山西省自然科学基金(2008012011-1)
- 作品数：5 被引量：26H指数：3
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- 相关机构：山西医科大学第一医院山西医科大学更多>>
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- 慢病毒介导骨形态发生蛋白-7基因的干细胞用于组织工程骨构建的实验研究
- 2010年
- 目的 建立能够稳定表达骨形态发生蛋白-7（BMP-7）的骨髓基质干细胞（BMSCs）,观察其成骨分化,并与纳米羟基磷灰石胶原（nHAC）材料复合培养体外构建组织工程骨的可行性.方法 实验分4组：BMP-7和eGFI基因转染组（A组）、eGFP基因转染组（B组）、常规成骨诱导组（C组）、未转染组（D组）.用G418筛选获得阳性细胞后接种于nHAC支架体外复合培养.荧光显微镜下观察eGFP表达,判断转染效率;以逆转录-聚合酶链反应（RTPCR）、ELISA检测目的基因表达,四唑盐（MTT）实验检测细胞活力,碱性磷酸酶（ALP）活性和Gomori染色榆测成骨情况;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况.结果 慢病毒24 h对BMSCs的转染率约为90%.RTPCR检测到A组在1300 bp处出现特异性条带,其他组结果阴性;ELISA检测24 h BMP-7蛋白含量为（150.2±18.3）pg/mL,种植支架复合培养8周后BMP-7含量为（76.6±7.4）pg/mL;MTT实验显示细胞活性与未转染组比较差异无统计学意义（P〉0.05）;ALP活性以16 d最强;扫描电镜见细胞种植nHAC支架后黏附、生长良好.结论 BMP-7可在BMSCs内稳定表达,并诱导其向成骨分化;与nHAC复合培养可构建组织工程骨.
- 卢向东郭庆华刘强李平韩树峰吴斗孙海彪
- 关键词：骨髓细胞骨形态发生蛋白质类转染
- 转BMP-7基因BMSCs复合nHAC体外培养的实验研究
- 2010年
- 目的建立能够稳定表达骨形态发生蛋白-7(BMP-7)的骨髓基质干细胞(BMSCs),并与纳米羟基磷灰石胶原(nHAC)材料复合培养体外构建组织工程骨。方法用慢病毒把人BMP-7基因和增强型绿色荧光蛋白(eGFP)基因导入大鼠BMSCs,用G418筛选获得阳性细胞后接种于nHAC支架体外复合培养。荧光显微镜下观察eGFP表达,判断感染效率;以四唑盐(MTT)实验检测细胞活力;RT-PCR、ELISA检测目的基因表达;碱性磷酸酶(ALP)活性检测成骨能力;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况。结果慢病毒24h对BMSCs的转染率约为90%;MTT实验显示细胞活性较未转染组无明显差异(P>0.05);RT-PCR检测到BMP-7表达,在1300bp处出现特异性条带;ELISA检测24hBMP-7蛋白含量为(150.2±18.3)pg/ml;ALP活性以第16天左右最强;扫描电镜见细胞种植nHAC支架后粘附、生长良好。结论 BMP-7可在BMSCs内稳定表达,并诱导其向成骨分化;与nHAC复合培养可构建组织工程骨。
- 卢向东郭庆华刘强李平
- 关键词：骨髓基质干细胞骨形态发生蛋白-7转染
- 转基因干细胞构建组织工程骨的初步实验研究被引量：15
- 2010年
- 目的 用转基因干细胞在体外构建组织工程骨.方法 用携带有人骨形态发生蛋白-2（BMP-2）和增强型绿色荧光蛋白（eGFP）的慢病毒感染骨髓基质干细胞（BMSCs）后接种于纳米羟基磷灰石/胶原/聚乳酸（nHAC/PLA）支架.荧光显微镜下观察eGFP表达,判断感染效率;RT-PCR、ELISA和Western-blot用于基因转染的表达检测;流式细胞仪检测细胞增殖;扫描电镜观察细胞在支架材料中的黏附、生长状况;ALP活性检测成骨能力.结果 慢病毒24 h对BMSCs的转染率约为90%;RT-PCR检测到BMP-2阳性表达,与实际值1191 bp基本一致;ELIISA检测24 h BMP-2蛋白含量为（148.2±21.6）pg/ml;流式细胞仪检测到细胞S期比例增加;ALP活性检测基因转染组明显强于对照组（P＜0.05）;扫描电镜见细胞在nHAC/PLA支架上粘附生长良好;第8周时Western-blot仍可检测到BMP-2在相对分子质量26×10^3处出现阳性条带.结论 BMP-2基因可在BMSCs稳定表达并诱导其向成骨分化,与nHAC/PLA复合培养可用于组织工程骨构建.
