大连市科技计划项目(2013E11SF056) 作品数:16 被引量:110 H指数:7 相关作者: 李庆伟 逄越 刘欣 韩英伦 徐扬 更多>> 相关机构: 辽宁师范大学 学研究院 大连大学 更多>> 发文基金: 大连市科技计划项目 国家重点基础研究发展计划 国家自然科学基金 更多>> 相关领域: 生物学 医药卫生 农业科学 更多>>
CRISPR/Cas9技术在HIV治疗的应用研究进展 抗逆转录病毒治疗(antiretroviral therapy)为临床上一种重要的治疗人类免疫缺陷病毒(HIV)感染的方法。目前,由于基因治疗手段拥有可以持续抑制病毒活性和副作用小的特点,被广泛应用于HIV治疗。规律成簇... 韩英伦 李庆伟关键词:人类免疫缺陷病毒 七鳃鳗血清中补体C3和VLRB介导的免疫防御 被引量:1 2018年 日本七鳃鳗(Lampetra japonica)属最原始的无颌类脊椎动物,是研究免疫起源与进化的重要模式生物。七鳃鳗血清中C3分子(L-C3)是其含量最高的补体成分,在补体经典激活途径和旁路激活途径中均发挥重要作用。本文通过PCR扩增获取C3分子α-γ链的基因序列,构建到原核表达载体p ET-28a,成功在大肠杆菌中表达C3部分蛋白质并制备多克隆抗体。利用流式细胞术和激光共聚焦证明,L-C3分布在神经轴体的胞浆中。免疫共沉淀及细胞沉积结果显示,七鳃鳗血清中,VLRB与L-C3蛋白相互作用并共沉积于靶细胞膜表面。天然L-C3和VLRB清除实验,验证其在参与七鳃鳗血清杀伤靶细胞时发挥重要作用。本研究为七鳃鳗补体系统的研究奠定了基础,为七鳃鳗免疫起源与进化提供重要资料。 赵宇 昝琦 逄越 逄越关键词:免疫沉淀 CRISPR/Cas9基因组编辑技术在HIV-1感染治疗中的应用进展 被引量:10 2016年 基因治疗是将外源正常基因通过一定方式导入人体靶细胞以纠正或补偿因基因缺陷和异常引起的疾病,从而达到治疗目的。因此,基因治疗的技术方法在研究持续感染HIV-1或潜伏感染HIV-1原病毒患者的治疗中具有重大的现实意义。目前,现有的基因治疗方法存在识别靶向位点有限及脱靶几率大等主要问题。最新研究表明来源于细菌和古菌的规律间隔成簇短回文重复序列及其相关核酸酶9系统[Clustered regularly interspaced short palindromic repeats(CRISPR)/CRISPR-associated nuclease 9(Cas9),CRISPR/Cas9]已被成功改造成基因组定点编辑工具。因此,如何利用CRISPR/Cas9系统实现对HIV-1病毒基因组进行高效靶向修饰,从而达到治疗HIV-1感染病患的目的已经成为当前研究的热点。本文参考最新国内外研究成果,重点介绍了CRISPR/Cas9基因组编辑技术在HIV-1感染疾病治疗中的应用,主要包括CCR5基因编辑、清除HIV-1原病毒以及活化HIV-1原病毒,以期为HIV-1感染疾病的预防与治疗提供重要研究参考。 韩英伦 李庆伟关键词:人类免疫缺陷病毒 质膜组分磷脂酰丝氨酸外翻的分子调控机制 被引量:9 2015年 磷脂酰丝氨酸(Phosphatidylserine,PS)是细胞质膜重要的磷脂成分之一,具有重要的生物学功能。在细胞凋亡及一些特殊的病理条件下,细胞内ATP供能不足,胞浆Ca2+浓度升高,引起PS发生外翻。PS外翻在不同类型细胞中具有不同的生物学功能,且外翻的程度与疾病发展程度密切相关,可作为癌症等多种疾病治疗的靶标。