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人脐带间充质干细胞获得和纯化及向软骨细胞分化能力的研究被引量：2: 2009年; 目的研究脐带间充质干细胞获得纯化的高效方法及向软骨细胞的分化能力。方法取人的正常分娩或剖腹产胎儿的脐带，用胶原酶和胰酶初步消化后，将流式细胞仪筛选得到的CD45（-）、CD90（＋）细胞作为原代细胞进行培养，并用复合胶原酶差速消化法逐级传代、纯化细胞，每次传代后取部分细胞用作流式细胞仪分析细胞的CD45、CD90阳性比率；对P3代细胞向软骨细胞进行诱导。结果流式细胞仪检测提示，采用流式细胞仪进行初次筛选并用复合胶原酶差速消化法逐级传代获得的P1、P2、P3代细胞中CD90的阳性率为（80．86±7．85）％、（95．86±3．28）％、（97．15±1．43）％，而CD45的阳性率为（2．534-0．28）％、（0．97±0．48）％、（0．05±0．01）％；向软骨细胞诱导结果提示P3代细胞有向终末软骨细胞分化能力，具有干细胞的特性。结论采用流式细胞仪进行初次筛选并用复合胶原酶差速消化法能快速获得高纯度的具有向终末软骨细胞分化能力的人脐带间充质干细胞。; 周佳沈尊理金羽青刘伟沈华; 关键词：间充质干细胞脐带软骨显微外科

MRI体外示踪SPIO标记人脐带间充质干细胞的实验研究被引量：5: 2010年; 目的:研究超顺磁性纳米铁颗粒(superparamagnetic iron oxide particles,SPIO)体外标记人脐带间充质干细胞(HUCMSCs)及MRI成像示踪的可行性。方法:从人胎儿脐带中分离培养、扩增脐带间充质干细胞(HUCMSCs),分别采用0μg/ml,25μg/ml,50μg/ml浓度的SPIO标记0.5x106,1x106,2x106和10x106HUCMSCs。普鲁士蓝染色和透射电镜鉴定细胞内铁颗粒情况,并用3.0TMRI离体扫描T1WI,T2WI,GRE/300序列成像,测定细胞群信号。结果:不同数量的HUCMSCs与0μg/ml,25μg/ml,50μg/ml浓度的SPIO共同培养18小时,普鲁士蓝染色发现标记的细胞随标记浓度的升高染色程度逐渐加深。透射电镜检查显示细胞内含致密铁颗粒。离体MRI不同序列测定不同浓度SPIO标记相同数量的细胞群,GRE/30°和T2WI测定的各组之间均有统计学差别,50μg/ml与25μg/ml组分别与0μg/ml组之间有显著统计学差别(P<0.05);同一浓度SPIO标记人脐带间充质干细胞,信号强度与细胞数量有关(P<0.05)。结论:SPIO可以标记人脐带间充质干细胞,应用MRI可以对其进行体外示踪和监测。; 秦金保沈尊理祝加学金羽青李康安王晓盼; 关键词：人脐带间充质干细胞磁共振成像

快速纯化新生大鼠许旺细胞的新方法被引量：2: 2010年; 目的探讨一种简单高效的许旺细胞纯化方法。方法选用3～5d的SD乳鼠双侧坐骨神经,用DispaseⅡ短时消化去除神经外膜和束膜,用复合胶原酶NB4彻底消化、离心,获得原代细胞。细胞培养达到亚融合状态后,置于4℃冰箱约5min,收集首先脱壁的许旺细胞。最后用S100免疫荧光法和流式细胞仪法鉴定许旺细胞的纯度。结果通过酶消化法剥脱神经外膜和束膜,获得纯度85%以上的原代许旺细胞;经低温差速法进一步纯化,纯度可达99%。结论先用酶消化神经外膜和束膜,再用低温差速分离许旺细胞,能够获得高纯度的许旺细胞,是一种简便高效的纯化手段。; 祝加学沈尊理秦金保张涛金羽青周广东; 关键词：许旺氏细胞纯化

