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铁硫蛋白的生物合成及相关疾病被引量：2: 2015年; 铁硫蛋白是以铁硫簇为辅基,相对分子质量较小的一类蛋白质.它广泛存在于各种生物体内,参与电子传递、能量代谢以及基因表达调控等重要生理过程.其生物合成过程复杂,并且从细菌到人类高度保守.在真核细胞内,铁硫蛋白的组装由线粒体铁硫簇组装系统(mitochondrial ironsulfur cluster assembly system,mitochondrial ISC assembly system)和细胞质铁硫簇组装器(cytosolic iron-sulfur cluster assembly,CIA)完成.研究发现,铁硫蛋白的合成异常可导致弗里德赖希共济失调(friedreich ataxia,FRDA)、遗传性肌病和铁粒幼细胞性贫血等多种罕见疾病,这些疾病严重影响个体的生活质量和寿命.因此,深入了解铁硫蛋白的结构和生物合成过程,对研究其生物学功能与相关疾病的诊断和治疗有重要意义.; 郑华珍赵炜刘新光; 关键词：铁硫蛋白生物合成

C11orf17蛋白的原核表达及功能预测: 2014年; 目的利用基因工程技术获取原核表达的C11orf17蛋白,结合生物信息学初步预测其功能。方法以K562细胞的cDNA为模板,PCR扩增C11orf17的基因序列;双酶切后将目的基因亚克隆至原核表达载体pET-32a上,将测序正确的重组表达质粒pET-32a-C11orf17转化到E.coli BL21,经诱导后SDS-PAGE及Western blot检测融合蛋白表达,并分析其可溶性。采用UGET软件预测C11orf17共表达基因,蛋白质互作数据库挖掘C11orf17基因已知互作蛋白,在线软件Gather富集共表达基因生物功能。结果成功构建重组表达质粒pET-32aC11orf17,此重组体经诱导后能在E.coli BL21高效表达C11orf17的融合蛋白,UGET分析C11orf17前300共表达探针中,包含267个已知基因,共表达基因主要富集细胞交流、信号传导、细胞周期基因功能本体。蛋白互作数据库表明,C11orf17与PRKACA蛋白互作,后者为细胞周期调控重要分子。结论在原核细胞中成功表达出C11orf17蛋白,生物信息预测其可能是细胞周期调控重要新分子,为后续研究提供了方向和线索。; 汪宗桂左长清刘振杰刘新光; 关键词：原核表达生物信息学

真核表达载体pEGFP-N1-kin17的构建及其在Zmpste24^(-/-)小鼠胚胎成纤维细胞内的表达: 2014年; 目的构建人kin17基因真核表达载体pEGFP-N1-kin17,将载体转染至野生型及Zmpste24基因缺失的小鼠胚胎成纤维上皮细胞,荧光显微镜观察kin17蛋白表达情况。方法用高保真DNA聚合酶,从pCMV-kin17载体中扩增获取人kin17 cDNA编码序列,将其克隆至pEGFP-N1载体中,经酶切、连接、转化后,挑取阳性克隆进行菌液进行PCR、菌液质粒双酶切及测序鉴定;将成功构建的GFP-kin17表达载体转染Zmpste24-/-MEFs,荧光显微镜观察kin17蛋白的核定位情况。结果 pEGFP-N1-kin17转化细菌克隆测序结果完全正确;将载体转入MEFs后,可以通过荧光显微镜观察到kin17蛋白的表达。结论成功构建GFP融合的kin17真核表达载体,该载体为kin17蛋白的研究提供工具。本实验中载体pEGFP-N1-kin17在野生型和Zmpste24-/-MEFs中均成功表达。; 郑慧玲崔红晶余磊黄颖刘新光; 关键词：GFP 小鼠胚胎成纤维细胞

Zmpste24基因缺失与早老症被引量：3: 2016年; 衰老是一种生理完整性丧失,功能受损,疾病和死亡风险增加的过程。早老症(HGPS)是一种加速化的衰老疾病,是研究人类正常衰老理想的疾病模型。由LMNA基因突变产生prelamin AΔ50在细胞内累积是造成早老症的主要原因,早老症病人表现出寿命急剧缩短,老化特征明显的现象,例如脱发、皮下脂肪减少、骨质疏松以及早逝。锌金属蛋白酶Zmpste24是prelamin A加工成为成熟lamin A蛋白的关键酶。敲除Zmpste24基因的小鼠表现出与早老症高度一致的衰老表型,同时也存在非常相似的发病机制,如染色质异常、DNA损伤和干细胞功能缺失等。Zmpste24缺失小鼠作为典型的早老模型小鼠因其衰老周期短,衰老特征明显而获得广泛应用。本文总结了以Zmpste24缺失早老小鼠为模型取得的早老相关分子机制的研究进展,以及抗衰老策略的最新发现。; 王登川郑慧玲刘新光; 关键词：早老症

酵母PMT2基因菌株构建及其对复制性寿命的影响被引量：2: 2015年; 目的研究蛋白质-O-甘露糖转移酶-2(PMT2)基因对酿酒酵母复制性寿命的影响。方法依据基因同源重组原理,构建PMT2基因缺失(pmt2)或基因过表达(PMT2-ox)酵母菌株;实时定量PCR验证菌株中PMT2基因转录水平;显微镜下分离和计数酵母子细胞数目,检测酵母细胞的复制性寿命。结果成功构建PMT2基因缺失或过表达酵母菌株,实时定量PCR证明PMT2 m RNA在pmt2菌株中无表达,在PMT2-ox菌株中表达上调。与野生型酵母细胞的平均寿命(约23代)比较,pmt2菌株的寿命为(25.2±8.9)代,PMT2-ox菌株的寿命为(24.1±7.3)代,寿命无明显延长(P>0.05)。结论酿酒酵母PMT2基因不参与复制性寿命的调控。; 崔红晶何欣袁源陈亚芹付思莹赵炜刘新光; 关键词：酿酒酵母

