国家自然科学基金(30571968)
- 作品数：11 被引量：53H指数：5
- 相关作者：施惠娟袁瑶张慧琴赵洪鑫史庭燕更多>>
- 相关机构：上海市计划生育科学研究所复旦大学华东理工大学更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金上海市浦江人才计划项目教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 应用化学发光法检测男性不育人群精液活性氧水平被引量：9
- 2009年
- 目的探讨化学发光法检测男性不育人群中精液ROS水平的意义。方法使用化学发光法检测1018例不育男性和50例已育志愿者精液活性氧水平。不育男性精液分为弱精子组(400例)、少精子组(19例)、少弱精子组(212例),少弱畸精子组(35例),精液指标正常组(352例)。结果男性不育人群精液活性氧水平呈偏峰分布,中位数为40 RLU/s;男性不育各组与志愿者ROS水平差异有统计学意义,不育组各组之间差异也有统计学意义。结论用化学发光法检测精液ROS水平能够较好地评价男性生育功能, ROS能够作为一个独立的指标指导男性不育的诊断。
- 赵洪鑫史庭燕时伟丽袁瑶吴晓芸张慧琴施惠娟
- 关键词：精液活性氧化学发光测定法
- sp3111RNAi转基因小鼠模型的评价以及sp3111下调表达对受精及早胚发育的影响
- 2011年
- 目的 评价sp3111 RNAi转基因小鼠模型的应用价值以及探讨SP3111蛋白降低表达对受精及早期胚胎发育的影响.方法 ①采用Real-Time PCR方法分别检测F1代和F4代转基因RNAi小鼠中sp3111 mRNA的表达变化,并比较2代间干扰效率的差异.②将精子分为实验组（F4代小鼠精子组）和对照组（野生小鼠精子组）,进行体外授精实验,观察受精率及碎裂胚胎的发生率.结果 ①F1代和F4代小鼠中干扰效率的差异无统计学意义（P〉0.05）.②实验组的正常胚胎与碎裂胚胎的形成率分别为34.48%和46.21%,与对照组相比均有显著差异（P〈0.05）.结论 ①RNAi转基因小鼠中RNAi诱导的转录沉默可稳定遗传至F4代.②SP3111下调表达对小鼠受精及早期胚胎发育有明显的影响.
- 华叶贾晓峰华敏敏袁瑶范立强施惠娟
- 关键词：REAL-TIMEPCR
- ssp411基因siRNA表达载体的构建与有效干扰质粒的筛选
- 2009年
- 目的为探索精子细胞特异表达的新基因ssp411在受精及早胚发育中的功能，设计并构建了以ssp411基因为靶点的RNA干扰表达载体siRNA-ssp411s，筛选其中对ssp411基因有显著干扰作用的表达质粒。方法根据已知的ssp411 mRNA序列，选择设计三条带发卡结构的核苷酸序列，克隆到含有U6启动子的载体pRNAT—U6．1中并测序分析。用脂质体转染的方法将干扰质粒与表达质粒ssp411-pDsRed共转染293T细胞，24h后，荧光倒置显微镜观察转染效率，并收集细胞，通过实时定量PCR方法检测不同干扰质粒对ssp411mRNA的干扰效果。结果3个ssp411的siRNA片断被成功克隆到pRNAT-U6.1质粒载体中，插入片段测序结果与设计的序列完全一致。实时定量PCR结果表明，针对ssp411基因蛋白编码区3—22序列构建的干扰质粒效果最好，干扰效率可达71％。结论成功构建了能表达ssp411 shRNA（small hairpin RNA）的重组质粒，同时通过共转染技术，筛选到一个干扰效果达70％以上的干扰片断，为建立转基因RNA干扰小鼠模型，在体内研究ssp411基因及蛋白的生殖生物学功能打好基础。
- 华敏敏李玉华李润生施惠娟欧伶
- 关键词：RNA干扰短发夹RNA实时定量PCR
- 精子染色质结构分析的临床意义被引量：4
- 2006年
- 目的探讨女方不明原因流产和不明原因不孕与其配偶精子染色质性状之间的关系;方法通过精子染色质结构分析(SCSA)对22例不明原因流产和36例不明原因不孕妇女配偶精子,以及20例正常对照者精子进行DNA完整性检测,并比较它们之间的差异;结果对照组与不明原因流产组以及不孕组之间精子DNA完整性存在差异,且差异具有统计学意义(P<0．05),而不明原因流产组与不孕组之间精子DNA完整性比较无明显差异(P>0．05);结论精子染色质结构分析有可能作为不明原因流产和不孕的辅助诊断方法在临床应用。
- 杨建华华咏马亮施惠娟吴晓云
- 关键词：不明原因流产不孕精子染色质结构分析流式细胞术
- 精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠的可行性研究被引量：2
- 2008年
