国家科技重大专项(2011ZX08008-003)
- 作品数：17 被引量：29H指数：3
- 相关作者：林嘉鹏黄俊成汪立芹曹文广周川更多>>
- 相关机构：新疆农业大学中国农业科学院北京畜牧兽医研究所山西农业大学更多>>
- 发文基金：国家科技重大专项新疆维吾尔自治区科技计划项目新疆维吾尔自治区科技支疆项目更多>>
- 相关领域：农业科学生物学更多>>
- Gdf9、Zar1、Mater、Dnmt1 mRNA在绵羊卵母细胞复合体、裸卵及卵丘细胞中的表达被引量：1
- 2012年
- 为了探讨卵丘细胞的完整性在支持和促进绵羊卵母细胞成熟过程中发挥的重要作用以及卵丘与卵母细胞互作的分子机理。本研究对具有完整致密卵丘细胞包裹的和无卵丘细胞包裹的绵羊卵母细胞进行了体外成熟培养试验,以不同方式处理卵丘细胞,应用Rael-time PCR技术,检测母源基因Gdf9(生长分化因子9),Zar1(合子阻滞因子1),Mater(胚胎必要的母体抗原),Dnmt1(DNA甲基化酶1)在不同卵母细胞和卵丘细胞中mRNA的含量。结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于24 h成熟培养的卵母细胞(P<0.05),除Dnmt1外其他3个基因在致密卵丘细胞包裹的卵母细胞的表达量均高于自然裸卵(DOs)(P<0.05),Zar1和Mater在24 h卵丘-卵母细胞复合体的表达量低于24 h裸卵(P<0.05),除Dnmt1外其他3个基因在24 h共成熟卵丘细胞中表达量均高于未培养的卵丘细胞(P<0.05)。结果提示,这4个母源基因对卵母细胞成熟有重要影响,且可能参与了卵丘细胞与卵母细胞间的相互作用,本研究结果为提高卵母细胞的体外成熟效率提供了依据及理论基础。
- 林嘉鹏侯敏白杰赵云程汪立芹黄俊成
- 关键词：卵母细胞卵丘细胞
- 新疆细毛羊超数排卵效果研究被引量：6
- 2012年
- 【目的】提高并稳定新疆细毛羊超数排卵效率,为以生产2～8-细胞期胚胎的转基因研究提供素材。【方法】分别从激素生产厂家、供体年龄、激素处理方案等3个方面探讨新疆细毛羊的超数排卵效果,确定新疆细毛羊超数排卵供体羊的最佳年龄及其有效处理方案。【结果】不同生产厂家的激素对新疆细毛羊黄体数和可用胚胎数均存在极显著影响(P<0.01);1.5周岁以内的新疆细毛羊超排后,其黄体数(6.17个/只)和可用胚胎数(1.50枚/只)均极显著低于2.0周岁以上的新疆细毛羊(黄体数12.24个/只,可用胚胎数8.30枚/只)(P<0.01);FSH剂量在150～200U/只范围内不影响超排效果和胚胎质量(P>0.05);FSH+PMSG超排处理的新疆细毛羊黄体数(6.05个/只)和可用胚胎数(1.76枚/只)则显著低于FSH+PG超排处理(黄体数17.11个/只,可用胚胎数10.38枚/只)(P<0.01)。【结论】新疆细毛羊超数排卵时宜选用2.0周岁以上的供体羊,FSH剂量控制在150～200U/只,若能与PG联合使用其超排效果更好,但不宜与PMSG联合使用。
- 汪立芹林嘉鹏陈童唐森黄俊成黄锡霞
- 关键词：新疆细毛羊超数排卵
- 一种有效分离及在体外扩增成年小鼠精原干细胞的方法被引量：2
- 2012年
- 尝试建立一种简便有效的成年小鼠精原干细胞分离培养及扩增的方法。从单只成年小鼠的睾丸中经过两步酶消化法分离精原干细胞,并在去除间质细胞、纯化后的支持细胞饲养层上培养与扩增,获得稳定增殖的精原干细胞系。此方法可显著提高建系成功率,保证细胞系的单一基因型,显著降低体外培养精原干细胞的成本。为成体基因来源的转基因动物的制作和疾病模型的建立提供技术支持。
- 冉竞超曹文广孙红艳王令辛颖张智英
