广东省医学科学技术研究基金(2005288)
- 作品数：9 被引量：25H指数：3
- 相关作者：邹亚伟陈福雄吴梓梁卫凤桂关镜明更多>>
- 相关机构：广州医学院第一附属医院南方医科大学中山大学更多>>
- 发文基金：广东省医学科学技术研究基金博士科研启动基金更多>>
- 相关领域：医药卫生生物学更多>>
- 急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞对K562/A02细胞株耐药的影响被引量：3
- 2011年
- 本研究探讨急性淋巴细胞白血病患儿骨髓间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)对K562/A02细胞耐药性的影响及其机制。从白血病患儿骨髓中分离、培养并鉴定MSC;建立K562/A02细胞株与MSC共培养的体系,应用AnnexinV-FITC检测一定浓度的阿霉素(ADM)对不同培养条件下K562/A02细胞凋亡的影响;RT-PCR检测K562/A02细胞中的凋亡基因家族中bcl-2和bax基因;荧光定量PCR检测多药耐药基因mdr1浓度。结果表明,单独培养组白血病细胞早期凋亡率为(8.38±0.29)%,而黏附培养组为(1.97±0.11)%,差异具有统计学意义(p<0.05)。相对于单独悬浮培养的K562/A02细胞,黏附共培养的K562/A02细胞bcl-2基因表达明显增强,bcl-2/bax比值显著增高;K562/A02单独悬浮培养组、黏附共培养组细胞中mdr1的水平比较无统计学差异(p>0.05)。结论:白血病患儿MSC能够使白血病细胞逃避药物的促凋亡作用,K562/A02对阿霉素产生耐药性可能与黏附共培养后bcl-2基因表达增强有关,而与其本身含有的mdr1基因无关。
- 王昭霞杨志敏邹亚伟李敏敏陈福雄钟帼钰关镜明卫凤桂吴上志何振涛吴梓梁
- 关键词：急性淋巴细胞白血病K562/A02细胞耐药
- 人类mdr1基因新型Taq Man-MGB探针实时定量PCR检测方法的建立被引量：1
- 2006年
- 目的建立一种比现有方法敏感、特异性高、重复性好的实时荧光定量PCR检测的新方法检测人类mdr1基因。方法以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1/A为阳性模板,用Primerexpress2.0引物设计软件设计引物和TaqMan-MGB探针,建立荧光定量PCR检测方法。结果当待扩增DNA浓度在3.601×103cps/ml～3.601×109cps/ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,相关系数r2大于0.98。结论应用TaqMan-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确度高等优点,可作为进一步研究人类mdr1基因的方法。
- 邹亚伟胡斌何蕴韶陈福雄封志纯
- 关键词：TAQ实时荧光定量PCR
- 硫鸟嘌呤核苷酸浓度检测在儿童急性淋巴细胞白血病6-巯嘌呤个体化疗中的意义被引量：4
- 2009年
- 目的:建立一种快速、灵敏、高效的方法,检测儿童急性淋巴细胞白血病红细胞中硫鸟嘌呤核苷酸浓度。方法:应用反相高效液相色谱(RT-HPLC)技术,测定急性淋巴细胞白血病患儿红细胞内6-巯嘌呤(6-MP)及其代谢产物[硫鸟嘌呤核苷酸、6-硫代黄嘌呤(6-TX)、6-甲基巯基嘌呤(6-MMP)]浓度。色谱柱为Resolve C18,柱温40℃。流动相A为0.2%的乙酸溶液,流动相B为甲醇。梯度洗脱程序为在16min内流动相B的浓度从0上升到80%。流速1.0mL/min。检测波长为0～12.5min用290nm检测6-硫鸟嘌呤(6-TG)、6-MP和6-TX,12.5min时切换为340nm检测6-MMP。结果:进样体积为10μL时,6-TG和6-TX的线性范围为0～20nmol/mL(r=0.9993,r=0.9980)。硫鸟嘌呤核苷酸浓度与测定后第9天的白细胞计数呈负相关(P<0.01)。结论:RT-HPLC法简便、准确检测6-MP代谢物浓度,有助于个体化的治疗。