酵母PMT1基因参与内质网应激的调控机制被引量：1: 2016年; 【目的】内质网应激(Endoplasmic reticulum stress,ERS)可激活细胞保护性信号级联反应——未折叠蛋白质反应(Unfolded protein response,UPR)。研究表明,酵母细胞中的UPR信号通路由转录因子Hac1p和ERS感应因子Ire1p共同介导。前期研究发现:蛋白质-O-甘露糖转移酶1(Protein-O-mannosyltransferase 1,PMT1)基因缺失能延长酵母细胞的复制性寿命,其机制与上调UPR通路活性相关。本文进一步探讨PMT1基因缺失在酵母ERS反应中的作用。【方法】观察PMT1基因与IRE1或HAC1基因双缺失酵母菌株(pmt1?hac1?和pmt1?ire1?)在ERS反应条件下的克隆形成能力;通过比色法检测各菌株的细胞增殖活性;RT-PCR检测各菌株UPR通路下游部分靶基因的转录水平。【结果】与对照菌株比较,PMT1基因缺失菌株(pmt1?)在ERS反应条件下生长较慢,而HAC1和IRE1单基因缺失菌株(hac1?和ire1?)在ERS反应条件下无法存活;在hac1?或ire1?菌株的基础上进一步缺失PMT1基因,可以改善hac1?菌株在ERS反应条件下的生长状态;但缺失PMT1基因没有上调hac1?菌株UPR通路靶基因的转录水平。【结论】缺失PMT1基因可增强hac1?菌株对ERS诱导剂衣霉素的抗性,机制与已知的UPR通路不相关,提示可能存在其它途径参与ERS反应的调控。; 崔红晶冯文莉何欣赵炜陈亚芹郑慧玲刘新光; 关键词：酿酒酵母内质网应激衣霉素

Prelamin A相互作用蛋白Narf的鉴定和表达分析被引量：1: 2011年; 目的:探讨A型核纤层蛋白前体(prelamin A)在细胞内堆积造成细胞早老的机理,筛选了prelamin A相互作用蛋白并研究其在早老细胞中的表达情况。方法:以prelamin A的C末端区域为诱饵蛋白,采用酵母双杂交方法从人骨骼肌cDNA文库中筛选prelamin A相互作用蛋白。构建了prelamin A识别因子(Narf)与绿色荧光蛋白融合表达载体pEGFP-Narf,与红色荧光蛋白-prelamin A融合表达质粒pDsRed-PLA共转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察共定位情况。Western blotting检测Narf在衰老表型HEK293PLA细胞的表达情况。结果:筛选得到包括Narf在内的7个候选相互作用蛋白。Narf与prelamin A能相互作用并共定位于核纤层,在prelamin A过表达的HEK293PLA细胞中Narf表达没有升高。结论:Narf在细胞内与prelamin A相互作用,且表达量不受后者影响。; 陈维春刘振杰蒋智文彭琪袁源郑慧玲刘新光; 关键词：酵母双杂交衰老共定位

酿酒酵母Nar1p参与寿命调控机制的初步研究被引量：2: 2014年; 目的:酵母Nar1p是人类早老症关键蛋白prelamin A相互作用蛋白NARF在酵母中的同源蛋白,目前未见其在寿命和衰老中的功能报道。本研究以酿酒酵母为模式物种,研究Nar1p在酵母复制寿命和氧化应激中的作用。方法:首先通过基因重组的原理构建Nar1p过表达酵母菌株,然后检测其复制寿命、对强氧化剂百草枯的抵抗能力、细胞内总SOD活性。结果:相对于野生型酵母菌株,Nar1p过表达酵母菌株的复制寿命缩短,抗氧化性损伤的能力减弱,但是细胞内总SOD活性升高。结论:Nar1p很可能参与了酵母复制寿命和氧化应激能力的调节,为全面研究Nar1p的功能奠定基础。; 赵炜刘依娜牛宇杰袁源刘新光; 关键词：酿酒酵母

环指蛋白RING1与A型核纤层蛋白的细胞内相互作用被引量：1: 2011年; 环指蛋白RING1能结合DNA并抑制基因的转录.采用酵母双杂交方法从人骨骼肌文库中筛选出了与A型核纤层蛋白(lamin A)结合的RING1蛋白,回复杂交酵母能在缺陷培养基上生长.RING1与绿色荧光蛋白融合载体转染HEK293细胞,激光共聚焦显微观察发现RING1能与带红色荧光蛋白的lamin A蛋白在细胞核周围共定位.免疫共沉淀结果证明RING1与lamin A能够相互作用.结果证明了一个新的lamin A结合蛋白,为揭示lamin A影响基因表达乃至细胞衰老提供了依据.; 陈维春宋杰刘振杰蒋智文袁源郑慧玲刘新光; 关键词：相互作用酵母双杂交

3种组蛋白提取方法的比较被引量：1: 2015年; 目的寻找提取小鼠组织和细胞中组蛋白的简易方法。方法用RIPA裂解法(A法)、酸提法(B法)和组蛋白提取试剂盒法(C法)提取小鼠肝脏和A549细胞中组蛋白,用考马斯亮蓝染色及免疫印迹法检测组蛋白和乙酰化组蛋白。结果考马斯亮蓝染色结果发现B法和C法条带较A法清晰,且免疫印迹结果表明B法和C法中H3和H4条带面积更大。结论酸提法和组蛋白提取试剂盒法提取的组蛋白种类和纯度都明显高于RIPA裂解法,但酸提法成本较低、简单易行。; 王登川郑慧玲刘新光; 关键词：组蛋白

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