山西省自然科学基金(2011011042-3)
- 作品数：7 被引量：14H指数：2
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- 肝细胞生长因子对体外培养的人退变髓核细胞生物学活性影响被引量：4
- 2011年
- 目的探讨肝细胞生长因子(HGF)对体外培养的人退变髓核细胞的生物学作用。方法收集人退变髓核组织标本,分离培养髓核细胞;免疫组化染色观察HGF受体在髓核细胞中表达;设立不同浓度HGF组(0ng/ml,5ng/ml,50ng/ml,500ng/ml),采用MTT法测细胞生长曲线,筛选HGF最佳作用浓度;选取第3代髓核细胞,实验分HGF组、HGF+胰岛素样生长因子(IGF)组、IGF组、对照组,RT-PCR检测Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9mRNA表达;流式细胞术测定细胞增殖的周期。结果免疫组化显示髓核细胞表达HGF受体;MTT法提示不同浓度HGF对体外培养的人退变髓核细胞均有明显的促增殖作用,与对照组相比差异均有统计学意义,50ng/ml是实验中HGF的最佳作用浓度;HGF、HGF+IGF、IGF刺激后髓核细胞进入增殖期比例增加,同时促进髓核细胞Ⅱ型胶原、蛋白多糖、SOX9mRNA表达量增加,其中HGF+IGF效果更为显著。结论人退变髓核细胞存在HGF受体;HGF对体外培养的人退变的髓核细胞有促增殖作用,可以促进细胞外基质表达;HGF与IGF联合作用效果优于两者单独作用。
- 满孝旭马迅马迅关晓明
- 关键词：肝细胞生长因子椎间盘髓核细胞退变
- 人髓核细胞中不同滴度慢病毒介导绿色荧光蛋白基因的表达
- 2011年
- 背景:慢病毒作为基因载体感染椎间盘髓核细胞的感染效率研究具有实际应用价值。目的:测定不同滴度慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因感染人髓核细胞的感染条件及感染参数。方法:采用酶消化法分离培养人髓核细胞,利用基因重组技术构建高滴度慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因,按照不同感染复数感染第2代人髓核细胞。结果与结论:第2代髓核细胞在慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因的感染复数为1,10,50,100时,感染后第4天荧光显微镜观察,流式细胞术测定其感染效率分别为32.1%,41.1%,54.2%和86.8%,继续传代培养3代,第5代椎间盘髓核细胞绿色荧光蛋白的表达仍能保持在60%以上。表明慢病毒介导的绿色荧光蛋白基因在人髓核细胞中可以持续高效表达。
- 张丽马迅关晓明赵胜宋文慧冯皓宇
- 关键词：慢病毒绿色荧光蛋白髓核细胞种子细胞
- 不同来源椎间盘髓核间质干细胞特性及其多向分化能力研究被引量：8
- 2012年
- 目的比较来源于先天性脊柱侧凸与腰椎间盘退变髓核组织中髓核间质干细胞增殖特性及其多向分化能力差别。方法收集2例先天性脊柱侧凸与2例腰椎间盘突出患者的椎间盘组织，采用酶消化法分离细胞，在含体积分数为10％胎牛血清的低糖DMEM完全培养液中培养髓核间质干细胞，用MTT法及台盼蓝染色检测脊柱侧凸与椎间盘退变来源的两组细胞的代谢活力与增殖能力。流式细胞仪鉴定两组髓核间质干细胞CD44、CD105、CD29、CD24表达差异，观察两组细胞成骨、成脂、成软骨分化能力。结果侧凸组髓核间质干细胞以梭形为主，退变组髓核间质干细胞以多边形及三角形为主，传代后两组细胞大多以纺锤梭形为主。MTT及台盼蓝染色法提示侧凸组代谢活力及增殖能力强于退变组。侧凸组和退变组髓核间质干细胞CD44、CD105、CD29表达比例分别为97％～100％和88．7％～97％，CD24表达均为阴性，两者均不表达造血细胞标志物CD45、CD34、CD14、HLA—DR。侧凸组与退变组髓核间质干细胞均可向成骨、成软骨分化，但均未向成脂分化。结论先天性脊柱侧凸与椎间盘退变髓核组织中均存在髓核间质干细胞，前者的髓核间质干细胞具有较强的细胞代谢活性及增殖能力，两者成骨、成软骨分化能力无差别，但均无成脂能力。
- 关晓明马迅张丽冯皓宇赵胜宋文慧何李明
- 关键词：椎间盘间质干细胞
- 人端粒酶反转录酶基因感染对人髓核细胞基本特性的影响被引量：1
- 2013年
