中国汉族人群冠心病相关,携带RH、HH基因型人群发生冠心病风险较高,且与更严重的冠状动脉病变有关。
- 徐敏孙建辉罗光华白江涛刘亚平柯海燕
- 关键词：内科学脂蛋白相关磷脂酶A2冠心病冠状动脉病变
- 鉴定清道夫受体BI基因敲除突变小鼠的新方法被引量：1
- 2011年
- 目的建立一种清道夫受体BI(SR-BI)基因敲除突变小鼠基因型的鉴定方法。方法参照碱基淬灭探针技术原理,设计鉴定野生型和突变型SR-BI基因的引物探针。反应体系经PCR扩增后,利用融解曲线功能判断小鼠基因型。结果新方法可在1h内完成基因型分析。野生型和突变型纯合子小鼠分别在(53.25±0.81)℃及(62.25±0.31)℃处出现单个融解谷;而杂合子小鼠在两处均出现融解谷。结论新方法简单、快速、准确,适用于鉴别SR-BI基因敲除突变小鼠的基因型。
- 冯悦华张晓膺魏江张俊徐宁罗光华
- 关键词：清道夫受体BI基因敲除