- 邹亚伟王昭霞牟德海关镜明卫凤桂翟莺莺陈福雄吴梓梁
- 关键词：白血病淋巴细胞急性儿童
- 高效液相色谱法测定小儿急性淋巴细胞白血病红细胞中硫嘌呤甲基转移酶活性的研究
- 2008年
- 目的探讨急性淋巴细胞白血病患儿红细胞中的硫嘌呤甲基转移酶（TPMT）活性的高效液相色谱（HPLC）测定法。方法采用反相HPLC直接测定酶促反应的产物浓度，从而计算红细胞中TPMT的活性。以S-腺苷-L-甲硫氨酸（S-adenosyl—L—methionine,SAM）作为甲基供给体，6-硫鸟嘌呤（6-thioguanine，6-TG）作为酶反应底物，TPMT催化6-TG生成2-氨基-6-甲基巯基嘌呤（2-amino-6-methyl mereaptopurine，6-MTG），采用高氯酸溶液终止反应及沉淀蛋白，分离上清液进行色谱分析。色谱柱为AichromBond-1 C18柱（5μm，4．6mm×150mm）；等梯度洗脱，流动相为乙腈：0．01mol／L磷酸钾缓；中溶液（用盐酸调pH=2．74）（6：94，V／V），流速为1．0mL／min；柱温为35℃；进样量为50μL。荧光检测器检测，激发波长为310nm，发射波长为390nm。结果6-MTG在0～250μg／L范围内呈良好的线性关系．相关系数r=0．9999，最低检出限为0．093μg／L（S／N=3），回收率为81．4—106．3％。结论本方法操作简便、分析速度快、检出限低、重现性好、易于推广，能满足巯基嘌呤类药物代谢动力学研究和临床用药监测常规分析。
- 邹亚伟王昭霞牟德海喻凌寒关镜明卫凤桂陈福雄叶铁真吴梓梁
- 关键词：急性淋巴细胞白血病高效液相色谱
- 白血病患儿骨髓间充质干细胞对K562/AO_2细胞增殖和凋亡的影响(英文)被引量：2
- 2009年
- 背景:对白血病患儿在白血病细胞获得耐药、抗凋亡特性的过程中机制的研究目前甚少,多数研究集中在正常骨髓间充质干细胞和已建系的基质细胞,而未重视患儿骨髓间充质干细胞与白血病细胞之间的相互作用。目的:课题创新性提出白血病患儿骨髓间充质干细胞可能对白血病细胞株K562/AO2生长增殖及凋亡产生影响的理论假设。设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2007-12/2008-08在广州医学院第一附属医院儿科实验室完成。材料:骨髓间充质干细胞来源于广州医学院第一附属医院住院的30例白血病患儿,其中急性淋巴细胞白血病患儿22例,急性粒细胞白血病8例,患儿家属对实验均签署知情同意书。K562/AO2细胞株由天津血液病研究所提供。方法:Ficoll密度梯度法分离培养白血病患儿骨髓间充质干细胞。设立2组:K562/AO2细胞组单独悬浮培养处于对数生长期的K562/AO2细胞;K562/AO2细胞+骨髓间充质干细胞共培养组在骨髓间充质干细胞贴壁呈融合状态时,加入1×108L-1处于对数生长期的K562/AO2细胞,24h后去除未黏附的K562/AO2细胞。主要观察指标:白血病患儿骨髓间充质干细胞对K562/AO2细胞生长的影响,AnnexinV-FITC法检测阿霉素对K562/AO2细胞凋亡的影响,流式细胞仪测定不同条件培养下的K562/AO2细胞周期,Taqman-MGB探针实时荧光定量PCR检测不同条件培养下耐药基因mdr1的表达。结果:与单独悬浮培养的K562/AO2细胞比较,K562/AO2细胞+骨髓间充质干细胞共培养组的K562/AO2细胞生长较为缓慢,无明显的对数生长期;早期凋亡细胞数明显减少(P<0.05);处于G0～G1期的K562/AO2细胞明显增多,S期细胞减少;K562/AO2细胞mdr1耐药基因的表达无明显差异(P>0.05)。结论:体外细胞学实验结局证实,白血病患儿骨髓间充质干细胞诱导的K562/AO2细胞耐药与mdr1基因无关,而是通过黏附作用改变K562/AO2细胞周期,进而逃避药物的
