国家自然科学基金(81173294) 作品数:17 被引量:104 H指数:7 相关作者: 杜惠兰 孙晓换 白静 杨丽芸 范丽洁 更多>> 相关机构: 河北中医学院 河北医科大学 中国人民解放军白求恩国际和平医院 更多>> 发文基金: 国家自然科学基金 河北省自然科学基金 更多>> 相关领域: 医药卫生 更多>>
逍遥丸对小鼠卵母细胞分泌因子生长分化因子-9受体及Smads通路的影响 被引量:1 2015年 目的:观察逍遥丸对小鼠卵母细胞分泌因子生长分化因子-9(GDF-9)受体BMPRⅡ、ALK-5及下游Smads通路中Smad2、Smad3的影响。方法:将120只小鼠随机分为4组:疏肝高、低剂量组;COH组和空白对照组,每组30只。应用免疫组化和实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法分别测定卵母细胞中BMPRⅡ、ALK-5、Smad2、Smad3蛋白及mRNA的表达。结果:与空白对照组比较,COH组及疏肝低剂量组BMPRⅡ蛋白及mRNA表达无统计学意义;疏肝高剂量组BMPRⅡ蛋白及mRNA表达增强(P<0.05)。ALK-5、Smad2、Smad3蛋白及mRNA表达在各组间比较均无统计学意义。结论:高剂量逍遥丸可上调卵母细胞中GDF-9Ⅱ型受体BMPRⅡ蛋白及mRNA表达,但并未影响ALK-5、Smad2、Smad3的表达,提示逍遥丸影响卵子质量的机制与GDF-9一型受体及下游Smads通路无关。 杨丽芸 白静 杜惠兰 孙晓换 范丽洁关键词:逍遥丸 生长分化因子-9 SMAD2 补肾法、疏肝法对超促排卵小鼠卵母细胞数量及GDF-9表达的影响 被引量:15 2013年 目的观察补肾法、疏肝法对超促排卵小鼠卵母细胞数量及质量的影响。方法将90只雌性昆明小鼠随机分为对照组、正常组、补肾高剂量组、补肾低剂量组、疏肝高剂量组、疏肝低剂量组各15只,补肾高、低剂量组分别给予补肾调经方精制口服液5.4、2.7g/ml,疏肝高、低剂量组分别给予逍遥丸混悬液0.6、0.3g/ml,对照组和正常组用蒸馏水灌胃,各组小鼠按均1ml/100g体重灌胃,连续10d。第11日除正常组外其余各组小鼠腹腔注射孕马血清促性腺激素,48h后腹腔注射人绒毛膜促性腺激素,16h后测定各组小鼠血清中雌二醇(E2)、促黄体生成激素(LH)和促卵泡生成激素(FSH)的水平,比较各组排卵数、优质卵泡数,检测卵母细胞中生长分化因子-9(GDF-9)蛋白和GDF-9mRNA的表达。结果各给药组FSH、LH、E2表达和GDF-9蛋白及其mRNA显著高于对照组(P<0.05);并且补肾高剂量组和疏肝高剂量组均显著高于补肾低剂量组和疏肝低剂量组(P<0.05)。各给药组优质卵泡数均高于对照组(P<0.05)。对照组及各给药组排卵数较正常组显著增加(P<0.05)。结论补肾法、疏肝法可增加小鼠卵母细胞数量、提高优质卵泡率、促进卵子排出,其作用机制可能与调控卵母细胞GDF-9表达相关。 杨丽芸 杜惠兰 白静 贺明 孙晓换 范丽洁关键词:补肾法 疏肝法 补肾调经方 生长分化因子-9 逍遥丸含药血清对体外生长小鼠腔前卵泡卵母细胞中Smads表达的影响 被引量:2 2016年 目的探讨逍遥丸提高体外卵母细胞质量的可能作用机制。方法分离58只昆明小鼠腔前卵泡,分别以10%正常大鼠血清,10%逍遥丸低、中、高剂量大鼠含药血清,10%逍遥丸高剂量大鼠含药血清+10μmol/L K02288孵育,设为对照组,疏肝低、中、高剂量组,抑制剂组,培养6天。实时荧光定量PCR法检测卵母细胞中Smad1、Smad5、Smad8 mRNA表达,细胞免疫荧光检测Smad1、Smad5、Smad8和磷酸化的Smad1/5/8(p-Smad1/5/8)蛋白表达。结果疏肝高剂量组Smad1 mRNA和蛋白高于对照组(P<0.05);疏肝各剂量组Smad5、Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白均高于对照组(P<0.05),其中疏肝高、中剂量组Smad5 mRNA和蛋白比较差异无统计学意义(P>0.05),均高于低剂量组(P<0.05),Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白以疏肝高剂量组最高(P<0.05);抑制剂组p-Smad1/5/8蛋白低于疏肝高剂量组(P<0.05)。