上海市教育委员会创新基金(08ZZ19) 作品数:5 被引量:7 H指数:2 相关作者: 赵培林 陶惠红 杨耀琴 蒋涛 周薇 更多>> 相关机构: 同济大学 更多>> 发文基金: 上海市教育委员会创新基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 生物学 更多>>
DC-OVA疫苗在裸鼠体内的抗肿瘤效应 被引量:1 2015年 目的构建靶向树突状细胞(dendritic cell,DC)的肿瘤疫苗DC-OVA系统,探讨DC-OVA肿瘤疫苗在祼鼠体内的抗肿瘤效应及相关机制。方法构建表达肿瘤抗原OVA的树突状细胞。建立携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA,LLC-OVA)的皮下荷瘤裸鼠模型,瘤旁注射DC-OVA疫苗,通过记录肿瘤大小观察肿瘤生长抑制状况。以IHC方法观察肿瘤组织CD3、Nestin、CD133阳性细胞;观察脾DC相关分子(CD11c、OVA)的阳性表达以及T细胞(CD3+)的分布、数量和功能变化。同时,应用ELISA方法检测血清中IL-12的表达水平。结果 DC-OVA疫苗预防组与PBS对照组比较,呈现出明显的肿瘤生长抑制(P<0.05)。与对照组相比,DC-OVA疫苗治疗组肿瘤明显缩小(P<0.001)。疫苗治疗3次组与治疗1次组比较,效果更明显(P<0.05)。于实验第4周,疫苗治疗1次组与对照组比较,CD3阳性表达高,Nestin、CD133阳性表达低(P<0.05);治疗1次组血清IL-12含量较对照组升高(P<0.001);第8周,治疗1次组血清IL-12含量较第4周治疗组及第8周对照组低。结论 DC-OVA疫苗特异性杀伤了LLC-OVA肿瘤细胞,使肿瘤干细胞表达Nestin、CD133减少。 陈晓 周薇 王方策 王龙 蒋涛 赵培林关键词:DC疫苗 肿瘤免疫治疗 裸鼠 HSV-tk基因表达载体的构建及其对A549细胞的杀伤作用 2009年 目的构建自杀基因HSV-tk表达质粒,研究自杀基因疗法对人肺癌细胞的杀伤作用,探讨其治疗肺癌的可行性。方法PCR扩增tk基因带EcoRⅠ、XhoⅠ酶切位点,然后构成建到pcDNA3.0载体中成pcDNA3.0-tk;将pcDNA3.0-tk转染A549肺癌细胞,应用细胞生长曲线和MTT法测定前药GCV对A549细胞的杀伤作用。结果成功获得pcDNA3.0-tk克隆,RT-PCR、Western印迹法证明A549细胞转染pcDNA3.0-tk后可表达自杀基因,GCV能特异性地杀伤A549/tk细胞。结论HSV-tk基因表达质粒构建成功;HSV-tK/GCV系统对肺癌A549细胞有一定的杀伤作用。 高慧 杨耀琴 陶惠红 赵培林关键词:自杀基因 胸苷激酶 基因治疗 靶向树突状细胞的肿瘤疫苗OVA慢病毒载体构建及其体外抗肿瘤效应 被引量:4 2012年 目的构建靶向树突状细胞(dendritic cell,DC)的肿瘤疫苗pHR-CMV-EGFP-OVA慢病毒表达载体,并观察肿瘤抗原特异性DC激活T细胞对小鼠Lewis肺癌细胞(lewis lung carcinoma cell,LLC)的抗肿瘤效应,为肺癌的临床治疗提供实验依据。