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国家自然科学基金(30170987)

作品数:8 被引量:10H指数:2
相关作者:于秉治张杰宿文辉刘莹宗志红更多>>
相关机构:中国医科大学辽宁中医药大学更多>>
发文基金:国家自然科学基金更多>>
相关领域:生物学医药卫生更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 4篇生物学
  • 4篇医药卫生

主题

  • 4篇细胞
  • 3篇蛋白
  • 3篇基因
  • 3篇HBRP
  • 2篇真核
  • 2篇真核表达
  • 2篇细胞系
  • 2篇活性
  • 2篇基因工程
  • 2篇核表达
  • 1篇蛋白纯化
  • 1篇蛋白激酶
  • 1篇蛋白激酶A
  • 1篇蛋白激酶C活...
  • 1篇新基因
  • 1篇亚细胞
  • 1篇亚细胞定位
  • 1篇印迹
  • 1篇真核细胞
  • 1篇融合蛋白

机构

  • 7篇中国医科大学
  • 1篇辽宁中医药大...

作者

  • 7篇于秉治
  • 6篇张杰
  • 5篇宿文辉
  • 4篇刘莹
  • 3篇宗志红
  • 3篇惠答美
  • 2篇张哲
  • 1篇李雪莲
  • 1篇宗志宏
  • 1篇张丽雁
  • 1篇师秀艳
  • 1篇刘奕

传媒

  • 2篇中国医科大学...
  • 1篇生殖与避孕
  • 1篇细胞生物学杂...
  • 1篇生物医学工程...
  • 1篇细胞与分子免...
  • 1篇中国生物工程...
  • 1篇Journa...