结论逍遥丸提高体外卵母细胞质量的作用可能与上调卵母细胞中Smad1、Smad5、Smad8 mRNA和蛋白及p-Smad1/5/8蛋白表达有关,以高剂量组效果更佳。 孙晓换 刘亚华 魏学聪 李丽 范丽洁 谷向向 耿丹丹 杜惠兰关键词:逍遥丸 腔前卵泡 卵母细胞 SMADS 疏肝法对小鼠卵母细胞质量的作用与BMP15/Smads信号通路的关系 2020年 目的研究疏肝法对小鼠卵母细胞中BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8表达的影响,进一步揭示疏肝法提高控制性超排卵小鼠卵母细胞质量的作用机制。方法将200只雌性昆明小鼠随机分为四组:空白对照组、COH组、疏肝低剂量组和疏肝高剂量组,每组50只。按1ml/100g体重进行灌胃,空白对照组及COH组使用蒸馏水灌胃,疏肝低剂量组和高剂量组分别使用逍遥丸0.3g/ml、0.6g/ml灌胃,每日1次,连续10天,第11日疏肝低、高剂量组及COH组均腹腔注射孕马血清促性腺激素,48h后均腹腔注射人绒毛膜促性腺激素,16h后处死小鼠,获取MⅡ期卵母细胞,检测BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达。结果与空白对照组比较,COH组BMP-15、BMPRII、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达无统计学意义(P>0.05);疏肝低、高剂量组BMP-15、ALK6、Smad1/5/8蛋白及mRNA表达增强(P<0.05);疏肝高剂量组BMPRII蛋白及mRNA表达增强(P<0.05)。结论疏肝法可上调小鼠卵母细胞中BMP-15的表达,诱导其与Ⅱ型受体BMPRⅡ结合,进一步活化ALK6,从而启动信号传导,发挥影响小鼠卵母细胞质量的作用。 白静 杜惠兰 杨丽芸关键词:逍遥丸 SMAD1 SMAD5 杜惠兰基于“通法”理论治疗输卵管性不孕经验 被引量:12 2020年 输卵管性不孕作为影响女性生育的重要因素,目前发病率呈逐年增高趋势。杜惠兰教授基于多年治疗本病的临床经验认为,该病的病位在胞络,病性多虚实夹杂,病机的关键在于瘀阻胞脉胞络,病理因素为气滞、血瘀、湿阻或寒凝,辨证为气滞血瘀证、湿热蕴结证、肾虚血瘀证、寒湿凝滞证。治疗以“通法”理论为指导,以通畅胞脉胞络,恢复输卵管功能为要,治以行气活血、清热利湿、补肾活血或温经散寒。在整体与局部治疗相结合的基础上,采用中药汤剂口服配合中医外治法,同时注重辨病与辨证相结合,最终使胞脉通利,成功受孕。 宋亚静 高星 管凤丽 杜惠兰关键词:输卵管性不孕 临证经验 补肾调经方对IVF-ET患者卵母细胞质量及卵泡液生殖激素的影响 被引量:28 2014年 目的研究补肾调经方对体外受精-胚胎移植(in vitro fertilization-embryo transfer,IVFET)患者卵母细胞质量及与卵泡液生殖激素及颗粒细胞骨形态发生蛋白-15(bone morphogenetic protein-15,BMP-15)表达的影响。方法将60例符合纳入标准的接受IVF-ET治疗的不孕症患者,按照治疗顺序分为中药联合控制性超排卵组(治疗组,20例)和单纯控制性超排卵组(对照组,40例)。比较两组年龄、不孕年限、基础促卵泡刺激素(basal follicle-stimulating hormone,bFSH)水平、促性腺激素(gonadotropins,Gn)使用天数及使用量、皮下注射重组人绒毛膜促性腺激素(HCG)日血清中雌二醇(estradiol,E_2)、孕酮(progesterone,P)、促黄体生成素(luteotropic hormone,LH)水平、获卵数、受精率、胚胎数、优质胚胎率和.临床妊娠率。应用化学发光法检测卵泡液生殖激素FSH、LH、E_2、P、睾酮(testosterone,T)浓度。应用实时荧光定量PCR(real-time PCR)法和蛋白质印迹法(Western blot)测定成熟卵泡颗粒细胞BMP-15 mRNA和蛋白定量的表达。结果 60例患者妊娠32例,总妊娠率为53.3%。