方法以分子克隆方法构建携带模拟肿瘤抗原鸡卵清蛋白(ovalbumin,OVA)的慢病毒表达载体,经XhoⅠ及XbaⅠ双酶切后电泳和DNA测序验证;应用脂质体法三质粒共转染293T细胞,包装产生慢病毒,转导LLC,进行单克隆化筛选培养后,经RT-PCR、Western blot检测所获得的OVA稳定表达细胞株中OVA的表达;分离纯化小鼠骨髓DC;用慢病毒感染DC;分离纯化小鼠脾T淋巴细胞;应用MLR和MTT法检测肿瘤抗原负载的DC刺激T淋巴细胞对LLC的杀伤作用。结果 (1)构建的pHR-CMV-EGFP-OVA慢病毒表达载体经酶切后电泳和DNA测序,结果显示载体构建正确;(2)获得了纯化的小鼠骨髓来源的DC;(3)获得了携带肿瘤抗原OVA的LLC和DC;(4)负载肿瘤抗原的DC刺激T淋巴细胞能有效地杀伤负载相同肿瘤抗原的LLC。结论本研究成功地构建了携带肿瘤模拟抗原OVA的慢病毒表达载体pHR-CMV-EGFP-OVA,并成功地转导LLC与DC,获得了稳定表达OVA的肺癌细胞株和携带OVA的DC,基于肿瘤抗原靶向DC的抗肿瘤策略能有效地杀伤LLC,为靶向DC的肺癌免疫治疗提供了体外实验依据。 陈帅 李浩博 李牧 杨耀琴 陶惠红 赵培林关键词:慢病毒载体 肿瘤抗原 树突状细胞 OVA基因修饰的树突状细胞疫苗抗裸鼠肺肿瘤效应研究 2016年 目的探讨OVA基因修饰的树突状细胞疫苗(DC-OVA)在肿瘤模拟抗原OVA(ovabumin)的裸鼠肺癌模型体内抗肺肿瘤的效应。方法裸鼠右肺原位接种携带OVA的Lewis肺癌细胞(Lewis lung cancer cell-OVA,LLC-OVA)悬液,建立裸鼠肺癌模型。获取DC,经基因转导制备DC-OVA疫苗。Western印迹法检测OVA蛋白的表达。获取T细胞,进而制备DC疫苗系统(DC-OVA/T)。CCK8试剂检测DC-OVA刺激后T细胞的增殖。模型建立2周后,尾静脉注射DC-OVA/T。Micro-CT扫描荷瘤裸鼠的胸部,观察肺部影像。H-E染色观察肺部及肿瘤组织形态结构。IHC方法观察脾、淋巴结、肿瘤组织中CD8的表达;观察肿瘤组织中SOX2、BMI1的表达。ELISA法检测血清中IL-12水平。结果 Western印迹法在样本中检测出清晰的OVA条带。DC-OVA强有效地刺激了T细胞的增殖(P<0.05)。DC-OVA/T治疗4周,疫苗组裸鼠肺micro-CT未见明显肿瘤阴影;取材,裸眼可见疫苗组病灶减小,H-E染色显示疫苗组的肿瘤组织较少,肺组织形态较完整。疫苗组裸鼠的脾、淋巴结、肿瘤组织内CD8阳性表达均明显高于对照组(P<0.05,P<0.05,P<0.01),肿瘤组织中的SOX2、BMI1阳性表达明显低于对照组(P<0.05,P<0.05);血清中的IL-12含量较对照组明显升高(P<0.001)。结论基因修饰的DC疫苗在裸鼠体内具有强大的抗肺癌效应,为临床治疗肺癌提供了新的实验依据。 周薇 陈晓 王龙 何文娟 赵培林关键词:树突状细胞疫苗 肺肿瘤 肿瘤免疫治疗 裸鼠 肿瘤自杀基因靶向治疗 被引量:2 2014年 自杀基因靶向疗法在恶性肿瘤的治疗方法中占有重要的位置。众多体内体外试验已经证明了自杀基因的肿瘤杀伤效应。目前,相关的临床试验也证实HSV-tk/GCV,CD/5-FC等自杀基因系统具有良好的抗肿瘤效应。然而在临床推广应用上还有很多问题需要解决,如基因靶向转移困难、基因转染效率较低、基因转移后的表达缺乏有效的调控手段和基因杀伤效应较低且难以控制等,这些问题均有待于我们在今后的研究中进一步解决。本文将从自杀基因的种类、载体、作用机制、旁观者效应和临床发展前景,尤其是纳米粒载体和肿瘤干细胞理论的应用等方面进行综述。 蒋涛 赵培林关键词:自杀基因治疗 旁观者效应 肿瘤 肿瘤干细胞 纳米粒