- 目的构建目的基因rsp3111与荧光蛋白融合表达的质粒,并且实现目的基因在体外受精胚胎及在体附睾成熟精子中表达。为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定基础。方法将rsp3111基因以XholI和BamHI酶切后插入经同样酶切处理的真核细胞表达质粒pDsRed-Monomer-N1中,重组质粒为pDsRed-Monomer-N1-rSP3111。采用共培养和脂质体介导方法将ICR小鼠精子与pDsRed-Monomer-N1-rSP3111质粒共孵育,再与成熟的卵母细胞体外受精;或用脂质体介导睾丸直接注射法,将pDsRed-Monomer-N1-rSP3111导入小鼠睾丸中,通过PCR及荧光显微镜观察体外受精后的受精卵及体内睾丸转染rsp3111基因后附睾精子中是否有外源rsp3111基因的表达。结果PCR结果表明,rsp3111基因成功地转入了附睾精子及受精卵中。荧光检测结果表明,目的基因rsp3111在体外受精胚胎及睾丸的曲细精管中均有表达。结论通过雄性生殖细胞载体法实现了大鼠配子特异性蛋白rSP3111在小鼠受精卵及睾丸、附睾精子中的表达;为进一步通过精原干细胞体内转染途径建立rsp3111转基因小鼠奠定了基础。
- 周密贾晓峰史庭燕王健袁瑶施惠娟
- 关键词：体外受精
- 生殖细胞特异表达蛋白SP3111在受精及早期胚胎发育中的作用被引量：1
- 2010年
- 目的:采用抗SP3111抗体Ab2438封闭后的体外受精试验,研究SP3111蛋白在受精及早期胚胎发育过程中的作用。方法:首先在体外受精前,将精子分为3组:实验组、空白对照组、阴性对照组。实验组精子与Ab2438共同孵育1h后进行体外受精,观察2、4、6、8、22h的受精率及碎裂胚胎的发生率。接着将Ab2438作用于受精后的卵母细胞,观察作用22h后的受精率及碎裂胚胎的发生率。结果:抗体Ab2438作用小鼠精子后,碎裂胚胎发生率在加入精子后2、4、6、8、22h分别为5.26%、8.77%、23.25%、43.42%、59.21%,与各对照组碎裂胚胎形成率均有显著性差异(P<0.01)。Ab2438作用于受精后的卵母细胞,22h后实验组的正常胚胎及碎裂胚胎的形成率分别为23.64%和63.64%,与各对照组相比差异有显著性(P<0.01)。结论:抗SP3111抗体对小鼠受精及早期胚胎发育有明显的影响,因此SP3111蛋白可能是一个信号分子,与其他蛋白一起在受精和早期胚胎发育中发挥作用,对SP3111蛋白生殖功能的进一步研究将为不育的分子机制的研究提供新的思路。
- 贾晓峰周密林菊芳时伟丽张晓东施惠娟
- 关键词：精子抗体体外受精早期胚胎发育
- 人类精子RNA生殖功能研究进展被引量：5
- 2009年
- 人类成熟精子中RNA的存在已经被证实,主要包括mRNA和部分小RNA家族成员。随着研究深入,发现精子mRNA表达差异,与精子活力和男性生育功能相关。而部分精子中特异存在的mRNA和小RNA在精卵融合和早期胚胎发育调控中有重要作用。已经获得的结果提示精源性RNA的表达具有个体差异性,并且是胚胎发育所必需的。对精子RNA功能的深入研究将会对男性不育、人类辅助生育技术以及核移植技术等相关领域产生推动作用。
- 牛志宏施惠娟张慧琴
- 关键词：精子活力受精
- 睾丸/精子细胞特异表达的硫氧还蛋白研究进展被引量：5
- 2006年
- 硫氧还蛋白(thioredoxins,Trx)是一组具有氧化还原活性的蛋白质,对维持和调节细胞的氧化还原内环境有着重要的作用。本综述集中讨论了四种仅在睾丸/精子细胞中特异表达的硫氧还蛋白Sptrx-1、Sptrx-2、Sptrx-3和SSP411,以及一种除了在睾丸组织中大量表达外,还在肺和其他具纤毛结构的组织中表达的硫氧还蛋白Txl-2的最新研究进展,并对它们潜在的应用前景进行了展望。
- 施惠娟王健
- 关键词：硫氧还蛋白
- 化学发光氧化应激检测在精液质量评价中的应用
- 2008年
- 人精子细胞内活性氧的过量积蓄是男性不育的重要病因,因此对精浆活性氧进行监测是氧化应激检测的重要手段。重点介绍两种不同化学发光体系——鲁米诺发光体系和吖啶类化学物发光体系,并对其在男性不育临床中的应用进行评价。鲁米诺和光泽精作为细胞内氧化还原反应的分子探针,是灵敏的、可定量的,其化学发光信号能够很好地识别与精子缺陷相关的高水平氧化应激,并提供强有力的、与精液质量和精子体内外受孕潜能相关的证据。此外,在应用化学发光法进行精液氧化应激检测时,为避免非特异性干扰因素的影响,必须设立好各种对照。
- 史庭燕施惠娟
- 关键词：化学发光氧化应激活性氧男性不育
- 补肾生精汤与卵胞浆内单精子注射治疗男性严重少、弱精子症不育的临床观察被引量：18
- 2007年
- 目的观察中药补肾生精汤与卵胞浆内单精子注射(intracytoplasmic sperm injection,ICSI)治疗男性严重少、弱精子症不育患者助孕疗效。方法服用中药补肾生精汤2～3个月后应用ICSI(中药组,82例)与单独应用ICSI(对照组,82例)助孕技术治疗男性严重少、弱精子症。观察中药组患者用药前后精液常规指标(精子密度、活率、活力、畸形率),活性氧,获得卵子数、MⅡ卵子数、受精率、卵裂率、可用胚胎率、平均移植胚胎数、临床妊娠率。结果中药组患者治疗后精子密度、活率、活力提高,畸形率及活性氧水平下降(P<0.05),且卵子受精率〔85.9%(438/510)〕和临床妊娠率〔48.7%(38/78例)〕明显高于对照组〔卵子受精率77.9(394/506),临床妊娠率32.5%(25/77例)〕(P<0.05)。结论中药补肾生精汤能够明显降低精液中活性氧水平,提高精子质量,并有助于严重少、弱精子症患者自然受孕和提高ICSI治疗时患者精子活力、卵子受精率及临床妊娠率。
- 张慧琴赵洪鑫张爱军宣文虎贾晓峰张文静冯云施惠娟
- 关键词：补肾生精汤弱精子症不育卵胞浆内单精子注射
