国家自然科学基金(30170990)
- 作品数：12 被引量：19H指数：3
- 相关作者：蔡方成张晓萍向淑利束晓梅邓兵更多>>
- 相关机构：重庆医科大学遵义医学院附属医院重庆医科大学附属第二医院更多>>
- 发文基金：国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- galE基因敲除后空肠弯曲菌变异株毒力的改变
- 2005年
- 目的:研究galE基因敲除后空肠弯曲菌变异株的毒力改变。方法:使用Hep - 2细胞进行空肠弯曲菌野生株(CJHB9313)和galE变异株的黏附和侵袭实验,并比较两者血清敏感性和运动力的变化。结果:发现亲代株CJHB93及galE变异株对Hep - 2细胞黏附力分别为8.3%及1.2 % ,变异株的黏附力仅为亲代株的14 .5 % ,有显著差异(P <0 .0 1) ;CJHB9313及变异株对Hep - 2细胞侵袭力分别为5 .6 %及0 .3% ,变异株侵袭力仅为亲代株的5 .4 % ,差异也具显著性(P <0 .0 1) ;还发现亲代株及变异株对血清的敏感性也发生变化,与10 %血清孵育30min及6 0min后,前者存活77.6 %及6 7.0 % ,后者存活33.6 %及8.4 % ,均存在显著差异(P <0 .0 5 ) ;但变异株的运动力与亲代株无明显差异。结论:galE变异株的毒力明显减低。
- 束晓梅蔡方成
- 关键词：空肠弯曲菌变异株毒力
- 空肠弯曲菌粘附蛋白PEB1的克隆表达及免疫保护性初步探索被引量：10
- 2003年
- 冯永嘉蔡方成刘杞邓兵
- 关键词：空肠弯曲菌粘附蛋白克隆免疫保护性
- neuB1基因失活空肠弯曲菌突变株的构建及其临床意义被引量：4
- 2005年
- 目的构建唾液酸合成酶基因1(neuB1)失活、脂多糖(LPS)中唾液酸(SA)缺失的空肠弯曲菌(Campylobacterjejuni,Cj)O∶19突变株,以确认CjLPS中,含SA基团的终端GM1样结构在Cj相关格林-巴利综合征(GBS)发病机理中的关键作用。方法从已有neuB1基因失活的Cj肠炎相关菌株O∶2DNA中,将含卡那霉素抗性基因(KmRcassette)的neuB1突变片段———neuB1::KmR克隆到pGEM-T载体,形成突变载体pGEM-neuB1::KmR,进一步转化到与GBS相关的CjO∶19野生株,获得CjO∶19突变株,行PCR和RT-PCR鉴定。SDS-PAGE分析CjLPS,过碘酸-间苯二酚和酸性茚三酮反应法分别检测CjLPS中SA。霍乱毒素B亚单位(CTB)结合反应检测Cj菌体裂解物及LPS中神经节苷脂GM1模拟结构。最后以突变株及其同源野生株LPS为抗原分别免疫豚鼠,第5周取坐骨神经原纤维分离。结果neuB1基因突变片段———neuB1::KmR成功克隆到pGEM-T载体中,进而构建得neuB1基因失活的Cj突变株。后者LPS已丧失SA基团且不能与CTB结合,表明其菌体裂解物和LPS中已不存在GM1模拟结构。野生株LPS免疫组中,17.3%的坐骨神经原纤维发生免疫性损伤,明显高于PBS对照组(1.6%)和突变株LPS免疫组(2.4%);而突变株LPS免疫组与PBS对照组间差异无统计学意义。结论成功构建neuB1基因失活的CjO∶19突变株,其LPS已缺失野生株所具有的SA基团及与GM1的分子模拟特性,且不能再诱导活体动物的周围神经免疫性损伤,有力证实了关于CjLPS诱发GBS的分子模拟推论,SA是该交叉免疫反应中抗原的重要成分。
- 向淑利蔡方成邓兵张晓萍
- 关键词：空肠弯曲菌唾液酸格林-巴利综合征基因失活突变株神经节苷脂GM1
- 空肠弯曲菌黏附蛋白(PEB1)基因工程疫苗外周神经安全性的实验研究被引量：1
- 2005年
- 目的以空肠弯曲菌(campylobacterjejuni,CJ)菌体全抗原为对照,以基因重组的该菌融合黏附蛋白(TrxA/PEB1)作为CJ疫苗免疫大鼠,并对其神经安全性进行实验性评价。方法分别以纯化的TrxA/PEB1和CJPen19菌体全抗原经全身免疫增强法免疫大鼠,初次免疫后第2、4、5周采用ELISA法动态观察抗体滴度,并分别于第3、5周分离坐骨神经原纤维及行甲苯胺蓝染色光镜观察。采用ELISA法检测第5周抗血清与GM1抗原的结合反应。神经外膜下注射抗TrxA/PEB1和抗CJ全菌抗原的特异性抗血清,观察其神经病理学改变。结果(1)经两种抗原免疫后,大鼠均产生高滴度特异性IgG,且各自与两种抗原发生交叉反应;(2)以CJPen19全抗原免疫后抗血清可与GM1抗原结合,而TrxA/PEB1免疫者则否;(3)CJPen19免疫组有60%大鼠坐骨神经出现以轴索变性为主的免疫性损伤,而TrxA/PEB1融合蛋白免疫者则未发生;(4)CJPen19免疫血清神经外膜下注射后全部大鼠均发生轴索变性为主的病变,且75%为显著病变,而TrxA/PEB1免疫血清外膜下注射后却未引起明显病变。结论CJPen19全菌抗原和TrxA/PEB1纯化蛋白作为免疫原均可激发大鼠有效体液免疫应答,但与CJ全菌抗原相比,TrxA/PEB1蛋白所产生的全身免疫反应未引起周围神经损伤,其抗血清不含针对GM1抗原的抗体。
