国际科技合作与交流专项项目(BZ2005032)
- 作品数：4 被引量：28H指数：3
- 相关作者：朱国强陶洁蒋颖孟祥升林燕清更多>>
- 相关机构：扬州大学中国动物疫病预防控制中心塔里木大学更多>>
- 发文基金：国际科技合作与交流专项项目引进国际先进农业科技计划教育部留学回国人员科研启动基金更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 牛病毒性腹泻病毒基因2型代表株全基因组序列分析被引量：5
- 2011年
- 为了解我国牛病毒性腹泻(BVD)的分子流行病学情况,本研究对分离的3株牛病毒性腹泻病毒基因2型(BVDV-2)代表株全基因组进行序列分析,应用RT-PCR法分段扩增3株BVDV-2(XJ-04、SD-09和QH-09)的全基因组序列,共分为18个片段:A～Q以及5'-UTR和3'-UTR的部分序列。除5'-UTR和3'-UTR部分序列外,A～Q基因片段末端相互重叠。经序列拼接获得3株全基因组序列,全长均为12 284 bp。将测序结果与GenBank登录的瘟病毒科代表毒株序列、自我裂解酶(Npro)、结构蛋白(C、Erns、E1、E2)以及标准株BVDV-1 NADL和BVDV-2 890进行核苷酸以及氨基酸序列同源性分析。结果表明:XJ-04、SD-09和QH-09的全基因组序列同源性高于99.6%,3株BVDV-2分离株与890和NewYork93株亲缘关系最近,属于BVDV-2a亚型。在致细胞病变型的XJ-04、SD-09、QH-09株的NS2/3基因上无外源基因的插入。本研究分离的BVDV-2株为国内首次鉴定国内分离株全基因组序列,为我国BVD的分子流行病调查提供依据。
- 林燕清朱礼倩陶洁孙宏进孟祥升王建业朱国强
- 关键词：基因组测序系统进化分析
- 基因2型牛病毒性腹泻病毒RT-PCR检测方法的建立和初步应用被引量：15
- 2008年
- 根据已发表的牛病毒性腹泻病毒基因1型(BVDV-1)和2型(BVDV-2)5'非编码区(5'-UTR)的序列,分别设计了针对BVDV-1型、BVDV-2型以及针对BVDV-1和BVDV-2两型的特异性引物和通用引物,以标准参考株BVDV-1NADL株和BVDV-2890株为对照,建立了分别能检测BVDV-1、BVDV-2和BVDV-1/BVDV-2的RT-PCR检测方法。在此基础上,进一步对疑似BVDV-2感染牛的临床病料组织(脾、淋巴结、心肌、血液等)检测结果表明,在所检测的18份样品中,BVDV-2阳性8份(44%)。经RT-PCR鉴定为阳性的组织病料,进一步通过MDBK细胞进行病毒分离,病毒分离率为100%;结合感染细胞病变观察,间接免疫荧光试验RT-PCR和序列测定鉴定,所分离的病毒均为BVDV-2。上述研究表明,该RT-PCR检测方法敏感、特异;并证实我国牛群已存在BVDV-2的污染或感染。
- 任敏焦海宏蒋颖刘振华王传彬朱国强
- 牛疱疹病毒I型gB基因的原核表达
- 2013年
- 根据GenBank中BHV-1 Colorado 1毒株的全基因组序列,针对gB基因的主要B细胞免疫区域设计一对引物。提取BHV-1 Colorado 1毒株的基因组DNA,PCR扩增大小为585 bp的gB片段,将其克隆至pET-22b(+)原核表达载体并测序分析,同时用Nde I和Not I酶切鉴定。SDS-PAGE和Western blot试验结果证明,获得的可溶性gB重组蛋白能与牛传染性鼻气管炎病毒标准阳性WEI血清发生特异性反应,为ELISA等免疫诊断方法的建立奠定了物质基础。
- 李艳莉陶洁张信军王银朱国强
- 关键词：牛疱疹病毒GB基因包涵体蛋白免疫印迹
- 抗牛病毒性腹泻病毒单克隆抗体的制备及双抗夹心ELISA检测方法的建立被引量：12
- 2012年
- 为建立牛病毒性腹泻病毒(BVDV)双抗夹心ELISA检测方法,本研究将BVDV 890病毒株(BVDV-2)浓缩并纯化后免疫BALB/c小鼠,经常规技术进行细胞融合并筛选得到一株稳定分泌IgG的杂交瘤细胞株,命名为3F9。以BVDV单克隆抗体(MAb)IgM为捕获抗体,生物素标记的3F9为检测抗体,初步建立BVDV特异的双抗体夹心ELISA检测方法(BAS-ELISA)。采用建立的BAS-ELISA方法检测35份临床病牛血清样品,检出阳性样本13份;与RT-PCR的符合率达到94.29%;表明本研究所建立的BAS-ELISA方法可用于BVDV感染的临床诊断,为BVDV的免疫学研究奠定了基础。
- 蒋颖林燕清陶洁孟祥升段小丽王娟王银张信军王建业朱国强
- 关键词：牛病毒性腹泻病毒E2蛋白双抗体夹心ELISA
