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江苏省自然科学基金(BK2008114)

作品数:8 被引量:44H指数:4
相关作者:黄朝晖胡瑜华东程之红余坚更多>>
相关机构:苏州大学附属第四医院上海市肿瘤研究所复旦大学附属肿瘤医院更多>>
发文基金:江苏省自然科学基金更多>>
相关领域:医药卫生更多>>

文献类型

  • 8篇中文期刊文章

领域

  • 8篇医药卫生

主题

  • 6篇甲基化
  • 5篇限制性内切酶
  • 5篇内切
  • 5篇内切酶
  • 5篇DNA甲基化
  • 4篇基因
  • 3篇血浆
  • 3篇细胞
  • 3篇细胞癌
  • 3篇分子
  • 3篇分子诊断
  • 3篇肝细胞
  • 3篇肝细胞癌
  • 2篇定量PCR检...
  • 2篇循环DNA
  • 2篇基因甲基化
  • 2篇分子诊断技术
  • 1篇定量PCR
  • 1篇多基因
  • 1篇信号

机构

  • 7篇苏州大学附属...
  • 4篇复旦大学附属...
  • 4篇上海市肿瘤研...
  • 1篇苏州大学
  • 1篇无锡市第四人...

作者

  • 8篇黄朝晖
  • 5篇程之红
  • 5篇华东
  • 5篇胡瑜
  • 4篇余坚
  • 4篇杜祥
  • 3篇谢其根
  • 3篇王丰
  • 3篇王琼瑶
  • 3篇吴玉玉
  • 1篇朱东明
  • 1篇戴赛民
  • 1篇邱东民
  • 1篇李德春
  • 1篇郭子健
  • 1篇周锡科
  • 1篇费伯健
  • 1篇张勇

传媒

  • 4篇中国癌症杂志
  • 2篇肿瘤
  • 1篇中华病理学杂...
  • 1篇苏州大学学报...