- 目的验证人髓核细胞感染人端粒酶反转录酶(hTERT)基因后,髓核细胞基本特性是否发生改变,是否具有致瘤性。方法慢病毒介导hTERT基因感染人髓核细胞并进行蛋白印迹法验证,倒置显微镜观察感染hTERT基因前后髓核细胞形态以及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色,流式细胞术测定感染前后人髓核细胞CD24表达,以Hela细胞为对照,将髓核细胞注射裸鼠背部皮下,定期肉眼观察成瘤情况,2个月后取材行苏木素-伊红(HE)染色鉴定。结果感染hTERT后蛋白印迹法验证人髓核细胞hTERT基因表达阳性,感染前后髓核细胞形态及Ⅱ型胶原免疫组织化学染色无明显变化,呈三角形或多边形贴壁生长,Ⅱ型胶原染色均为阳性;流式细胞术检测感染hTERT前后髓核细胞CD24表达均为阳性,阳性率>50%;致瘤性实验结果显示,注射Hela细胞的裸鼠背部皮下长出肿块,肿块组织经石蜡包埋切片后HE染色,染色为深紫色肿瘤细胞,注射髓核细胞的裸鼠未观察到肿物,取注射部位组织行HE染色,结果为浅红色正常组织。结论慢病毒介导hTERT基因感染人髓核细胞后,人髓核细胞基本特性没有发生明显变化,且不具有致瘤性,为深入研究髓核细胞奠定基础。
- 张丽关晓明马迅满孝旭赵胜
- 关键词：椎间盘髓核细胞致癌性试验
- 白细胞介素1β对大鼠髓核间质干细胞生物学特性的影响被引量：1
- 2014年
- 背景:内源性干细胞并未在椎间盘退变的进程发挥修复作用,作者推测可能与相关致病因素的异常作用有关,导致对髓核间质干细胞功能产生一定的抑制效应。目的:观察炎症因子白细胞介素1β对大鼠髓核间质干细胞生物学特性的影响。方法:取3月龄雄性SD大鼠脊柱腰段椎间盘髓核组织,用胶原酶,胰酶序贯消化法分离并培养髓核间质干细胞。采用流式细胞术检测细胞免疫表型CD24,CD34,CD45,CD90,CD105表达;利用RT-PCR检测干细胞基因SOX2,Nanog的表达。观察髓核间质干细胞成脂、成骨、成软骨分化能力。利用流式细胞术检测白细胞介素1β作用于髓核间质干细胞后的凋亡率,荧光定量PCR检测白细胞介素1β作用于髓核间质干细胞后SOX9,蛋白多糖,Ⅱ型胶原酶,caspase-3基因的表达变化。结果与结论:体外分离培养出的细胞表现为纺锤样长梭形;CD90、CD105表达阳性,CD45、CD34、CD24表达阴性,表达干细胞基因SOX2,Nanog,具有成骨和成软骨分化能力,无成脂分化能力。CCK-8检测白细胞介素1β可以抑制髓核间质干细胞的增殖活性,与作用时间、作用浓度存在一定的依赖关系,最佳作用时间为48 h,最佳作用浓度为50μg/L。流式细胞仪检测白细胞介素1β可以使髓核间质干细胞轻度凋亡;荧光定量PCR结果显示:SOX9,蛋白多糖,Ⅱ型胶原的mRNA表达下调,caspase-3表达上调。结果可见白细胞介素1β具有抑制髓核间质干细胞增殖活性并诱导其凋亡的作用,是导致椎间盘自身干细胞无法发挥修复作用的原因之一。
- 张宁关晓明马迅张丽张辉宋亮
- 关键词：干细胞骨髓干细胞增殖活性
- TGF-β1对人髓核细胞CD24及细胞外基质表达的调节作用
- 2012年
- 目的采用流式细胞术和荧光定量PCR观察TGF-β1因子对人髓核细胞表型CD24表达变化及细胞外基质合成的调节作用,为进一步了解髓核细胞特性提供支持。方法采用机械酶消化法分离培养人髓核细胞,利用流式细胞术联合免疫组化方法鉴定髓核细胞。TGF-β1持续刺激髓核细胞24 h、72 h、6 d后,流式细胞术观察CD24表达变化;RT-PCR检测不同作用时间CD24、SOX9、Ⅱ型胶原、蛋白多糖mRNA表达变化。结果体外分离培养的第2代髓核细胞表现为多边形或三角形,此类细胞Ⅱ型胶原免疫组化染色阳性,比例为33%～60%,部分细胞表现为梭形,其Ⅱ型胶原免疫组化染色为弱阳性,流式细胞术检测CD24表达比例介于25%～56%,两种鉴定方法比较无统计学差异(t=27,P>0.05);TGF-β1刺激人髓核细胞24 h后CD24阳性细胞比例为33.9%,刺激72 h后CD24阳性细胞比例为76.2%,刺激6 d后阳性细胞比例为99%;RT-PCR结果显示TGF-β1刺激后CD24、SOX9、Ⅱ型胶原、蛋白多糖mRNA表达量较对照组明显增加,并且存在时间依赖性。结论采用流式细胞术检测成熟髓核细胞CD24表达,在鉴定髓核细胞和检测成熟髓核细胞比例时,具有快速,操作简单,细胞需求量少,结果可靠的优点;TGF-β1可上调CD24基因表达和基质蛋白的合成,促进髓核细胞成熟。
- 关晓明马迅张丽冯皓宇满孝续
- 关键词：转化生长因子Β1CD24流式细胞术髓核细胞
- 肝细胞生长因子基因转染对髓核细胞生物学活性及细胞外基质表达的调节作用
- 2013年
- 椎间盘退变（intervertebral disc degeneration．IVD）是临床常见疾病，直接或间接引起腰背部和下肢疼痛不适．影像学表现多为椎间盘膨出、突出，腰椎不稳，滑脱，以及其引起的椎管狭窄，从而出现神经根压迫症状和脊髓压迫症状。主要机制首先是椎间盘内髓核细胞逐渐衰老、凋亡，并导致细胞外基质的化学成分和结构改变，进而出现髓核脱水，合成蛋白多糖能力减弱。胶原的排列和类型均发生改变．
- 王习斌马迅关晓明满孝旭张丽
- 关键词：细胞外基质髓核细胞细胞生物学活性肝细胞生长因子基因转染脊髓压迫症状