文章综述了细胞质膜中磷脂酰丝氨酸的重要生物学功能和意义、磷脂酰丝氨酸外翻的分子机制及在临床医学方面的应用,以期对未来的功能和临床应用研究提供参考。 毕丹 徐扬 逄越 李庆伟关键词:磷脂酰丝氨酸 细胞凋亡 程序性坏死(Necroptosis)的分子机制 被引量:9 2014年 程序性坏死(Necroptosis)是一种不同于凋亡及传统坏死的细胞程序性死亡方式,可由肿瘤坏死因子受体(Tumor necrosis factor receptor,TNFR)或模式识别受体(Pattern recognition receptor,PRR)调控启动。受体相互作用蛋白(Receptor-interacting protein,RIP)1和3是启动necroptosis的两个关键蛋白,necroptosis启动后需要一系列分子传递和执行死亡信号,如多核苷酸二磷酸-核糖聚合酶-1(Poly(ADP-ribose)polymerase,PARP-1)、活性氧簇(Reactive oxygen species,ROS)、Ca2+等,这些分子破坏线粒体及其他细胞器,最终使细胞在缺乏天冬氨酸半胱氨酸蛋白酶(Caspase)的情况下死亡。Necroptosis细胞可将损伤相关模式分子(Damage-associated molecular patterns,DAMPs)暴露到细胞外,被吞噬细胞识别并清除。文章对启动necroptosis的受体分子、传递执行细胞坏死的重要分子和坏死细胞的清除过程进行了概述。 巴微 逄越 李庆伟关键词:程序性坏死 肿瘤坏死因子受体 受体相互作用蛋白 补体C3结构与功能研究进展 被引量:30 2014年 补体系统是一个具有复杂而精密调控机制的生物反应体系,是固有免疫与适应性免疫之间的重要枢纽,其组成成分包括固有成分、多种调节因子和补体受体等30余种[1]:①固有成分包括:经典激活途径的C1、C2、C4,凝集素途径的甘露糖结合凝集素、相关丝氨酸蛋白酶等,旁路激活途径的调控蛋白B因子、D因子等,以及三条激活途径枢纽C3,共同末端通路C5、C6、C7、C8和C9;②多种调节因子包括:备解素、H因子、I因子等血浆可溶性因子和腹膜蛋白等细胞膜结合蛋白;③补体受体包括:CR1 ~CR5、C3aR、fH受体等.补体成分中含量最为丰富的补体第三组分(The third complement component,C3)是1912年Ritg利用蛇毒处理血清时发现,是补体系统的核心,功能上,它成为三条补体激活途径(即经典途径、旁路途径、甘露聚糖结合凝集素途径)的启动汇合点,引起补体系统的级联反应,与各相关因子发生相互作用,同时还是C3b依赖的阳性反馈环路的基础.被激活的C3裂解为同样具有重要生物学活性的片段:C3a、C3b、iC3a、C3d等[2]. 昝琦 刘欣 逄越 李庆伟关键词:补体C3 COMPONENT 甘露糖结合凝集素 生物学活性 补体系统 日本七鳃鳗钙调蛋白分子克隆、组织定位及功能分析 被引量:1 2017年 钙调蛋白(calmodulin,CaM)是高度保守的钙离子结合蛋白质,可形成Ca2+-CaM复合体,从而调节细胞代谢以及靶酶的功能。日本七鳃鳗(Lampetra japonica)作为原始的无颌类脊椎动物,对研究脊椎动物分子起源进化及器官发育分化具有重要的研究价值。通过提取日本七鳃鳗髓组织总RNA,利用RT-PCR方法获得日本七鳃鳗CaM(简称Lj-CaM)基因并进行生物信息学分析。将LjCaM基因分别构建到原核表达载体p ColdⅠ和真核表达载体p EGFP-N1中,利用亲和层析技术纯化得到Lj-CaM蛋白。