其中对照组40例,妊娠19例,妊娠率47.5%;治疗组20例,妊娠13例,妊娠率65.0%,两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组Gn用量低于对照组,优质胚胎率高于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。而HCG注射日血清E_2、LH、P浓度,获卵数和受精率两组比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与对照组比较,治疗组卵泡液FSH浓度均降低,LH浓度增高,妊娠患者卵泡液LH浓度亦明显高于未妊娠患者,差异均有统计学意义(P<0.05)。而卵泡液E_2、T、P浓度比较,差异无统计学意义(P>0.05)。治疗组颗粒细胞上BMP-15 mRNA和蛋白定量的表达较对照组均增高,妊娠患者亦高于未妊娠患者(P<0.05)。结论在IVF-ET过程中,补肾调经方可以提高卵母细胞质量,增加卵泡对外源性促性腺激素的敏感性。补肾调经方的这一作用与颗粒细胞上BMP-15 梁莹 杜惠兰 常秀峰 赵胜男 雷灵梅关键词:补肾调经方 促卵泡生成素 逍遥丸对体外培养小鼠腔前卵泡卵母细胞骨形成蛋白6及其膜受体表达的影响 被引量:2 2020年 目的观察逍遥丸对体外培养第6天小鼠腔前卵泡卵母细胞骨形成蛋白6(BMP6)及膜受体的影响,探讨其干预卵母细胞质量的可能机制。方法12只雌性SD大鼠随机分为逍遥丸高、中、低剂量组和对照组,分别灌服逍遥丸混悬液2.7、1.8、0.9 g/kg和等量蒸馏水,第4天股动脉采血,得到逍遥丸高、中、低剂量大鼠含药血清和正常大鼠血清。机械法显微分离12日龄雌性昆明小鼠腔前卵泡,分为逍遥丸高、中、低剂量组和对照组。逍遥丸组分别以高、中、低剂量逍遥丸大鼠含药血清孵育,对照组以正常大鼠血清孵育,血清浓度均为10%。细胞免疫荧光和实时荧光定量PCR分别检测体外培养第6天卵母细胞中BMP6、骨形成蛋白Ⅱ型受体(BMPRⅡ)、激活素受体样激酶(ALK)2、ALK6蛋白和mRNA表达。结果各组卵母细胞中均有BMP6、BMPRⅡ、ALK2、ALK6蛋白表达。与对照组比较,逍遥丸高、中、低剂量组BMP6、BMPRⅡ、ALK2、ALK6蛋白和mRNA表达均升高(P<0.05),以逍遥丸高剂量组最高(P<0.05)。结论逍遥丸可能通过上调卵母细胞中BMP6、BMPRⅡ、ALK2、ALK6表达,提高体外发育卵母细胞质量。 孙晓换 杜惠兰关键词:逍遥丸 膜受体 腔前卵泡 卵母细胞 Effect of soothing liver therapy on oocyte quality and growth differentiation factor-9 in patients undergoing in vitro fertilization and embryo transfer 被引量:11 2013年 OBJECTIVE:To investigate the effect of Soothing liver therapy on infertile women undergoing in vitro fertilization and embryo transfer(IVF-ET)and to explore its mechanism.METHODS:Fifty-eight women with tubal infertility were randomized into two groups:30 in an experimental group treated with Xiaoyao powder(Shugan)plus gonadotropin-releasing hormone analog(GnRHa)/follicle-stimulating hormone(FSH)/human chorionic gonadotropin(hCG)and 28 in the control group who were treated with GnRHa/FSH/hCG only.The total gonadotropin(Gn)doses required,endometrial thickness,oocyte