广西壮族自治区科学研究与技术开发计划(10100019-20)
- 作品数：2 被引量：4H指数：2
- 相关作者：伍玉婷雷丹青吴勇浒李牡艳黄元姣更多>>
- 相关机构：广西医科大学广西大学日本山口大学更多>>
- 发文基金：广西壮族自治区科学研究与技术开发计划更多>>
- 相关领域：生物学更多>>
- 蓖麻蚕蛹生物反应器生产重组人表皮生长因子的研究被引量：2
- 2013年
- 重组人表皮生长因子(rhEGF)已经广泛应用于医疗和化妆品。以杆状病毒AnpeNPV为基因表达载体,昆虫为生物反应器而建立的蛋白表达系统已获得成功。本文以人表皮生长因子(hEGF)基因替代柞蚕AnpeNPV中的核多角体基因而获得的AnpehEGF病毒为载体、蓖麻蚕蛹为生物反应器表达的rhEGF蛋白质,采用PCR、West-ern blot和ELISA等实验方法对其进行检测,硫酸铵沉淀和Ni-NTA Agrose亲和层析法对其进行分离纯化。实验结果显示,无论是在基因或是蛋白水平上都可检测到rhEGF的表达。AnpehEGF感染蚕蛹后第6d开始检测到rhEGF的表达量快速上升,第12d达到高峰,第3、6、9、12d的表达量分别为19.77、24.90、618.59、1 952.46ng/g,而到了病毒感染后期(第15d)出现了蛋白降解现象。表达的rhEGF通过分离纯化获得了较纯的产品。结果表明蓖麻蚕蛹作为生物反应器生产外源蛋白rhEGF是可行的,说明利用AnpeNPV和蓖麻蚕蛹可开发更加低成本而又高效的rhEGF生产新途径。
- 伍玉婷黄元姣雷丹青吴勇浒李牡艳小林淳王先裕
- 关键词：生物反应器重组人表皮生长因子
- 细胞实验检测蓖麻蚕蛹生物反应器表达的重组人表皮生长因子的生物学活性被引量：2
- 2012年
- 目的探讨蓖麻蚕蛹生物反应器中分离纯化获得的重组人表皮生长因子(rhEGF)蛋白质的生物学活性。方法采用Tricine-SDS-PAGE和免疫印迹法(Western blot)鉴定rhEGF,通过MTT和台盼蓝法检测rhEGF的细胞活性。结果 Tricine-SDS-PAGE、Western blot结果显示,蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF具有正确的分子量和免疫原性;MTT法显示,纯化的rhEGF具有酶促活性,且酶促活性优于rhEGF标准蛋白(P<0.05),其最高活性浓度为1.0μg/L,在0.0625～1.0μg/L浓度范围内具有剂量依赖性;rhEGF能够促进Balb/c3T3细胞的分裂增殖,效果优于rhEGF标准蛋白(P<0.05)。结论 AnpehEGF感染的蓖麻蚕蛹中分离纯化获得的rhEGF,具有类似天然hEGF的生物学活性,且效果优于rhEGF标准蛋白;rhEGF的细胞实验为进一步的动物实验提供了基础。
- 伍玉婷黄元姣雷丹青吴勇浒李牡艳
- 关键词：重组人表皮生长因子生物学活性细胞实验