年份

  • 6篇2011
  • 1篇2010
  • 1篇2009
8 条 记 录,以下是 1-8
排序方式:
血浆GSTP1和SFRP1基因甲基化分析在肝细胞癌早期诊断中的价值被引量:6
2011年
背景与目的:DNA甲基化是一种新的肿瘤诊断及预后判断的标志物。本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法检测血浆GSTP1和SFRP1基因的DNA甲基化状态,探讨其在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)早期诊断中的价值。方法:收集150例血浆标本,包括72例HCC,37例肝良性病变和41名健康对照者。用MSRE-qPCR法检测血浆GSTP1和SFRP1基因DNA甲基化水平。结果:HCC患者血浆GSTP1和SFRP1甲基化阳性率分别为54.2%和27.8%,显著高于健康对照组(9.8%和2.4%,P<0.001)和肝良性病变组(10.8%和5.4%,P<0.001);同时检测血浆GSTP1和SFRP1可检出63.9%的HCC;而联合血清AFP分析可进一步将HCC诊断率提高至73.6%。结论:联合检测血浆GSTP1和SFRP1基因DNA甲基化对于HCC早期非侵入性诊断具有重要价值。
王丰华东吴玉玉程之红胡瑜谢其根王琼瑶杜祥黄朝晖
关键词:限制性内切酶肝细胞癌血浆
MSRE-qPCR技术分析多基因DNA甲基化对肝细胞癌的诊断价值被引量:18
2011年
背景与目的:DNA甲基化是潜在的肿瘤标志物。本研究运用自行建立的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法检测肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)组织中多个基因的DNA甲基化状态,筛选可用于HCC诊断的DNA甲基化标志物组合。方法:以47对HCC患者癌组织和癌旁组织、8例正常人肝组织为材料,运用MSRE-qPCR方法检测这102例肝组织中APC、GSTP1、RASSF1A、p16、SFRP1、RUNX3、Hint1、SOCS1和HIC-1基因的启动子甲基化状态。结果:APC、GSTP1、RASSF1A、p16、SFRP1、RUNX3基因在肿瘤组织中的甲基化率分别为70.2%、70.2%、63.8%、29.8%、44.7%和36.2%,均显著高于对应癌旁组织(P均<0.05);而Hint1、SOCS1和HIC-1基因甲基化水平在HCC肿瘤和癌旁组织间无显著差异。联合检测APC、GSTP1、RASSF1A和SFRP1 4个靶点,可检出所有HCC病例。这些基因的甲基化水平与患者肿瘤大小、分化、包膜及HBV感染等临床病理参数均无显著相关性。结论:联合检测APC、GSTP1、RASSF1A和SFRP1的DNA甲基化状态对于HCC风险评估和分子诊断具有重要价值。
邱东民余坚黄朝晖
关键词:DNA甲基化限制性内切酶肝细胞癌
Stat3 mRNA靶向MicroRNA重组质粒的构建及其在HepG2肝癌细胞系中的表达被引量:1
2011年
目的构建并筛选靶向信号转导和转录激活因子3(Stat3mRNA)的微小RNA(MicroRNA)表达质粒。观察其在肝癌细胞系HepG2中对Stat3表达的影响。方法针对人Stat3mRNA设计3条MicroRNA序列,经退火成互补双链,将双链DNA插入线性质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR质粒中,分别构建重组表达质粒pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1、2、3等3组质粒,并测序鉴定。脂质体法转染重组质粒至人肝癌HepG2细胞中,观察转染效果。RT-PCR和Western blot分别检测Stat3mRNA和蛋白的表达,流式细胞术检测细胞凋亡,MTT法检测细胞增殖能力。结果成功构建靶向Stat3的MicroRNA重组质粒,经测序证实插入的DNA片段的序列与设计序列完全一致,转染人肝癌HepG2细胞后,荧光显微镜下可观察到带有绿色荧光的HepG2细胞。流式细胞仪检测3组质粒的转染效率分别为:76%、73%和63%。RT-PCR分析pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1、2、3的抑制率分别为:73.5%、47.2%和39.6%,下调Stat3蛋白的比例分别为:89.1%、71.6%、67.3%。其中pcDNA6.2-GW/EmGFP-miR-1的下调效应最明显。MiR-1质粒转染组的细胞凋亡率升高,增殖受抑制,与阴性对照质粒组和未转染组比较,差异均有高度统计学意义(均P<0.01)。结论成功构建了靶向Stat3的MicroRNA表达质粒,其对肝癌HepG2细胞Stat3的表达及增殖有显著抑制。
张勇李德春郭子健戴赛民黄朝晖朱东明
关键词:信号转导和转录激活因子3微小RNARNA干扰重组质粒
甲基化敏感限制酶结合定量PCR检测DNA甲基化方法的建立与应用被引量:4
2011年
启动子CpG岛高甲基化是抑癌基因失活的重要机制之一,对于肿瘤的早期诊断、分子分型、预后判断等均具有较大的价值。目前较常用的DNA甲基化检测技术是基于亚硫酸氢盐处理的甲基化特异PCR方法(MSP),但该技术需使用强碱对DNA进行处理,导致绝大多数DNA分子发生断链。限制性内切酶广泛应用于DNA甲基化分析,其中甲基化敏感性限制内切酶(MSRE)只能切割非甲基化的靶位点;
黄朝晖吴玉玉华东胡瑜王丰程之红余坚杜祥
关键词:DNA甲基化定量PCR检测限制酶限制性内切酶
血浆Ras相关区域家族蛋白1A基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值被引量:5
2011年