numbers,high quality embryo production rate and pregnancy rate of the two groups were compared.The concentration of growth differentiation factor-9(GDF-9)in follicular fluid was detected by western blotting and the expression of GDF-9 mRNA in granulosa cells was measured using reverse tran-scription-polymerase chain reaction amplification.RESULTS:In the experimental group,the Gn dose was significantly lower than that in the control group;the endometrial thickness,high quality embryo production and pregnancy rates were significantly higher and the expression of GDF-9 mRNA was also significantly higher than in the control group(all P<0.05).CONCLUSION:Shugan treatment can improve the pregnancy rate of women with tubal infertility;its mechanism is possibly related to the increased expression of GDF-9 in granulosa cells. Xing Gao Xiufeng Chang Huilan Du Min Zhang Jianping Zhang Aiping Zhu补肾法与疏肝法对小鼠卵母细胞质量及卵母细胞骨形态发生蛋白-15表达的影响 被引量:9 2020年 目的:研究补肾法、疏肝法提高控制性超排卵小鼠卵母细胞质量的作用机制。方法:将300只雌性昆明小鼠随机分为空白对照组,控制性超排卵组(COH组),疏肝低、高剂量组,补肾低、高剂量组,每组50只。按照1mL/100g体质量灌胃10d,空白对照组和COH组给予蒸馏水灌胃,疏肝低、高剂量组分别给予逍遥丸0.3g/mL、0.6g/mL灌胃,补肾低、高剂量组分别给予补肾调经方2.7g/mL、5.4g/mL灌胃。第11天时除空白对照组外其余小鼠腹腔注射PMSG 10IU,48h后腹腔注射HCG 10IU,16h后进行处死。检测各组排卵数及优质卵泡率;实时荧光定量PCR法检测各组小鼠卵母细胞骨形态发生蛋白-15(BMP-15)mRNA表达;免疫组化和Western blot检测各组小鼠卵母细胞BMP-15蛋白表达。结果:各治疗组及COH组平均排卵数显著高于空白对照组(P<0.05);各治疗组优质卵泡率显著高于COH组(P<0.05);各治疗组卵母细胞BMP-15 mRNA及蛋白表达显著高于COH组(P<0.05)。结论:补肾法、疏肝法可提高控制性超排卵小鼠的排卵数和优质卵泡率,其作用机制与调控卵母细胞BMP-15的表达有关。 白静 杜惠兰 杨丽芸关键词:补肾调经方 逍遥丸 卵母细胞 卵母细胞分泌因子及其Smads信号通路与卵母细胞质量关系的研究进展 被引量:8 2016年 卵母细胞的质量在人类生殖能力、胚胎质量及人类辅助生殖技术妊娠结局方面发挥关键性作用。研究发现有多种方法可研究/评估卵母细胞质量,其中卵母细胞分泌因子(OSFs)中的生长分化因子-9(GDF-9)、骨形态发生蛋白^(-1)5(BMP^(-1)5)和骨形态发生蛋白-6(BMP-6)等是卵泡发育和卵巢功能的重要调节因子,其通过自分泌和旁分泌方式调控优势卵泡的形成及卵母细胞的质量。Smads蛋白家族是OSFs细胞内信号转导的重要因子。本文就OSFs及其Smads信号通路对卵母细胞质量影响的调节机制进行简要综述。 宋翠淼 段彦苍 李文雅 杜惠兰关键词:SMADS蛋白 信号通路 卵母细胞