- 关键词：成年小鼠精原干细胞支持细胞间质细胞
- bFGF浓度对oESC-like增值、凋亡、多能性相关基因表达的影响
- 2012年
- 使用免疫荧光技术检测与增值、凋亡、多能性相关基因的表达水平。提高bFGF浓度可增强PCNA、Oct-4、Sox-2、Bax和Bcl-2的表达,同时使Bcl-2/Bax比值维持较稳定水平。结果表明提高bFGF浓度可增强oESC-like的增值能力和多能性,增强其抗凋亡能力以适应长期培养。
- 周川赵云程汪立芹林嘉鹏金贤华张秀华黄俊成
- 关键词：胚胎干细胞多能性碱性成纤维细胞生长因子
- 添加不同因子对绵羊类胚胎干细胞多能性的影响
- 2012年
- 为筛选出更有利于维持绵羊类胚胎干细胞(oESC-like cell)多能性的因子,在基础培养基N2B27/CH中,分别添加PD、PD+hLIF、PD+BPM4、PD+hLIF+BMP4,通过比较分析,初步筛选出了比本实验室原培养体系(N2B27/CH+bFGF)更利于维持oESC-like多能性的培养基添加因子。结果显示:基础培养基中添加PD、PD+hLIF后细胞生长较好,细胞之间的结合更加致密;各种培养基培养物都表达AKP与Sox2、Oct4免疫荧光蛋白等oESC-like多能性标志;4种不同培养基与bFGF相比,细胞的生长速度减慢;在基础培养基N2B27/CH中添加PD和PD+hLIF使多能性候选基因Lin28与c-Myc表达量极显著升高(P<0.01),Nestin的表达量极显著下调(P<0.01),加入PD+hLIF使Oct4表达量极显著上调(P<0.01)。因此,在oESC-like基础培养液N2B27/CH的基础上,添加PD或PD+hLIF更有利于oESC-like细胞多能性维持。
- 张秀华石庆华赵云程林嘉鹏汪立芹周川金贤华黄俊成
- 关键词：体外培养候选基因
- 7个shRNA分子对绵羊BMPR-1B基因的干扰作用分析
- 2012年
- 为获得有效干扰绵羊BMPR-1B基因的shRNA干扰分子,从绵羊卵巢组织中扩增了1 515 bp BMPR-1B基因全长编码区cDNA序列,添加HA标签序列后,插入Plex-mcs慢病毒质粒,构建Plex-BMPR-1B慢病毒表达载体,转染HEK293细胞,并与2个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,用获得的重组慢病毒感染HEK293细胞;同时,将7个干扰分子与Pll-LentiLox 3.7载体重组,并与3个包装质粒共转染293T细胞进行病毒包装,获得干扰分子的重组病毒颗粒。最后用干扰分子重组的病毒颗粒感染整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞,进行qRT-PCR和Western blot检测。结果显示:重组BMPR-1B蛋白质在稳定整合Plex-BMPR-1B的HEK293细胞系中获得了表达;研究中设计的7个shRNA分子能抑制绵羊BMPR-1B基因表达水平68.30%～99.86%,其中PLL-BMPR-1B-1306和PLL-BMPR-1B-1475干扰分子的干扰效果最好。
- 金贤华林嘉鹏白杰刘晨曦汪立芹阿米娜周川黄俊成
- 关键词：SHRNAHEK293细胞慢病毒
- 哺乳动物精原干细胞研究进展及应用展望
- 2014年
- 精原干细胞(spermatogonial stem cells,SSC)是存在于雄性哺乳动物睾丸曲精细管基膜中的一种具有自我更新和定向分化潜能的原始精原细胞。本文对哺乳动物精原干细胞的形态、分布、相关调节机制、特异性标记及应用前景进行了综述。
- 张炜任有蛇张春香