目的:建立一种可检测微量DNA标本中DNA甲基化的甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzymes-based quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并运用该技术探讨血浆Ras相关区域家族蛋白1A(Ras association domain family1A,RASSF1A)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellutar carcinoma,HCC)非侵入性诊断中的价值。方法:用MSRE HhaⅠ消化DNA样品,再用qPCR技术分析酶切结果,建立检测RASSF1A基因甲基化的MSRE-qPCR方法。以45例肝组织(20对HCC患者手术切除肿瘤标本及匹配非癌组织和5例正常肝)为材料,测试该方法的应用价值;运用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulf ite sequencing PCR,BSP)技术进行进一步验证,并与甲基化特异性PCR(methylation specif ic PCR,MSP)方法相比较。再运用该技术检测150例血浆标本(包括72例HCC患者、37例肝硬化或慢性肝炎等良性病变患者和41例健康对照)的RASSF1A基因甲基化状态,并分析其与HCC患者临床病理参数的关系。结果:MSRE-qPCR法可定量检测低至1%以下的RASSF1A甲基化片段。20例HCC组织中有14例(70%)发生RASSF1A高甲基化,对应非癌组织中RASSF1A甲基化阳性率为25%,而5例正常肝组织均为阴性。MSRE-qPCR结果经BSP验证无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性。HCC患者血浆RASSF1A甲基化阳性率(47/72,65.3%)显著高于健康对照(1/41,2.4%)和肝良性病变组(3/37,8.1%),差异均有统计学意义(P<0.0001)。联合检测血浆RASSF1A甲基化与血清AFP可显著提高HCC诊断效率。结论:建立的MSRE-qPCR方法要求样本少、操作简便、成本低廉,可定量检测RASSF1A基因甲基化水平。血浆RASSF1A甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值。
费伯健黄朝晖华东胡瑜程之红余坚
关键词:DNA甲基化血浆分子诊断技术限制性内切酶
腺瘤性结肠息肉病基因甲基化在肝细胞癌分子诊断中的价值被引量:1
2011年
目的:建立甲基化敏感性限制性内切酶-定量PCR(methylation-sensitive restriction enzyme-quantitative PCR,MSRE-qPCR)方法,并应用该方法探讨血浆腺瘤性结肠息肉病(adenomatous polyposis coli,APC)基因甲基化检测在肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)诊断中的应用价值。方法:用HhaⅠ消化DNA样品,qPCR技术评估酶切效率,建立优化的MSRE-qPCR方法。用MSRE-qPCR法检测45例肝组织(20例HCC及其相应匹配的非癌组织和5例正常肝组织)中APC甲基化水平;应用亚硫酸氢盐测序PCR(bisulfi te sequencing PCR,BSP)对MSRE-qPCR检测结果进行验证,并与甲基化特异性PCR(methylation-specifi c PCR,MSP)检测方法比较。运用MSRE-qPCR技术检测72例HCC、37例肝良性病变和41例健康志愿者血浆标本的APC甲基化状态。结果:建立的MSRE-qPCR方法可定量检测低至1%的APC甲基化片段。MSRE-qPCR和MSP检测结果均显示,HCC组织中APC基因发生高频率甲基化。MSRE-qPCR检测结果经BSP验证准确无误,且与MSP检测结果具有较好的一致性(Kappa=0.955,P<0.0001)。HCC患者血浆APC甲基化水平高于肝良性病变及健康志愿者(P<0.0001)。血浆APC甲基化分析与血清甲胎蛋白(alpha-fetoprotein,AFP)联合检测可提高HCC诊断效率。结论:MSRE-qPCR可定量检测APC甲基化水平。血浆APC甲基化分析对于HCC的非侵入性诊断具有重要价值。
胡瑜华东程之红吴玉玉谢其根王琼瑶余坚黄朝晖
关键词:DNA甲基化分子诊断技术聚合酶链反应限制性内切酶基因
DNA甲基化在肿瘤无创性分子诊断中的研究进展被引量:3
2009年
DNA甲基化是真核细胞基因组最常见的一种表观遗传学修饰。DNA甲基化异常在肿瘤的发生、发展过程中扮演重要角色。研究显示DNA甲基化是一类潜力很大的肿瘤标志物。肿瘤特异性的DNA甲基化标志物可从肿瘤患者血清/血浆、尿液、粪便和支气管肺泡灌洗液中检出,为进行肿瘤无创性诊断DNA甲基化检测提供了新思路。本文对DNA甲基化在恶性肿瘤早期诊断的研究进展作一综述。
黄朝晖杜祥
关键词:DNA甲基化表观遗传学循环DNA粪便
定量PCR检测肝细胞癌患者血浆循环DNA及其临床意义被引量:9
2010年
背景与目的:血循环DNA是一种新的肿瘤诊断及预后判断的标志物。本研究运用定量PCR技术检测肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)患者血浆循环DNA含量并探讨其诊断价值。方法:收集72例HCC患者术前血浆样本,37例肝良性病变(肝硬化以及慢性肝炎)和41例健康志愿者的血浆样本,纯化血浆循环DNA,采用实时定量PCR技术对血浆DNA水平进行检测。应用接受者操作特性(receiver-operating characteristics,ROC)曲线分析血浆循环DNA在HCC诊断中的价值。结果:HCC中位血浆循环DNA浓度(173ng/mL)显著高于健康对照(9ng/mL)和肝良性病变组(46ng/mL)(P<0.001);其ROC曲线下面积(area under the ROC curve,AUC)分别为0.949和0.874。而HCC血浆DNA浓度也显著高于肝硬化及慢性肝炎患者(P=0.001),AUC为0.703。以18.2ng/mL作为诊断HCC的临界值,其诊断特异度为90.2%,敏感度达90.3%;与血清AFP联合检测可提高HCC诊断效率,AUC上升至0.974,其诊断特异度和敏感度分别为95.1%和94.4%。伴肝内播散或脉管癌栓HCC患者的血浆DNA浓度(261ng/mL)明显高于不伴肝内播散灶或脉管癌栓患者(142ng/mL,P=0.035)。结论:定量PCR技术可精确定量血浆循环DNA浓度;血浆DNA分析对于HCC诊断,预测肿瘤转移潜能具有重要价值。
黄朝晖胡瑜华东程之红谢其根王琼瑶王丰周锡科杜祥
关键词:肝细胞癌血浆定量PCR循环DNA
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