年份

  • 2篇2007
  • 3篇2006
  • 1篇2005
  • 2篇2004
8 条 记 录,以下是 1-8
排序方式:
人牛精浆相关蛋白的亚细胞定位及生物活性
2006年
利用红色荧光蛋白表达载体pDsRed1-N1与人睾丸中牛精浆相关蛋白基因(hbrp)重组为pDsRed1-N1/hbrp,真核表达载体pcDNA3.1-myc-his与hbrp重组为pcDNA3.1-myc-his/hbrp,分别转染HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系。在荧光显微镜下观察HBRP的亚细胞定位,并用放射自显影检测该细胞系的蛋白激酶C(PKC)活性。HBRP定位在细胞膜及胞浆近膜处;HBRP对PKC活性有明显的抑制作用。从而确定了人新的精子结合蛋白HBRP在细胞内的定位,并认定了HBRP为有生物活性的功能蛋白。
张杰刘莹宗志红宿文辉于秉治
关键词:亚细胞定位蛋白激酶C活性
人新基因HBRP基因工程细胞系的建立被引量:1
2004年
在研究牛精浆蛋白 (bovineseminalplasmaproteins ,BSPproteins)及其相关蛋白在受精卵发育过程中的重要作用时 ,在人睾丸组织中发现并克隆了一个与BSP蛋白相关新基因的序列 ,其开放阅读框架 (openreadingframe ,ORF)编码了一个含 2 2 3个氨基酸残基的蛋白质 ,氨基酸序列中含有4个纤连蛋白Ⅱ型结构域 ,与BSP蛋白在结构上有一定的相似性 ,称其为人BSP相关蛋白 (humanBSP relatedprotein ,HBRP) ,并在GenBank注册 ,登录号为AF2 791 4。预测该蛋白是与BSP蛋白功能相关的结合蛋白 ,并已成功地将该基因定位在 1 9号染色体 1区 3带上。为进一步研究该新基因的生物学功能 ,利用重组质粒pEGFP C2 HBRP转染人胚肾HEK2 93细胞 ,通过G41 8筛选出药物抗性克隆 ,建立了稳定的基因工程细胞系 ,为该基因功能的研究奠定了基础 。
张杰刘莹惠答美宿文辉宗志红于秉治
关键词:基因工程细胞系19号染色体
人新的精子结合蛋白HBRP新功能的研究被引量:2
2004年
目的:探讨新发现的人睾丸组织中与精浆蛋白BSP相关的新基因的生物学功能。方法:利用真核重组表达质粒pcDNA3/HBRP转染人胚肾HEK293细胞,建立稳定的真核表达细胞系,并用放射自显影检测该细胞系的PKC活性。结果:HBRP蛋白对PKC活性有明显的抑制作用。结论:确定了人新的精子结合蛋白HBRP的功能之一是抑制PKC活性。
张杰刘莹宗志宏惠答美刘奕于秉治
关键词:HBRP真核表达PKC活性
人睾丸精子结合蛋白-His6融合蛋白在真核细胞中的表达及亲和纯化被引量:7
2006年
目的:构建含有人睾丸精子结合蛋白基因(testisspermbindingprotein,tsbp)的真核表达载体pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp,并进行表达和纯化。方法:以克隆有tsbp全长cDNA序列的原核表达载体pGEX5X1/tsbp为模板,用PCR扩增tsbp,并通过DNA重组构建真核表达载体pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp。以重组体稳定转染HEK293细胞后,应用RTPCR、Westernblot和细胞免疫荧光技术检测His6tsbp融合蛋白的表达。选择高表达量的细胞克隆,扩增并用Ni2+NTA金属亲和层析柱(IMAC)从细胞裂解液中纯化融合蛋白His6tsbp,纯化产物的纯度用SDSPAGE和Westernblot进行鉴定。结果:成功地构建了真核表达载体pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp。以重组体转染HEK293细胞后,用RTPCR检测到tsbpmRNA的表达。细胞免疫荧光染色呈阳性反应,Westernblot检测到培养细胞中有融合蛋白His6tsbp的表达。经Ni2+NTA金属亲和层析柱分离纯化,得到纯化的重组蛋白His6tsbp。结论:构建了pcDNA3.1/mycHis(-)B/tsbp真核表达载体,并在HEK293细胞中表达和亲和层析纯化,为下一步的研究奠定了基础。
宿文辉张杰张丽雁宗志红张哲于秉治
关键词:基因克隆融合蛋白真核表达
人新的精子结合蛋白HBRP真核表达体系的建立
2005年
目的:为进一步研究人牛精浆蛋白(bovine sem inal p lasm a,BSP)相关蛋白(hum an BSP-related prote in,HBRP)的生物学功能,建立稳定表达的细胞系。方法:利用重组质粒pEGFP-C2/HBRP转染人胚肾HEK293细胞,通过G418筛选出药物抗性克隆,并进一步进行培养、传代。结果:建立了新基因HBRP稳定表达的基因工程细胞系。结论:实现了利用真核细胞系表达HBRP蛋白,为该蛋白功能的研究奠定了基础,对该基因功能的进一步研究有重要的意义。
张杰刘莹惠答美宿文辉李雪莲于秉治
关键词:基因工程细胞系
Investigation of Function of Novel Sperm Binding Protein HBRP in Human
2007年
Objective To investigate the biology function of novel protein related to bovine seminal plasma protein in human testis. Methods Recombination pcDNA3/HBRP was constructed and transfected to HEK293 cell and permanently expression cell line was established. The activity of protein kinase C (PKC) of the cell line was detected by autoradiography method. Results The stable expression cell line of HBRP was obtained. The HBRP inhibited the activity of PKC significantly. Conclusion One of the new functions of novel sperm binding protein in human is the inhibitor action on activity of PKC. It may be involved in the sperm capacitation and acrosome reaction.
Jie ZHANG Ying LIU Wen-hui SU Guo-li WANG Zhi-hong ZONG Bing-zhi YU
关键词:HBRP
重组人睾丸精子结合蛋白对蛋白激酶A活性的影响被引量:4
2007年
为探讨人睾丸精子结合蛋白(TSBP)在精子获能及顶体反应中可能发挥的作用,检测了TSBP重组蛋白在体外转染细胞系中对蛋白激酶A活性的影响。构建真核表达载体pcDNA3.1/myc-His(-)B/tsbp,稳定转染HEK293细胞后,蛋白免疫印迹检测到培养细胞中融合蛋白的表达。选择表达量高的细胞克隆,扩增并用金属亲和层析柱(IMAC)从细胞裂解液中纯化融合蛋白His6-TSBP。用放射自显影法检测HEK293细胞中蛋白激酶A(PKA)活性,发现重组质粒转染组PKA活性高于对照组,确定了TSBP对PKA活性的促进作用。
宿文辉张哲张杰于秉治
关键词:蛋白纯化蛋白激酶A
G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34^(cdc2)电泳迁移率的差异
2006年
目的:探讨小鼠卵母细胞不同细胞周期时相中,由于p34cdc2不同磷酸化状态所引起的电泳迁移率变化。方法:用免疫印迹(W estern b lot)技术观察G2期和MⅡ期小鼠卵母细胞中p34cdc2电泳迁移率的变化。结果:p34cdc2在G2期只表现两条带即上、中带;而MⅡ期表现为中、下带。结论:可以用电泳迁移率的变化作为观察p34cdc2磷酸化状态的一种方法。
师秀艳于秉治
关键词:WESTERN印迹P34^CDC2卵母细胞
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