圆二色谱分析结果表明,Lj-CaM属于典型的α-螺旋结构型蛋白质。免疫印迹和免疫组化结果表明,CaM主要存在于日本七鳃鳗的肠、鳃、髓、肾组织中,在心和肝组织中几乎不表达。细胞免疫荧光结果显示,CaM定位于细胞核中。q PCR和免疫印迹方法检测发现,当293T细胞中Lj-CaM过表达时,对下游靶基因CaMKⅡ作用不明显,但促进PLA2G2A表达。本研究报道了日本七鳃鳗CaM结构、细胞组织定位分布以及基因调控研究,对其结构、分子起源与进化、分子调控及功能方面的研究奠定了基础。 张撼 董彦娇 李长炙 逄越 李庆伟关键词:钙调蛋白 免疫荧光 实时定量PCR 免疫印迹 日本七鳃鳗IL-17基因原核表达、蛋白纯化及多抗制备与鉴定 被引量:4 2014年 目的从日本七鳃鳗(Lampetra japonica,Lj)类淋巴细胞中提取总RNA,通过RT-PCR方法扩增七鳃鳗IL-17基因,并对其氨基酸序列进行分析。方法将IL-17基因连接到原核表达载体pET-28a上,成功构建了重组表达质粒pET-28a-Lj-IL-17;经IPTG诱导表达并纯化重组Lj-IL-17蛋白。用重组Lj-IL-17蛋白免疫新西兰大白兔,制备多克隆抗体进行ELISA与Western blot检测。结果经ELISA检测抗体效价为1∶512 000,Western blot结果显示该多克隆抗体能特异性结合重组和天然IL-17蛋白。流式细胞实验证明该多抗能特异识别七鳃鳗类淋巴细胞表达的IL-17分子。结论重组Lj-IL-17蛋白表达及多克隆抗体的成功制备,为研究日本七鳃鳗适应性免疫起源与进化提供了重要的工具。 刘爽 唐玉林 逄越 李庆伟关键词:IL-17 原核表达 多克隆抗体 Necroptosis——一种新型程序性死亡机制的研究进展 被引量:6 2014年 坏死在众多生理和病理进程中都扮演着重要的作用.最近,一种新型的被称为"necroptosis"的细胞坏死程序受到了人们的普遍关注.从形态学上来讲,necroptosis表现出和坏死相同的特征;然而,它却有自己独特的信号通路,这种通路需要受体相互作用蛋白激酶RIP1和RIP3的参与,形成诱导死亡信号复合体,从而促进细胞程序性坏死,但可以被necrostatins特异性地抑制.Necroptosis有助于免疫系统的调节,癌症的治疗以及多种压力下细胞的应答.本篇综述中我们将总结这种特殊的程序性死亡的信号通路、生物学效应和病理学意义. 李庆伟 王诗粤 逄越关键词:NECROPTOSIS 受体相互作用蛋白 信号通路 日本七鳃鳗(Lampetra japonica)髓细胞cDNA文库构建及EST序列分析 被引量:1 2015年 选取日本七鳃鳗(Lampetra japonica)神经轴体中分离出的髓细胞,采用SMART技术成功构建七鳃鳗髓细胞cDNA文库,并随机挑选部分克隆子进行测序及生物信息学分析,对其质量进行了检测.检验结果显示,本次实验所构建的cDNA文库滴度>2.8×105 pfu/mL,符合大规模测序的标准.运用Blast2GO软件进行生物信息学比对,发现5 749个转录本在NCBI数据库中找到同源或相似序列.其中分别有39.52%、30.30%和30.18%的转录本承担生物学途径、分子功能和细胞组件等功能.EST序列的研究是目前为止获得新功能基因最有效的手段,日本七鳃鳗髓细胞cDNA文库的构建成功,将为下一步在七鳃鳗髓细胞中寻找具有研究价值的新功能基因指明方向. 李庆伟 梁宏芳 潘雄 逄越 朱婷 徐扬关键词:髓细胞 CDNA文库 表达序列标签