浙江省重大科技专项基金(2008C02004-1)
- 作品数：9 被引量：57H指数：5
- 相关作者：童再康黄华宏程龙军陈争林二培更多>>
- 相关机构：浙江农林大学浙江林学院更多>>
- 发文基金：浙江省重大科技专项基金国家自然科学基金浙江省林业厅资助项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- 光皮桦ACC氧化酶基因BlACO的克隆和表达分析被引量：4
- 2010年
- ACC(1-aminocyclopropane-1-carboxylic acid)氧化酶(ACO)是植物乙烯合成过程中的关键限速酶,对乙烯的合成具有重要的调控作用。以光皮桦茎叶组织提取的RNA为模板,据已报道的ACO同源序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增获得部分基因片段,结合5',3'RACE方法从光皮桦中扩增出1个ACO的全长cDNA序列。该基因cDNA全长1262bp,具有一个957bp的完整开放阅读框架,编码含318个氨基酸的蛋白。与其他植物中的ACO基因进行同源性比对的结果显示,BlACO蛋白与欧洲白桦的同源性最高,达到97%。该基因在光皮桦的雄花和雌花中表达量较高,而在茎中的表达量较低。
- 周厚君黄华宏林二培程龙军彭沙沙童再康
- 关键词：光皮桦ACO基因克隆
- 光皮桦茎叶cDNA文库构建及部分EST序列SSR分析被引量：2
- 2012年
- 以光皮桦茎叶组织为材料,构建了cDNA文库。初级文库滴度为1.5×106pfu/mL,重组率达97.3%,插入片段大小在0.5～3.0kb之间,平均长度约为1.3kb,表明所构建的文库质量较高,可用于后续基因克隆及基因表达谱的研究。利用微卫星查找软件对获得的224条EST序列进行微卫星位点搜寻及其丰度、分布比较,发现47条序列含微卫星位点60个,占全部EST序列的26.80%;在所有SSRs中二碱基重复最多,为42个,占总数的70.00%,含三、四碱基重复分别占总数的28.30%和1.70%。通过对光皮桦EST序列中微卫星位点信息的发掘分析,为有针对性地设计EST-SSR引物、进行遗传多样性分析奠定了基础。
- 张敏黄华宏林二培周厚君王亚辉童再康
- 关键词：光皮桦CDNA文库SSR分析
- 光皮桦中4-香豆酸辅酶A连接酶基因Bl4CL的克隆和表达分析被引量：6
- 2010年
- 以从光皮桦茎叶组织提取的mRNA为模板,根据其他已克隆到的阔叶类树种中4-香豆酸辅酶A连接酶(4CL)基因的同源序列设计兼并引物,进行RT-PCR扩增,获得部分基因片段,然后结合5’,3’RACE方法从光皮桦中扩增出1个4CL基因的全长cDNA序列,命名为Bl4CL。该基因cDNA全长为1983bp(GenBank登录号FJ410448),具有完整的开放阅读框架(69～1697bp),编码蛋白为542个氨基酸,包含一个AMP结合功能域和一个含有12个氨基酸的功能基序。与其他植物中的4CL进行同源性比对的结果显示,Bl4CL蛋白与东北白桦的同源性最高,达到了98%。该基因在光皮桦的根和茎中表达量较高,而在花和叶中的表达量低。
- 程龙军童再康黄华宏楼雄珍
- 关键词：光皮桦基因克隆
- 林木遗传连锁图谱构建研究进展被引量：3
- 2012年
- 林木遗传图谱是林木遗传学家进行林木遗传改良的重要工具。由于林木生长周期长,高度杂合,且多为异交物种,构建高密度的遗传图谱困难较大。文中对已构建的林木遗传图谱进行总结,从遗传标记的选择、作图群体的构建和遗传作图策略3个方面综述林木遗传图谱构建的过程,着重介绍林木遗传图谱构建的特殊之处,指出作图过程中可能存在的问题,并对构建高密度的林木遗传图谱进行展望。
- 陈争童再康
- 关键词：林木分子标记
- 光皮桦6个南方天然群体的遗传多样性被引量：16
- 2010年
- 为揭示中国特有珍贵用材树种光皮桦(Betula luminifera)天然群体的遗传多样性和遗传结构,采用AFLP分子标记,分析了采自浙江、福建、江西、广西和贵州5个省区6个天然群体的120份样品。9对引物获得了355个位点,其中多态性位点323个。分析结果表明光皮桦天然群体具有较高的遗传多样性,多态位点百分率(PPL)达90.99%,各群体的PPL和Nei's基因多样性(hj)分别为93.20-98.60%和0.3143-0.3645;总群体遗传多样性指数(Ht)为0.3616,群体间遗传分化系数(Fst)为0.0650,群体间总的基因流较高(Nm=3.5962)。AMOVA分析表明群体间的遗传变异占总变异的11.49%,浙江临安群体和贵州修文群体间的遗传距离最大(0.0665),江西龙南群体和广西龙胜群体间的遗传距离最小(0.0173),且遗传结构分析显示这两个群体的部分个体可能来自同一近祖。Mantel检测发现,群体间的遗传距离与地理距离没有显著相关性(r=0.423,P=0.113),而与两两群体所在地的均温差呈显著相关(r=0.449,P=0.017)。结合群体实地调查,可以得出光皮桦天然群体的遗传多样性和遗传结构的形成不仅与其广域分布、自然杂交、种子特性以及生活史有关,而且与群体被人为砍伐、生境片断化等因素有重要关系。基于上述结果我们提出了光皮桦天然种群的保护策略。
