国家自然科学基金(30571796)
- 作品数：7 被引量：26H指数：3
- 相关作者：李士通杨斌周雅春王宏陈兰仁更多>>
- 相关机构：上海市第一人民医院蚌埠医学院第二附属医院更多>>
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- 相关领域：医药卫生化学工程生物学更多>>
- 失神经后骨骼肌萎缩机制及治疗研究进展被引量：11
- 2009年
- 外伤、神经病变等多种疾病可引起神经损伤，骨骼肌失神经支配后不可避免地发生萎缩。而轴突再生需要相当长的时间。在肌肉获得神经再支配前．肌肉已经发生不可逆转的萎缩：近年失神经支配骨骼肌萎缩机制及其防治成为多学科的研究热点．本文对近年来失神经后骨骼肌功能改变及调节肌肉萎缩的机制作一简要综述。
- 杨斌李士通
- 关键词：骨骼肌萎缩失神经支配神经再支配神经病变轴突再生
- 不同时间失神经支配对小鼠骨骼肌乙酰胆碱受体活性的影响
- 2011年
- 目的探讨不同时间失神经支配对小鼠骨骼肌乙酰胆碱受体（AChRs）活性的影响。方法Balb／C小鼠14只，体重18～22g。采用切断坐骨神经的方法制备骨骼肌失神经支配模型。于切断坐骨神经前（L）、切断后1、4、7、14、21和28d（T1-6）时取2只小鼠，急性分离趾短屈肌后，急性分离骨骼肌细胞，每只小鼠取5个骨骼肌细胞，采用全细胞膜片钳技术记录模式。骨骼肌细胞先用含30μmol／L乙酰胆碱的细胞外液灌注10s，记录乙酰胆碱电流（I1），随后细胞外液冲洗60s，然后依次用含0、0．1、1、10、30、100、1000、3000或10000nmol／L阿曲库铵的细胞外液平衡灌注3min，再用含30μmol／L乙酰胆碱和上述不同浓度阿曲库铵的细胞外液分别灌注10s，记录乙酰胆碱电流，随后细胞外液冲洗60s，再次用含30μmlo／L乙酰胆碱的细胞外液灌注10s，记录乙酰胆碱电流（12），取I1和I2的平均值作为对照电流，计算对照电流抑制百分比，采用非线性回归分析计算阿曲库铵阻滞AChRs的半数有效抑制浓度（IC50）。结果与T0时比较，T1-6。时阿曲库铵IC50升高（P〈0．05）；T1-3时阿曲库铵IC50逐渐升高（P〈0．05）；与T3时比较，T4-6。时阿曲库铵IC50逐渐降低（P〈0．05）。结论骨骼肌失神经支配可抑制AChRs的活性，该效应与骨骼肌失神经支配的时间有关。
- 王宏梁启胜陈兰仁代文涛符伟庄心良李士通
- 关键词：去神经支配受体胆碱能
- 稳定表达重组成人型和胎儿型乙酰胆碱受体细胞株的构建
- 2008年
- 目的稳定表达重组成人型乙酰胆碱受体（e—nAChR）和胎儿型乙酰胆碱受体（γ-nAChR）细胞株的构建。方法通过亚克隆技术将含有乙酰胆碱受体亚基基因的原核细胞表达质粒pSP65α、pSP65β、pSP64γ、pSP65δ和pBssKε分别连接到真核细胞表达质粒pcDNA3．1构建阳性重组子pcDNA3．1α、pcDNA3．1β、peDAN3．1γ、pcDNA3．1δ及pcDNA3．1ε，并将含有α、β、δ、ε或α、β、δ、γ亚基基因的重组子按摩尔比2：1：1：1（质粒总量〈1．5μg）转染HEK293细胞。采用G418筛选出有ε或γ亚基基因表达的阳性细胞株，再采用免疫荧光法筛选出表达ε-nAChR或γ-nAChR的细胞株，进一步采用全细胞膜片钳技术筛选出乙酰胆碱诱发ε-nAChR或γ-nAChR产生内向电流的细胞株。结果酶切鉴定结果显示pSP65α、pSP65β、pSP64γ、pSP65δ和pBssKε均正确定向插入pcDNA3．1。未传代、连续传10代及冻存并复苏的表达ε-nAChR和γ-nAChR的细胞株均可呈现稳定的免疫荧光，荧光主要分布在细胞膜表面。乙酰胆碱刺激后，6株转染ε-nAChR的细胞上记录到100～400pA内向电流，3株转染γ-nAChR的细胞上记录到200—600pA内向电流。结论成功构建出稳定表达ε-nAChR和γ-nAChR的细胞株。
- 杨斌周雅春王宏李士通
- 关键词：细胞系
- 稳定表达肌肉型乙酰胆碱受体的细胞株建立和鉴定
- 2008年
- 目的:建立稳定表达骨骼肌细胞乙酰胆碱受体(AChR)的人胚肾(HEK293)细胞系,进行各种药理学研究。方法:将编码小鼠m-nAChR的α、β、γ、δ和ε亚基的cDNA分别重组于真核细胞表达质粒pcDNA3.1,用脂质体转染技术将重组质粒导入HEK293细胞,使其细胞膜上分别表达胚胎型乙酰胆碱受体(γ-nAChR)和成年型乙酰胆碱受体(ε-nAChR)。用G418和免疫荧光技术筛选出稳定表达两种受体亚型的细胞株。结果:在G418反复筛选后的HEK293细胞系中,有14株明显表达ε-nAchR;4株明显表达γ-nAchR,受体大部分表达于细胞膜上。结论:用重组后的pcDNA3.1转染HEK293细胞,经筛选后可以稳定表达m-nAChR。
- 杨斌周雅春李士通
- 关键词：乙酰胆碱受体HEK293细胞基因转染免疫荧光
- 急性失神经支配对大鼠肌肉型乙酰胆碱受体亚型配比的影响被引量：6
- 2008年
- 目的:观察急性失神经支配对大鼠骨骼肌成人型(ε-AChR)和胎儿型(γ-AChR)乙酰胆碱受体表达的影响,探讨影响肌松药作用的可能机制。方法:SD雄性大鼠,行左侧坐骨神经结扎,分别于术后7、14、21、28、35d取腓肠肌组织,通过RT-PCR和Western blot测定两种受体mRNA和蛋白的表达。结果:神经结扎后早期腓肠肌上乙酰胆碱受体总量无明显变化,14d后乙酰胆碱受体总量增加明显,其中ε-AChR表达先降低,后逐渐增加并维持在较高水平;而γ-AChR最初表达很少,神经结扎后表达迅速增加,且数量维持在较高水平。结论:失神经支配后两种受体数量呈不同动态变化,两种受体的不同比例可能影响骨骼肌对肌松药的敏感性。
- 杨斌周雅春李士通
- 关键词：骨骼受体胆碱能坐骨神经失神经支配
