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南通市应用研究计划项目(BK2012017)

作品数：3 被引量：4H指数：2
相关作者：方政陆施娟徐邦生王慧方浩更多>>
相关机构：南通大学更多>>
发文基金：南通市应用研究计划项目江苏省高等学校大学生实践创新训练计划项目更多>>
相关领域：医药卫生更多>>

文献类型

  • 1篇中文期刊文章

领域

  • 1篇医药卫生

主题

  • 1篇蛋白
  • 1篇蛋白酶抑制剂
  • 1篇丝虫
  • 1篇醛脱氢酶
  • 1篇周期型马来丝...
  • 1篇马来丝虫
  • 1篇复合基因
  • 1篇半胱氨酸
  • 1篇半胱氨酸蛋白...
  • 1篇3-磷酸甘油...
  • 1篇表达蛋白

机构

  • 1篇南通大学

作者

  • 1篇徐邦生
  • 1篇陆施娟
  • 1篇方浩
  • 1篇王慧
  • 1篇徐倩
  • 1篇方政

传媒

  • 1篇中华地方病学...

年份

  • 1篇2014
共 3 条 记 录，以下是 1-1
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排序方式：
周期型马来丝虫复合基因重组质粒和相应表达蛋白的免疫学研究被引量：2
2014年
目的构建周期型马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂／3-磷酸甘油醛脱氢酶（BmcPI／，BmGAPDH）复合基因重组质粒，并转染人宫颈癌细胞（Hela）进行重组蛋白表达。将重组质粒和相应表达蛋白进行免疫学研究比较。为研制新型的抗丝虫基因工程疫苗提供理论及实验依据。方法扩增周期型马来丝虫目的编码基因。将目的基因片段和载体分别双酶切后进行连接，构建复合基因重组质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI/BmGAPDH，鉴定后转染Hela细胞，以G418筛选转染细胞，进而通过RT-PCR和十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS—PAGE）鉴定G418筛选后的单克隆抗性细胞株。亲和层析纯化所表达的重组蛋白并通过免疫蛋白印迹法（Westernblot）对纯化的重组蛋白进行生物学鉴定。60只BALB／c小鼠分5组，每组12只，第2、4、6周分别免疫1次。磷酸盐缓冲液（PBS）对照组为注射PBS100μl；空质粒／CpG对照组为注射pcDNA3．1100μg和CpG30μg；复合重组质粒／CpG组为注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH100μg和CpG30μ；复合重组蛋白／CpG组为注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH复合重组蛋白50P-g和CpG30μg；复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组前2次注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH100μg和CpG30μg；后1次注射pcDNA3．1-BmCPI／BmGAPDH复合重组蛋白50μ和CpG30μg。用RT—PCR方法检测肌肉组织内目的基因；用酶联免疫吸附试验（ELISA）、特异性增殖试验（MTT法）分别检测免疫小鼠血清抗体效价、T淋巴细胞刺激增殖指数和血清中细胞因子干扰素（INF）-γ、白细胞介素（IL）-4水平。结果复合重组质粒pcDNA3．1（＋）-BmCPI／BmGAPDH免疫小鼠后，从小鼠肌肉组织扩增出目的基因。复合重组质粒／复合重组蛋白／CpG组小鼠免疫4、6周后血清抗体效价（1695．12±1．43、3199．63±1．34）均高于复合重组质粒／CpG组（712．69±1．08、1510．08±1．43，P均〈0．05
王慧方政徐倩陆施娟钱一言徐怿琳方浩徐邦生
关键词：马来丝虫半胱氨酸蛋白酶抑制剂3-磷酸甘油醛脱氢酶复合基因表达蛋白
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