- 邹亚伟王昭霞陈福雄关镜明卫凤桂吴上志何振涛吴梓梁
- 关键词：骨髓间充质干细胞凋亡耐药基因
- 骨髓间充质干细胞与肿瘤耐药被引量：5
- 2011年
- 在儿童血液系统恶性疾病及实体瘤中，肿瘤细胞和骨髓微环境之间存在动态作用。在骨髓微环境中特殊的“龛”为肿瘤细胞提供一个逃避化疗诱导细胞凋亡的居所并获得耐药表型。骨髓“龛”中的间充质干细胞（mesenchymal stem ceils，MSCs）诱导肿瘤细胞生长和存活，并促成一个促进溶骨、肿瘤生长、存活和耐药的微环境。本文重点对骨髓MSCs的生物学特性及其与肿瘤相互作用的研究进展进行综述。
- 李敏敏邹亚伟陈福雄
- 关键词：肿瘤间充质干细胞耐药
- 急性白血病多药耐药逆转剂的研究进展被引量：2
- 2006年
- 邹亚伟陈福雄吴梓樑
- 关键词：多药耐药逆转剂急性白血病化学药物治疗肿瘤细胞DRUG化疗药物
- 儿童急性白血病细胞P糖蛋白的表达和功能研究
- 2007年
- 目的探讨儿童急性白血病(AL)细胞多药耐药(MDR)的产生机制中,P糖蛋白(Pgp)的表达和作用。方法利用流式细胞术方法分析白血病细胞Pgp的表达,进一步应用多药耐药功能实验:细胞内柔红霉素蓄积实验(IDA)和罗丹明123排出实验(RhE)等研究其作用。结果对22例初诊未治的儿童AL病例进行白血病细胞膜Pgp分析,其中急性淋巴细胞白血病(ALL)患儿组平均表达率(中位数1.37%)略小于急性非淋巴细胞白血病(ANLL)患儿组平均表达率(中位数3.2%),其差异有显著性(P<0.05);对AL患儿作白血病细胞IDA和RhE实验:其中ALL患儿组的平均荧光强度比值(M IR)水平均低于ANLL患儿组MIR水平,其差异无显著性(P>0.05);进一步研究发现AL患儿白血病细胞的Pgp表达水平与上述两种MDR功能实验MIR值之间均无统计学意义上的相关性。结论初诊未治的儿童AL患者中,ALL患儿组白血病细胞膜Pgp平均表达量低于ANLL患儿组平均表达强度;ALL患儿组MIR水平亦低于ANLL患儿组MIR水平,儿童ANLL细胞对化疗药物尤其是柔红霉素容易产生耐药,这可能是导致ANLL患儿诱导化疗缓解率和长期生存率明显低于ALL患儿原因之一。
- 邹亚伟关镜明卫凤桂张辉吴梓梁陈福雄叶铁真封志纯
- 关键词：儿童急性白血病P糖蛋白
- 新型Taq Man-MGB探针实时荧光定量PCR检测人类mdr1基因被引量：9
- 2006年
- 目的建立一种比现有方法敏感、准确性高、重复性好的人类mdr1基因的新型实时荧光定量PCR检测新方法。方法用Primer Express 2．0引物设计软件设计引物和MGB探针,以Taq Man-MGB探针技术为基础,运用Taq Man-MGB探针,以含有目的基因mdr1cDNA的质粒pHaMDR1／A为阳性模板,建立实时荧光定量PCR检测方法。结果所建立方法的最低检测限度为15个基因拷贝／反应,在待扩增DNA浓度为3．061×103 cps／ml-3．061×109cps／ml范围时,模板浓度与循环阈值(Ct)之间的相关性良好,决定系数r2为0．988243。结论应用Taq Man-MGB探针的实时荧光定量PCR方法检测人类mdr1基因,具有灵敏度高、特异性高和精确性高等优点。
- 邹亚伟封志纯胡斌乔英飒吴梓梁陈福雄叶铁真
- 关键词：TAQ实时荧光定量PCR
