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排序方式：

大鼠脑源性神经营养因子基因真核表达载体的构建及其在COS-7细胞中的表达被引量：1: 2012年; 构建脑源性神经营养因子（BDNF）基因真核表达载体，检测其转染COS-7细胞后的表达。方法：从大鼠海马组织中提取总RNA，采用RT-PCR方法获得目的基因片段，克隆至pGEM-T载体中。经测序确证后将BDNFcDNA片段与pEGFP-N1载体定向连接。将鉴定正确的重组体pEGFP-N1-BDNF以脂质体法转染至COS-7细胞中，用RT-PCR鉴定BDNFmRNA的表达，免疫印迹法检测BDNF蛋白质表达水平。结果：克隆了BDNF的cDNA，并构建了其真核表达载体pEGFP-N1-BDNF，经限制性内切酶酶切鉴定及测序分析证实了其序列的正确性；免疫印迹法分析显示，转染48h时，COS-7细胞以分泌proBDNF-GFP融合蛋白为主，在96h以分泌成熟BDNF-GFP融合蛋白为主。结论：成功构建pEGFP-N1-BDNF真核表达载体，并且在COS-7细胞中得到高效表达，BDNF前体及成熟体同时分泌到胞外，在不同时间点分泌组合不同。; 欧阳长杰滕大才曲德伟王德广徐铁军; 关键词：脑源性神经营养因子基因重组质粒基因表达 COS-7细胞

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徐州市科技计划项目(XM098084)