从小鼠脂肪组织中分离纯化雪旺细胞的实验研究被引量：1: 2010年; 目的探索从新生小鼠脂肪组织中分离纯化雪旺细胞的可行性.方法取新生（出生5～7 d）绿色荧光蛋白（GFP）转基因小鼠的腹股沟皮下脂肪,采用0.2%的复合胶原酶NB4消化法分离获取细胞,然后用含10%胎牛血清（FBS）的低糖DMEM培养基培养.用0.1%的复合胶原酶NB4差速分离纯化雪旺细胞,每48 h纯化1次,共进行2次纯化.用p75免疫荧光法鉴定雪旺细胞并分析其纯度.结果从小鼠腹股沟皮下脂肪中分离纯化获得的细胞是雪旺细胞,经过2次纯化,其纯度可达90%.结论从小鼠脂肪组织中可以分离纯化获得雪旺细胞,为组织工程人工神经种子细胞提供一种新的来源.; 秦金保沈尊理祝加学金羽青; 关键词：脂肪组织许旺细胞细胞分离纯化

超顺磁性纳米铁颗粒标记许旺细胞及体外磁共振示踪的实验研究被引量：1: 2010年; 目的研究超顺磁性纳米铁颗粒（SPIO）体外标记小鼠许旺细胞（SCs）及MRI成像示踪的可行性.方法分离、纯化新生C57BL/6小鼠（5～7 d）的许旺细胞,取已分别用25.0 μg/ml、50.0 μg/ml浓度SPIO标记的0.5×106、1.0×106、5.0×106个许旺细胞,普鲁士蓝染色和透射电镜观察标记细胞内铁颗粒的分布情况,并用不同MRI扫描序列,测定标记的细胞群信号.结果 0.5×106、1.0×106、5.0×106小鼠许旺细胞与不同浓度的SPIO共同培养24 h后,普鲁士蓝染色见细胞内有许多蓝染的铁颗粒;透射电镜检查显示致密的铁颗粒位于细胞的吞噬泡或溶酶体中.体外MRI呈明显的低信号改变,以T2WI和GRE/30°序列改变最为明显.结论 SPIO可以标记小鼠许旺细胞,应用MRI可以对其进行体外示踪和监测.; 秦金保沈尊理祝加学王晓盼李康安金羽青; 关键词：许旺细胞磁共振成像

人脐带间充质干细胞与乳鼠许旺细胞共培养向类神经元样细胞的分化被引量：2: 2014年; 背景:间充质干细胞可以通过化学诱导或者共培养的方法分化为类神经细胞,但是对于间充质干细胞是与许旺细胞共培养分化为类神经元还是类许旺细胞,还存在争议。目的:探索大鼠许旺细胞对人脐带间充质干细胞诱导分化作用。方法:将1×109L-1人脐带间充质干细胞通过Transwell隔离小室与1×109L-1SD乳鼠许旺细胞共培养2周,观察脐带间充质干细胞的形态变化,并用免疫荧光法检测其表型变化。结果与结论:共培养2周后,部分间充质干细胞出现类似神经元的形态,且表达nestin,NF-200,β-Ⅲ-tubulin等神经元特异性标记物,不表达许旺细胞特异性表记物S100和胶质细胞特异性标记物MAB1580。提示人脐带间充质干细胞可以与大鼠许旺细胞非接触共培养分化为类神经元。; 祝加学陶海荣沈尊理; 关键词：干细胞脐带许旺细胞神经元共培养

成体干细胞向类许旺细胞诱导分化研究进展: 2010年; 周围神经损伤修复的黄金标准是自体神经移植,但由于遗留供区部位感觉功能障碍及可供移植神经数量有限,致使该项技术在临床上的应用受到限制,组织工程学的发展为此提供了一种新的解决途径。许旺细胞是周围神经组织工程重要的种子细胞,在神经再生过程中发挥重要作用,移植许旺细胞修复周围神经损伤有广阔的应用前景,但异体移植常面临免疫排斥反应,这些均导致了许旺细胞作为周围神经组织工程的种子细胞在临床应用中受到限制。近年来,随着对具有自我更新和多向分化潜能的间充质干细胞的深入研究,为组织工程化人工神经种子细胞的发展提出新的思路,本文将各种成体干细胞作为许旺细胞的替代细胞的研究进展作一综述。; 王晓盼沈尊理; 关键词：周围神经损伤成体干细胞许旺细胞神经再生

