国家自然科学基金(31371776)
- 作品数：30 被引量：97H指数：5
- 相关作者：刘箐谢曼曼董庆利郭亮曾海娟更多>>
- 相关机构：上海理工大学华中师范大学中国检验检疫科学研究院更多>>
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- 相关领域：生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 基因dat对单核细胞增生李斯特氏菌的生物学特性影响
- 2018年
- 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)是一种重要的食源性致病菌,其基因dat编码D-丙氨酸氨基转移酶,可将D-谷氨酸转变为D-丙氨酸,后者是细菌细胞壁肽聚糖的组成成分。在Lm野生株EGDe actA及inlB双基因缺失株(EGDeΔactAΔinlB)的基础上,利用同源重组的方法进一步构建了缺失基因dat的菌株(EGDeΔactAΔinlBΔdat),并对该缺失菌株生长状态、毒力基因表达水平、细胞侵袭及生物被膜的形成量等基本生物学特性进行研究,运用Real Time-PCR(RT-PCR)测定Lm毒力基因的相对表达量。结果表明,基因的缺失对突变菌株的生长能力以及生物被膜形成有重要的调控作用,并导致毒力基因srt A、plc A表达量下调,VIP、inlA表达量上调,对Coca-2细胞的侵袭无影响。此缺失株的构建为进一步研究基因dat的功能提供了材料。
- 曾海娟谢曼曼丁承超刘武康董庆利刘箐
- 关键词：单核细胞增生李斯特氏菌基因敲除RT-PCR细胞侵袭生物被膜
- 活载体疫苗的研究进展被引量：11
- 2018年
- 免疫学与生物工程等领域取得的巨大进步,为发展基因工程疫苗提供了更多的理论和技术支持。活载体疫苗(Live Vector Vaccine,LVV),是以细菌或病毒作为外源抗原和治疗因子的载体系统,是目前最具发展潜力的基因工程疫苗之一。不同疫苗载体、抗原呈递方式和对宿主细胞免疫系统启动机制等研究的深入,开拓了活载体疫苗的实用价值。对国际上相关研究予以重点综述,以期为深入开展该领域研究提供依据。
- 马俊飞丁承超谢曼曼曾海娟郭亮汪冠豪刘箐
- 关键词：活载体疫苗细菌病毒抗原呈递
- 细菌产生的活性氧及其功能被引量：15
- 2016年
- 活性氧(Reactive Oxygen Species,ROS)是需氧生物有氧代谢和专一酶类产生的含氧的、化学活性极强的一类小分子物质。按照其产生机理可分为两大产生途径,其一是呼吸作用中发生的单电子转移产生的ROS,通常认为此途径产生过量的ROS对生物大分子具有极强的氧化损伤,与多种疾病密切相关;其二是由专一酶类产生的少量ROS,一般认为此途径产生的ROS具有杀灭入侵的外来微生物的作用,但近年来大量研究表明,此途径产生的ROS可行使信号分子和基因开关等多种生理功能。同时,生物体自身的抗氧化系统也可直接调控ROS的水平。本文综合分析近年来对细菌中的ROS的研究成果,并对目前存在的问题和未来的发展进行评述。
- 刘武康吴淑燕陈国薇张超吴嫚李森刘箐
- 关键词：细菌活性氧抗氧化系统
- 活性氧调节单核细胞增生李斯特菌菌膜形成被引量：4
- 2013年
- 通过使用可抑制还原型辅酶Ⅱ(NADPH)氧化酶活性、降低细胞内源性活性氧(ROS)的抑制剂二苯基碘(DPI),以及用抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)2种方法降低单核细胞增生李斯特菌(Listeria monocytogenes,LM)中ROS的产生,同时用外源补充H2O2的办法来验证ROS对LM菌膜(BF)形成的调控作用。结果表明:DPI和NAC能够通过降低ROS的产生进而抑制LM菌膜的生成,细菌中外源补充活性氧(H2O2)对BF的生成有一定的促进作用。此研究说明,和高等动植物一样,LM中也存在类似于负责产生ROS的NADPH氧化酶,由其介导产生的ROS对LM的BF形成不可或缺,ROS可能是BF形成过程中重要的信号分子。
- 张超陈国薇杨玉萍吴淑燕刘箐
- 关键词：活性氧单核细胞增生李斯特菌
- 双基因敲除减毒单增李斯特菌(ΔactA/ΔinlB)的构建及其生物学初步鉴定被引量：3
- 2016年
- 减毒单增李斯特菌具有成为疫苗活载体的潜力,可同时引起MHCⅠ和MHCⅡ类抗原递呈系统,具有强烈激发CD8+和CD4+细胞免疫的能力。构建毒力基因缺失菌株进而评估其生物活性对于其作为疫苗活载体的开发尤为重要。本文采用同源重组技术构建单缺失菌株Lm-△act A和双缺失菌株Lm-△act A△/inl B,从生长状态、毒力基因表达和对Hep G2细胞侵袭能力方面探讨减毒菌株生物学特性。生长活性测定显示两种减毒菌株和野生型Lm(EGD-e)三者生长状况无差异;实时定量PCR结果显示act A基因缺失后,inl A基因表达水平上升两倍;act A和inl B基因双缺失后,plc B和hly基因的表达水平都有较大幅度的上升;侵袭Hep G2细胞结果显示act A基因缺失后侵袭能力增强、act A和inl B基因共同缺失后侵袭能力减弱。因此,减毒菌株的构建及其生物特性研究不仅对食源性致病菌Lm致病机理具有重要意义,也为构建预防人类和动物疫病的疫苗载体奠定了基础。
- 丁承超曾海娟钟菲菲陈国薇董庆利谢曼曼吴嫚刘武康刘箐
- 关键词：疫苗载体ACTA生物特性细胞侵袭
- 单增李斯特菌nox基因的克隆、表达以及功能被引量：2