- 卢向东郭庆华刘强李平韩树峰吴斗孙海彪
- 关键词：骨髓基质干细胞骨形态发生蛋白-2基因转染组织工程骨
- 转碱性成纤维细胞生长因子基因组织工程骨修复兔骨缺损被引量：7
- 2011年
- 背景:生物活性玻璃是一类具有良好生物活性及骨修复特性的生物医用材料,将其与血、脱钙骨基质或与骨形态发生蛋白等混合来促进成骨形成,增加强度,骨愈合更接近于天然骨结构。目的:观察生物活性玻璃结合转碱性成纤维细胞生长因子基因骨髓间充质干细胞构建组织工程骨修复兔骨缺损的效果。方法:以生物活性玻璃作为转碱性成纤维细胞生长因子基因骨髓间充质干细胞的可吸附载体,体外构建组织工程骨,将其植入兔桡骨中段 10 mm 骨缺损处,以自体骨移植组、生物活性玻璃/骨髓间充质干细胞组和空白组作为对照,术后 2,4,8,12 周进行影像学、病理组织切片、生物力学测试,观察各组骨缺损修复效果。结果与结论:以生物活性玻璃作为转碱性成纤维细胞生长因子基因骨髓间充质干细胞的可吸附载体,体外构建的组织工程骨植入兔桡骨骨缺损的成骨效应、骨愈合后的抗扭转强度明显优于其他各组(P < 0.01)。说明生物活性玻璃结合转碱性成纤维细胞生长因子基因骨髓间充质干细胞构建的组织工程骨可用于骨缺损修复,优于自体骨移植。
- 贾祎佳刘强卢向东郭庆华王翔宇
- 关键词：生物活性玻璃碱性成纤维细胞生长因子组织工程骨骨缺损
- 转基因干细胞复合纳米羟基磷灰石胶原/聚乳酸修复骨缺损的实验研究被引量：5
- 2012年
- 目的研究以纳米羟基磷灰石胶原/聚乳酸(nHAC/PLA)材料为载体支架,复合用骨形态发生蛋白(BMP)-2修饰的骨髓间充质干细胞(BMSCs)构建的组织工程骨修复大鼠桡骨骨缺损的能力。方法将48只成年的SD雄性大鼠随机分为4组,每组12只,制作成右侧桡骨为5mm的骨缺损模型,各组分别按以下方法将材料植入骨缺损处进行修复。A组:nHAC/PLA材料+BMSCs[BMP-2和增强绿色荧光蛋白(eGFP)处理];B组:nHAC/PLA材料+BMSCs(无BMP-2和eGFP处理);C组:单纯nHAC/PLA材料;D组:空白对照组(只造骨缺损模型,不置入支架材料)。术后6、12周用空气栓塞法各组分别处死4、8只大鼠并取右侧整段桡骨,行大体形态学、X线检查、组织学和生物力学检查。结果 X线观察结果:A组的骨痂形成量优于其他组,B组次之,C组稍逊于B组,空白对照组最少。组织学观察结果:A组的新生骨以及新生血管的形成等均优于其他各组,B组次之,C组稍逊于B组,空白对照组则最差。12周时4组生物力学测试结果显示:A组最大应力测试明显优于C组,B介于A组与C组之间,空白对照组最差。结论 nHAC/PLA是一种良好的载体支架材料,与经过BMP-2修饰的BMSCs复合后能显著提高骨生成的速度,在修复长骨节段性缺损方面具有潜在的临床价值。
- 王翔宇刘强卢向东孙海彪郭庆华贾祎佳
- 关键词：间质干细胞骨形态发生蛋白质类骨缺损
