国家自然科学基金(30700766)
- 作品数：2 被引量：2H指数：1
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- 应用RNA干扰阻抑小鼠L929细胞MHCⅡ类基因表达及功能的研究被引量：1
- 2009年
- 为了探讨RNA干扰技术对小鼠CⅡTA(II类反式激活因子)以及MHC Ⅱ类基因表达和功能的影响。我们首先设计并合成4条小干扰RNA(small-interfering RNA,siRNA)(siRNA-1、siRNA-2、siRNA-3和siRNA-4)序列,在阳离子脂质体的介导下转染小鼠L929细胞。48h后,用半定量RT-PCR和定量PCR方法检测CⅡTA mRNA的变化;流式细胞仪检测I-Ab分子表达的变化。接着构建了CIITA特异的短发夹状干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)表达载体,通过在靶细胞内转录形成具有特异干扰作用的shRNA,高效、特异的阻断CⅡTA基因的表达,形成Ⅱ类基因功能缺陷或使其表达降低。进一步混合淋巴细胞反应观察同种异基因CD4+T细胞对稳定转入RAN干扰载体的L929细胞的免疫应答强度,结果证实该L929细胞对不同受者CD4+T细胞的刺激能力分别下降73.90%和76.34%。以上结果为减低同种异体/异种器官细胞性排斥提供了新的思路和手段。
- 路丽明丁庆杨能周晓荣周芸周光炎
- 关键词：SIRNA
- 天花粉蛋白抑制同种异体混合淋巴细胞反应与诱导IL-9＋IL-10／IL-24＋Th9细胞间关系的初步探讨被引量：1
- 2012年
- 建立同种异体混合淋巴细胞反应(MLR)体系,采用同位素3 H-TdR掺入、FACS、Real-time PCR、ELISA、Westernblot等方法研究低剂量Tk抑制细胞增殖反应的效果及作用机制。FACS及同位素掺入检测结果显示,低剂量Tk通过非RIP的方式显著抑制MLR的增殖;Real-time PCR及ELISA结果表明,天花粉抑制的增殖体系中较对照组IFN-γ表达水平降低,IL-4、IL-9、IL-10、IL-24表达水平增强;Western blot显示,Tk使得JNK磷酸化增强。以上结果说明Tk显著抑制人同种异体混合淋巴细胞增殖反应,其负向免疫调节作用可能由多种细胞因子、信号通路及T细胞亚群的介导参与。
- 李青路丽明周光炎
- 关键词：天花粉蛋白负向调节