- 冯永嘉蔡方成刘杞张晓萍
- 关键词：空肠弯曲菌黏附蛋白疫苗神经损伤
- 吉兰-巴雷综合征与神经节苷脂抗体被引量：2
- 2004年
- 近年来已有大量资料显示轴索型吉兰-巴雷综合征与多种神经节苷脂抗体，如抗 GMl、GDIa、GMIb 和GalNAc-GDla 等抗体关系密切；空肠弯曲菌前驱感染与轴索型吉兰-巴雷综合征的关系也引起广泛关注。另外，已经公认 GQlb 抗体与 Miller Fisher 综合征(吉兰-巴雷综合征的变体)的关系稳定，尤其 GQlb-IgG 抗体可作为MFS 的特异性标志。认为抗神经节苷脂抗体可能在吉兰-巴雷综合征发病中起重要作用。
- 束晓梅蔡方成
- 关键词：吉兰-巴雷综合征特异性标志
- 空肠弯曲菌HB9313及galE变异株抗血清诱导周围神经病变的差异
- 2005年
- 束晓梅蔡方成张晓萍
- 关键词：周围神经病变变异株空肠弯曲菌感染抗神经节苷脂轴索型
- 灭活全菌neuB1失活空肠弯曲菌突变株口服免疫BALB/c小鼠的实验研究
- 2007年
- 目的探讨neuB1失活CjO：19突变株灭活全菌苗的免疫原性及其对抗Cj野生株攻击的免疫保护性。方法以突变株灭活菌体，经口途径以不同剂量免疫BALB／c小鼠，ELISA法检测小鼠肠腔灌洗液和血液中的抗体应答；并以5×10^9CFU野生株进行攻击，计算疾病指数。结果免疫后7d肠灌洗液中的抗Cj特异性sIgA和21d血清中特异性IgG及IgA滴度均显著增高；免疫组的疾病指数分别由0．83降至0．31～0．36，保护率为57％～63％。结论突变株灭活全菌苗经口免疫，能诱导动物产生显著有效的体液免疫应答，证实突变株灭活全菌苗具有显著的免疫原性；突变株灭活全菌苗经口服免疫，能有效保护免疫小鼠免受野生株的攻击，基于该突变株良好的免疫活性且无分子模拟所致的神经毒性，有望成为理想的Cj全菌疫苗候选者。
- 向淑利蔡方成张晓萍邓兵
- 关键词：弯曲杆菌空肠
- 空肠弯曲菌galE变异株免疫原性及免疫保护性评价
- 2005年
- 目的评价galE变异株免疫原性及免疫保护效力。方法分别采用galE变异株低菌量及高菌量单次或重复免疫(口服)BALB/c小鼠,ELISA方法检测动物肠液及血清中特异性sIgA及IgG的滴度。免疫后26d,用大剂量CJ攻击被免疫动物,观察galE变异株的保护效应。结果①低菌量及高菌量galE变异株单次或重复免疫后,动物肠液及血液中sIgA及IgG滴度均明显增高,与阴性对照组比较差异非常显著(P<0.01);未显示低剂量与高剂量之间、单次免疫与重复免疫之间抗体水平有明显差异(P>0.05);与亲代株免疫组比较,抗体水平也无明显不同(P>0.05)。②galE变异株免疫可明显降低动物受CJ攻击后的疾病指数(P<0.01),变异株的临床保护效率为79.5%～83.1%;清除CJ肠定植的能力明显高于阴性对照组(P<0.05);低菌量与高菌量之间,单次及重复免疫清除肠道感染效力无明显差异(P>0.05)。结论①galE变异株保留与亲代株相似的免疫原性及免疫保护性,可刺激动物产生特异性抗体,有效保护细菌攻击,明显降低动物疾病指数,缩短细菌肠道定植时间。②galE变异株仅小剂量单次口服即可产生良好的免疫效果。
- 束晓梅蔡方成
- 关键词：空肠弯曲菌变异株活菌苗免疫原性免疫保护
- galE基因敲除后空肠弯曲菌变异株生物学特性的改变
- 2005年
- 束晓梅蔡方成
- 关键词：空肠弯曲菌脂寡糖毒力
- neuB1失活空肠弯曲菌O∶19突变株感染致病力的初步研究被引量：1
- 2007年
- 目的探讨neuB1失活空肠弯曲菌(Campylobacter jejuni,CJ)O∶19突变株的感染致病力。方法由CJ O∶19野生株构建neuB1灭活的突变株,检测其对正常人血清杀菌活性的敏感性、运动力和自身凝集(AAG)活性,并与野生株进行比较。结果突变株对10%正常成人血清(normal human serum,NHS)杀菌活性的敏感性高于同源的野生株(P<0.05),孵育15min和60min后突变株存活率分别为(20.6±7.4)%和(9.6±3.6)%,而野生株分别为(36.9±5.9)%和(15.5±4.3)%,但突变株的运动力和AAG活性与野生株比较却没有显著性差异(P>0.05)。结论neuB1失活CJ O∶19突变株仍具有较强的感染致病力,因而应考虑灭活后突变菌株疫苗的开发研究。
- 向淑利蔡方成张晓萍
- 关键词：空肠弯曲菌突变株