- 关键词：精原干细胞微环境标记物转基因
- Bmp8a和Bmp8b基因在体外培养小鼠卵巢颗粒细胞中的表达被引量：1
- 2013年
- 为研究体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞Bmp8a和Bmp8b基因的表达情况,用10IU PMSG皮下注射21～23日龄健康雌性ICR小白鼠,48h后刺破卵泡获取颗粒细胞,置入10%FBS的DMEM/F12中体外培养5d,用Trizol提取总RNA,RT-PCR验证后切取目的 DNA片段进行测序。RT-PCR测序结果表明体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可扩增BMP-8atranscript variant 2和BMP-8b的mRNA序列,不扩增BMP-8atranscript variant 1的mRNA序列。结果显示体外培养的小鼠卵巢颗粒细胞可表达BMP-8atranscript variant 2和Bmp8b基因。
- 王建起Selvaraj J.NIMAL曹文广
- 关键词：小鼠卵巢颗粒细胞
- TSA对BCB染色筛选绵羊卵母细胞体外培养的影响
- 2015年
- 【目的】探讨曲古抑菌素A(TSA)对经亮甲酚蓝(BCB)染色分组绵羊卵母细胞体外发育的影响,为绵羊胚胎的产业化生产提供参考依据。【方法】将体外成熟的绵羊卵母细胞置于26μmol/L BCB染色液中避光染色90 min后,分别对BCB+和BCB-卵母细胞进行孤雌激活及体外受精,将获得的孤雌胚胎与体外受精胚胎置于含300 nmol/L TSA的胚胎培养液中培养10 h,再转移至未添加TSA的胚胎培养液中继续培养,连续观察胚胎的体外发育情况。【结果】在孤雌激活中,BCB+卵母细胞的卵裂率、囊胚发育率和囊胚细胞数均显著高于BCB-组(P<0.05,下同);在体外受精中,BCB+卵母细胞囊胚发育率和囊胚细胞数均显著高于BCB-组。将绵羊卵母细胞的孤雌胚胎与体外受精胚胎分别置于含300nmol/L TSA胚胎培养液中培养10 h,结果显示,BCB-卵母细胞孤雌胚胎和体外受精胚胎的囊胚发育率分别由23.33%和19.36%提升至35.65%和29.46%,但未显著影响BCB+卵母细胞的体外发育能力(P>0.05)。【结论】在胚胎培养液中添加300 nmol/L TSA(培养10 h)能显著提高BCB-卵母细胞体外胚胎的后期发育能力。
- 杨楠汪立芹林嘉鹏唐淑红吴阳升张春香黄俊成
- 关键词：绵羊TSABCB卵母细胞体外培养
- 无血清无饲养层培养体系在绵羊胚胎干细胞分离中的应用
- 2014年
- 目的:本文采用N2B27无血清无饲养层的完全已知成份的培养体系,通过机械分离法分离不同阶段的绵羊囊胚,观察不同阶段囊胚对分离绵羊类胚胎干细胞的影响。方法:本实验采用N2B27无血清无饲养层成份完全已知的培养体系,利用机械分离法对不同阶段的绵羊囊胚进行分离,观察其绵羊类胚胎干细胞的原代集落形成率,以及AKP染色,多潜能性候选基因Oct-4和Sox-2免疫荧光检测。结果:分离早期阶段绵羊囊胚获得的绵羊类胚胎干细胞的形成率显著低于扩张(孵化)阶段囊胚(19.6%(11/56)vs 36.9%(31/84))(P<0.05),同时早期和扩张(孵化)阶段绵羊囊胚的AKP染色和多潜能性候选基因Oct-4、Sox-2的表达呈阳性。结论:N2B27无血清无饲养层培养体系是一种有效分离绵羊类胚胎干细胞的培养基,同时分离绵羊扩张(孵化)阶段的囊胚可以显著的提高原代类胚胎干细胞的建系率,为提高绵羊类胚胎干细胞的建系奠定了基础。
- 陈博赵云程林嘉鹏孙晓岩陈雪梅黄俊成
- 关键词：胚胎干细胞囊胚绵羊胚胎
