国家质检总局科技计划项目(2009IK025)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
- 相关作者：付丽君李巍骆丹宋铭忻路义鑫更多>>
- 相关机构：东北农业大学更多>>
- 发文基金：国家质检总局科技计划项目更多>>
- 相关领域：农业科学更多>>
- 绵羊肺腺瘤病毒CA基因的原核表达及抗原性检测被引量：1
- 2013年
- 绵羊肺腺瘤病(OPA)于1850年发现,但国内外至今尚未建立绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)的体外培养方法及快速有效的实验室检测方法。为表达JSRV的衣壳蛋白(CA)基因,本研究根据JSRV CA基因编码序列设计特异性引物进行PCR扩增,克隆至pEASY载体中进行测序,并构建重组表达质粒pET-CA,在大肠杆菌中经IPTG诱导表达。重组蛋白经SDS-PAGE检测约为28 ku,主要以可溶形式表达。将纯化的重组蛋白免疫新西兰白兔,制备抗血清。以制备的抗血清对重组蛋白及病毒进行western blot鉴定。结果显示,该抗血清能够识别重组蛋白及天然的JSRV。本研究首次原核表达了完整的CA重组蛋白,并制备了能够与天然JSRV结合的抗CA蛋白的抗血清,为进一步建立JSRV ELISA方法奠定了基础。
- 付丽君李巍谢晓峰唐颖李晓云宋铭忻张子群
- 关键词：原核表达绵羊肺腺瘤病毒衣壳蛋白抗原性
- 绵羊肺腺瘤病毒实时荧光PCR检测方法的建立被引量：1
- 2013年
- 为建立绵羊肺腺瘤病毒(JSRV)实时荧光定量PCR检测方法,本研究根据JSRV的gag基因,选取其保守序列作为检测目的片段,设计并合成相应的引物和TaqM an探针,以自然病例的肺肿瘤组织基因组DNA为模板,经PCR扩增目的基因构建重组质粒pMD-gag,并将其作为阳性标准品,梯度稀释建立标准曲线,得到扩增方程为:y=-0.304x+38.4,扩增效率为100%,线性相关系数为0.999,该方法最低检出量为103拷贝,与其它病原核酸样品无交叉反应,其变异系数在1.374%以内。本研究为快速检测JSRV以及组装检测试剂盒奠定了基础。
- 骆丹路义鑫徐义刚付丽君张子群
- 关键词：绵羊肺腺瘤病毒实时荧光定量PCRTAQMAN探针