磷酸盐缓冲液纯化许旺细胞的实验研究被引量：3: 2009年; 目的探索应用磷酸盐缓冲液（PBS）纯化新生小鼠许旺细胞的可行性。方法取新生（出生5～7d）C57BL／6小鼠的坐骨神经，采用0．2％的复合胶原酶NB4消化获取许旺细胞，然后采用含10％FBS的低糖DMEM培养基培养24h。在16℃～20℃PBS中振荡差速分离纯化许旺细胞，48h后再重复1次，共进行两次纯化。每次纯化后应用S－100免疫荧光组化法鉴定许旺细胞的纯度。结果应用16℃－20℃PBS纯化新生鼠坐骨神经来源的许旺细胞2次后．经免疫荧光组化法鉴定许旺细胞纯度可达98％以上。结论该法可以纯化新生小鼠坐骨神经来源的许旺细胞，是一种经济和高效的纯化新方法。; 祝加学沈尊理沈华张兆峰金羽青; 关键词：许旺细胞纯化磷酸盐缓冲液

脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞的实验研究: 2015年; 目的:探讨通过化学诱导的方法,诱导脐带间充质干细胞分化为类许旺细胞,为组织工程神经寻找一种新的种子细胞来源。方法:通过酶消化法,分离获得原代脐带间充质干细胞。体外培养至第3代(P3),以1×103/cm2接种于培养瓶中,待细胞长至亚融合状态,吸弃培养液,加入含β-巯基乙醇的培养液预诱导24 h。然后,加入含有全反式维甲酸的培养液进一步诱导72 h。最后,加入含有胶质细胞生长因子的培养液,作用两周。对诱导后的脐带间充质干细胞用免疫荧光及RT-PCR法,进行形态观察和表型鉴定。结果:经过上述诱导过程,脐带间充质干细胞的形态,由开始时的扁平、片状、多极,类似成纤维细胞状,逐渐变为长梭形,双极或三极,类似许旺细胞。同时,表达许旺细胞特异性标志S-100、P75;而且S100,P75的m RNA水平也明显上调,并且可以观测到GFAP的m RNA条带。结论:化学诱导法,可以将脐带间充质干细胞诱导分化为类许旺细胞,有望为组织工程神经提供一种新的许旺细胞来源。; 祝加学陆雄伟沈尊理秦金保王洋金晨; 关键词：脐带间充质干细胞类许旺细胞

一种大量快速分离脐带间充质干细胞的新方法被引量：5: 2010年; 目的：探讨体外快速大量分离脐带间充质千细胞的新方法。方法：采用复合胶原NB4、dispasell、透明质酸酶三种酶消化3h，加入PBSA溶液稀释，离心获得脐带间充质干细胞，培养；用流式细胞仪对P3代细胞进行表面标记的鉴定，用化学诱导的方法使第3代细胞向脂肪、骨、软骨细胞分化，2～4周后，分别行oil red、Safranin’O和茜素红染色，倒置显微镜下观察诱导结果。结果：经3种酶消化和PBSA稀释，短时间内从脐带中获得了大量间充质干细胞；伴随着细胞的传代，形态逐渐均一，传至第3代，细胞的形态已基本相似；流式细胞仪鉴定，细胞强表达间充质细胞的特异性标记CD90，CD73，CD105，而不表达造血系或内皮系细胞的标记CD45、CD14、CD11、CD34、CD19，也不表达主要组织相容性抗原HLA—DR；向脂肪细胞诱导后第4周，oilred染色见细胞内大量红染的脂滴；向软骨细胞诱导后第4周，Safranin’O染色见多数切片呈阳性，细胞团块中存在大量软骨特异性的陷窝样结构；向骨细胞诱导后第4周，茜素红染色发现肉眼可见的广泛散在的红色阳性钙结节．结论：本研究所采用的3种酶消化结合PBSA稀释的方法可以快速获得脐带间充质干细胞：; 祝加学沈尊理秦金保张涛孙恒赟金羽青周广东; 关键词：脐带间充质干细胞多向分化

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