- 2017年
- 以Gen Bank中报道的单增李斯特菌(Listeria monocytogenes,Lm)野生型菌株EGDe的nox基因(Gen Bank ID:986631)为研究对象,探讨在高等动植物中普遍存在的烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶在Lm中是否也可以介导产生活性氧(reactive oxygen species,ROS)。首先通过诱导nox基因在BL21中表达产生Nox蛋白,利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳和Western blot鉴定该蛋白质分子质量;然后构建过表达菌株EGDe-nox,测定ROS产生情况,并使用实时荧光定量-聚合酶链式反应检测nox基因的过表达对Lm毒力基因表达的影响。结果表明,经鉴定Nox蛋白分子质量约为33 k D,过表达菌株EGDe-nox与对照组EGDe的ROS产生量相比并无多大变化,nox基因的过表达会导致与侵袭相关的基因act A、inlA和inlB以及毒力基因prfA的表达上调。由此推测,该Nox蛋白不能独立主导ROS的产量,但其过表达却可以增强毒力基因表达上调。本研究为继续探讨细菌中Nox的作用提供一定的参考依据。
- 吴嫚李森陈国薇罗勤刘武康丁承超董庆利刘箐
- 关键词：单增李斯特菌活性氧
- 肉制品异源基因检测技术研究进展被引量：9
- 2018年
- 近年来,食品掺假逐渐成为消费者关注的重要食品安全问题之一。由于利益的驱使,在肉制品行业异源肉质掺假现象尤其严重。目前,用于肉制品异源基因检测的技术包括普通聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术、DNA指纹技术、实时荧光定量PCR技术、微滴式数字PCR技术、DNA条形码技术等。本文综述了肉制品中异源基因检测技术的研究进展,并对每种方法的优缺点和发展趋势予以讨论。
- 胡谦陈颖倪凯葛兆方曾海娟王淑娟马兰刘箐
- 关键词：肉制品异源基因
- prfA基因缺失影响单增李斯特菌诱导细胞凋亡的能力被引量：1
- 2018年
- 单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes,Lm)入侵宿主细胞并带来危害,包含3个关键性环节,即宿主细胞的黏附和侵袭、细胞内增殖和运动、细胞间传播。每个环节的实现均需要不同毒力因子的调控,不同血清型Lm毒力的强弱取决于其毒力因子的活性,prfA基因作为Lm毒力的调控基因起到至关重要的作用。本研究使用单增李斯特菌野生株EGDe及其prfA基因缺失株EGDe-ΔprfA,以人结肠癌腺细胞Caco-2和人肝癌上皮细胞HepG2为研究对象,通过细胞侵袭实验和诱导凋亡能力探究prfA基因缺失对EGDe毒力的影响。溶血实验结果表明prfA基因的缺失并不会明显改变EGDe的溶血能力;侵袭实验表明突变株与EGDe野生株相比对Caco-2细胞和HepG2细胞侵袭能力分别下降了40%和30%;EGDe-ΔprfA处理组与EGDe处理组相比较,Caco-2细胞和HepG2细胞平均凋亡比例分别下降了35.8%和43.7%,说明prfA基因敲除后会降低细胞凋亡。本研究初步证实了prfA基因对EGDe毒力的调控作用,prfA基因缺失降低EGDe侵袭过程中的细胞凋亡,这对于了解EGDe的致病机理及进行相关研究有重要作用。
- 郭亮陈国薇谢曼曼丁承超刘武康董庆利刘箐
- 关键词：单核细胞增生李斯特氏菌毒力凋亡
- 活性氧影响单核细胞增生李斯特菌对7721肝癌上皮细胞的侵袭被引量：2
- 2015年
- 用还原性烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸（nicotinamide-adenine dinucleotide pHospHate,NADPH）氧化酶抑制剂二苯基氯化碘盐（dipHenyleneiodonium chloride,DPI）处理单核细胞增生李斯特菌（Listeria monocytogenes）后,用2’,7’-二氯荧光素二乙酸酯荧光法测定L.monocytogenes中的活性氧（reactive oxygen species,ROS）,结果显示细胞内源性ROS明显降低且有DPI浓度依赖性。进而用ROS产生能力降低的L.monocytogenes侵袭7721肝癌上皮细胞,结果显示：在1~10μmol/L的DPI浓度范围内,随着L.monocytogenes内ROS水平的降低,L.monocytogenes侵袭7721上皮细胞的能力却随之增长。本研究提示：L.monocytogenes可能和高等动植物一样存在类似于负责产生ROS的NADPH氧化酶,由其介导产生的ROS可能调控L.monocytogenes侵袭细胞的能力。
- 陈国薇吴嫚张超刘武康丁承超吴淑燕李森刘箐
- 关键词：单核细胞增生李斯特菌活性氧上皮细胞
- 食源性致病菌疫苗研究进展被引量：3
- 2015年
- 食源性致病菌是可以引起食物中毒或以食品为传播媒介的致病性细菌。致病性细菌直接或间接污染食品及水源,人经口感染可导致肠道传染病的发生、食物中毒,及畜禽传染病的流行。常见的食源性致病菌主要有大肠杆菌（Escherichia coli）、沙门氏菌（Salmonella）、
- 曾海娟宋春美吴淑燕杨标李建武邱实刘箐
- 关键词：食源性致病菌肠道传染病疫苗污染食品传播媒介经口感染
