国家自然科学基金(30872783)
- 作品数：3 被引量：1H指数：1
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- 腺病毒介导的脾酪氨酸激酶对血管平滑肌细胞表型转换的影响
- 2010年
- 目的构建脾酪氨酸激酶(Syk)重组腺病毒并感染血管平滑肌细胞(VSMC),观察Syk对VSMC表型转换的影响。方法运用pDC315-GFP腺病毒载体系统,细菌同源重组法构建含目的基因Syk腺病毒重组质粒pDC315-GFP-Syk,经过包装、扩增、纯化后获得Syk重组腺病毒;测定病毒滴度并感染体外培养的大鼠VSMC,饥饿处理24 h,用Real-time PCR法和Western blot法对Syk、平滑肌22α蛋白(SM22α)及平滑肌α肌动蛋白(-αSM-actin)表达活性进行检测,观察Syk对平滑肌细胞表型转换的影响。结果成功构建携带Syk基因的重组腺病毒,纯化后滴度为1011pfu/mL,腺病毒感染VSMC后5 d,与空病毒组和对照组相比,Syk mRNA(741638.70±35213.53)和蛋白表达水平(2.14±0.71)增高(P<0.01);-αSM-actin(0.80±0.04)和SM22αmRNA表达水平(1.00±0.01)下降(P<0.05),同时,二者的蛋白表达水平也降低(0.61±0.10和0.18±0.06,P<0.01)。结论在VSMC中,Syk通过对其表型转换进行调控,进而影响平滑肌细胞的增殖和迁移。
- 高正祥曹丽丽罗勤余莉刘瀚旻
- 关键词：脾酪氨酸激酶血管平滑肌细胞腺病毒表型
- 脾酪氨酸激酶在血小板源性生长因子诱导的肺血管平滑肌细胞表型转换中的作用
- 2010年
- 目的 观察在血小板源性生长因子（PDGF-BB）诱导增殖的肺血管平滑肌细胞（VSMC）中,脾酪氨酸激酶（syk）的特异性抑制剂piceatannol对VSMC表型转换的影响.方法 以SD大鼠VSMC为基础,设空白对照组（不作任何处理）、对照组（PDGF-BB培养）和药物干预组（PDGF-BB和piceatannol培养）.[3H]-TdR掺入量测定DNA合成;透射电镜观察细胞超微结构变化;用RT-PCR和Western blot对syk、平滑肌α肌动蛋白（α-SM-actin）及平滑肌22α蛋白（SM22α）表达活性进行检测;激光共聚焦显微镜观察F-actin的改变,并对荧光的改变程度进行定量分析.通过以上方法 观察syk在VSMC增殖和表型转换过程中所起的作用.结果 和空白对照组比较,对照组[3H]-TdR掺入量明显升高（2429.25±253.36 vs.242.75±14.33,P〈0.01）;细胞超微结构呈现增殖状态;syk mRNA（1.70±0.25 vs.1.01±0.12,P〈0.05）和蛋白表达水平明显上升;α-SM-actin（0.10±0.00 vs.1.00±0.00,P〈0.01）和SM22α（0.18±0.00 vs.1.00±0.01,P〈0.01）的mRNA和蛋白表达水平明显下降;细胞骨架蛋白F-actin的荧光强度降低（263.75±19.21 vs.1146.23±62.61,P〈0.01）.piceatannol可明显抑制这些生物学效应（药物干预组）.结论 piceatannol可以抑制血小板源性生长因子介导的VSMC内SM22α和α-SM-aetin的表达,从而抑制VSMC表型的转换,进而抑制VSMC的增殖.说明在VSMC中,PDGF-BB是通过syk信号通路对其表型转换进行调控,进而影响VSMC的迁移和增殖.
- 高正祥曹丽丽罗勤余莉王涛王小双康琳敏刘瀚旻
- 关键词：蛋白酪氨酸激酶类表型
- 脾酪氨酸激酶对大鼠肺血管平滑肌细胞增殖的作用被引量：1
- 2010年
- 目的研究脾酪氨酸激酶(spleen tyrosine kinase,Syk)在血小板源性生长因子BB(platelet-derivedgrowth factor-BB,PDGF-BB)诱导大鼠肺血管平滑肌细胞(PVSMCs)增殖中的作用。方法体外培养雄性Sprague-Dawley大鼠PVSMCs,经鉴定后选用3～5代细胞,经PDGF-BB诱导细胞增殖后,用3种不同剂量Syk选择性抑制剂piceatannol干预,以MTT比色法测定细胞增殖,3H-TdR掺入法检测细胞DNA合成,流式细胞仪检测细胞周期,荧光定量PCR、Western blot分别检测细胞Syk mRNA和蛋白表达水平。结果 PDGF-BB刺激后,Syk蛋白表达水平明显增高,细胞显著增殖;经Syk抑制剂piceatannol干预后,随着Syk mRNA和蛋白表达水平的降低,细胞的增殖受到明显抑制,其抑制作用与剂量大小具有相关性。结论在PDGF-BB诱导下的大鼠肺血管平滑肌细胞增殖中,Syk可能起促进作用。
- 罗勤高正祥曹丽丽余莉王涛刘瀚旻
- 关键词：脾酪氨酸激酶血管平滑肌细胞细胞增殖血小板源性生长因子