- 张俊红黄华宏童再康程龙军梁跃龙陈奕良
- 关键词：BETULAAFLP标记遗传分化基因流
- 光皮桦SSR分子标记体系的建立被引量：6
- 2010年
- 采用十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)-硅珠法提取光皮桦Betula luminifera嫩叶DNA,利用近缘种日本白桦B.platyphylla var.japonica和欧洲白桦B.pendula的引物,建立光皮桦简单重复序列标记(SSR)反应体系。在体系建立过程中,采用单因素法分别对影响聚合酶链式反应(PCR)反应的因素进行分析。结果表明:在20μL反应体系中,模板DNA用量、Mg2+浓度、脱氧核糖核苷酸(dNTPs)浓度、引物浓度、Taq DNA聚合酶用量分别为60ng,1.500mmol·L-1,0.175mmol·L-1,2.500mmol·L-1,1.0×16.67nkat时结果最好;引物退火温度比日本白桦扩增时提高1℃时效果佳。PCR扩增产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳后随机挑取其中3对引物扩增的多态性片段进行克隆测序,对引物的通用性做进一步检验,序列经比对后得到的与原物种序列相似度(max ident值)均在95.0%以上。可见,近缘种日本白桦和欧洲白桦的SSR引物可以在光皮桦上应用。
- 尤卫艳黄华宏程龙军童再康朱玉球
- 关键词：林木育种学光皮桦
- 杉木纤维素合成酶类似蛋白基因ClCslD1的克隆及其生物信息学分析被引量：3
- 2012年
- 纤维素合成酶类似蛋白(CSL)作为一种重要的膜蛋白与纤维素合成酶具有相类似的蛋白结构,都含有D,D,D,QXXRW保守区。利用其他物种中的CesA基因的保守序列设计简并引物,采用反转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)结合cDNA末端快速扩增技术(RACE)成功地从杉木Cunninghamia lanceolata中扩增出一个含有完整阅读框架的cDNA序列,长度为4 150 bp,开放阅读框架为3 396 bp,编码1 132个氨基酸并含有保守的D,D,D,QXXRW天冬氨酸残基序列。应用美国国家生物技术信息中心(NCBI)数据库对获得的基因进行序列分析比对,发现它属于CslD基因家族,命名为ClCslD1基因。多重序列比对结果分析表明,该蛋白与来自颤杨Populus tremuloides,水稻Oryza sativa,拟南芥Arabidopsis thaliana等的同源基因相似性高达71%以上。利用生物软件对其进行生物学分析,为进一步研究其在植物纤化中的功能奠定基础。
- 彭沙沙童再康黄华宏周厚君时剑林二培
- 关键词：林木育种学杉木克隆
- 光皮桦EST-SSR PCR反应体系的优化被引量：6
- 2012年
- 为获得稳定的聚合酶链式反应(PCR)产物,采用正交设计L25(56)对光皮桦Betula luminifera表达序列标签-简单重复序列聚合酶链式反应(EST-SSR PCR)反应体系中的5个因素:DNA模板浓度,引物浓度,镁离子(Mg2+)浓度,三磷酸碱基脱氧核苷酸(dNTPs)浓度和DNA聚合酶量进行优化,每个因素设计5个水平。优化试验结果表明:光皮桦EST-SSR最佳PCR反应体系:4.0 mg.L-1DNA模板,0.500μmol.L-1引物,1.250 mmol.L-1Mg2+,0.250mmol.L-1dNTPs,0.072 5×16.67 mkat.L-1rTaq酶。通过梯度PCR试验筛选得到相应引物的最佳退火温度。对优化出的EST-SSR PCR反应体系进行稳定性检测,结果均能获得稳定、清晰可辨的DNA谱带。
- 陈争姜小凤童再康
- 关键词：林木育种学光皮桦EST-SSRPCR反应体系正交设计
- 光皮桦组织培养离体再生研究被引量：14
- 2012年
- 采用正交试验等设计,系统开展了光皮桦组织培养高效再生体系研究。结果表明:光皮桦茎段外植体最佳诱导培养基及激素组合为MS+0.50mg.L-1 6-BA+0.10mg.L-1 TDZ+30mg.L-1蔗糖+5.50g.L-1琼脂,丛生芽最佳生根培养基为1/2MS+1mg.L-1 IBA+20g.L-1蔗糖+5.50g.L-1琼脂;丛生芽在最佳生根培养基上培养15d后获健壮生根苗,移栽成活率达90%。该实验结果为光皮桦的优良品种快繁以及遗传转化体系建立奠定了良好的基础。
- 孙晓敏陈争李美飞童再康
- 关键词：光皮桦茎段
