国家高技术研究发展计划(2008aa101005)
- 作品数：7 被引量：12H指数：1
- 相关作者：黄俊成赵云程陈博林嘉鹏王静更多>>
- 相关机构：新疆畜牧科学院新疆农业大学中华人民共和国农业部更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划新疆维吾尔自治区科技计划项目新疆维吾尔自治区自然科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学医药卫生更多>>
- BCB筛选后的绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的差异性分析被引量：1
- 2010年
- 卵母细胞的胞质成熟对于受精后正常的胚胎发育是至关重要的,亮甲酚蓝染色液(BCB)能有效筛选出胞质成熟卵母细胞。为详细了解BCB筛选出的不同质量绵羊卵母细胞中母源基因mRNA的表达量的差异性,从而证明BCB对绵羊卵母细胞筛选的可行性和可靠性,判断4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟是否有关,为哺乳动物卵母细胞成熟和早期胚胎发育分子机理的研究提供参考。本实验将卵母细胞置于BCB染色液中,细胞质着蓝色的为BCB+,没着蓝色的为BCB-;并利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mate(r胚胎必要的母体抗原)和Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同质量绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明:BCB染色筛选后,阴性卵母细胞4种基因的mRNA表达量比阳性高(P<0.01),这充分证明,BCB能有效筛选出胞质成熟度好的绵羊卵母细胞,这4种母源基因与卵母细胞的胞质成熟有关。
- 王静王静石庆华林嘉鹏陈博汪立芹赵云程
- 关键词：荧光实时定量PCR
- 牛卵母细胞玻璃化冷冻对基因mRNA表达量的影响
- 2011年
- 目的将处于生发泡期(GV期)和体外成熟期(IVM)的牛卵母细胞进行玻璃化冷冻-解冻,对其卵裂率和囊胚率以及一些与发育相关基因的mRNA表达量进行评价。方法玻璃化冷冻GV期(n=224)和IVM期(n=235)牛卵母细胞,解冻后对其进行体外培养并采用quantitative real time-PCR技术对冷冻-解冻后的GV和IVM期卵母细胞中Bax、Dnmt1、Hdac1、Cyclinb1、Cdc2和Cu Zn SOD等基因的mRNA表达量进行检测。结果 GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(14.7%～89.4%,34.5%～89.4%,P<0.001)及囊胚率(3.0%～28.4%,12.3%～28.4%,P<0.001)均极显著低于对照组(n=238),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率(14.7%～34.5%,P<0.001)和囊胚率(3.0%～12.3%,P<0.001)极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞;GV期卵母细胞经玻璃化冷冻后,Dnmt1和Cu Zn SOD基因的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),其余基因mRNA表达量变化不显著;对M期卵母细胞而言,Bax基因mRNA表达量极显著低于对照组(P<0.01),Cyclinb1、Cdc2和Cu Zn SOD基因的mRNA表达量显著低于对照组(P<0.05),其余基因表达量没有发生显著变化。结论对牛GV期或IVM卵母细胞进行玻璃化冷冻可能会导致基因mRNA表达量降低,可能会对胚胎发育产生负面影响。
- 林嘉鹏王静王静赵云程陈童汪立芹陈博
- 关键词：玻璃化冷冻基因表达牛卵母细胞发育能力
- 多因素对昆明小鼠胚胎干细胞原代集落形成和后期增殖的影响
- 2011年
- 目的:研究细胞因子LIF、EGF、bFGF和肝素钠,以及氧分压、温度等多因素对昆明系小鼠胚胎干细胞(KM-ESC)原代集落形成和后期增殖的影响。方法:本研究选择LIF、EGF、bFGF、肝素钠、5%O2,20%O2和37℃、39℃作为研究条件。并检测不同情况下小鼠胚胎干细胞原代集落形成和后期增殖情况。结果:LIF对KM-ESC原代集落形成和后期增殖具有显著促进作用,极显著高于EGF、bFGF和肝素钠组(P<0.01)。温度对KM-ESC原代集落形成和增殖具有显著影响,39℃条件下,原代集落形成率、直径和后期增殖显著高于37℃(P<0.05);而氧分压对KM-ESC原代集落形成无显著作用(P>0.05),但是对原代集落直径和后期增殖有一定促进作用,20%O2组显著高于5%O2组(P<0.05)。结论:LIF、EGF、bFGF、肝素钠、39℃、20%O2对小鼠胚胎干细胞原代集落形成和后期增殖具有显著促进作用。
- 陈博赵云程陈士斌王静王静金贤华
- 关键词：胚胎干细胞细胞因子氧分压
- 家畜胚胎干细胞多能性候选信号通路及分子标志
- 2010年
- 家畜胚胎干细胞具有重要的生物学意义和广阔的应用前景。以下对比了小鼠、人胚胎干细胞多能性调控信号通路的异同,阐述了小鼠、人胚胎干细胞与家畜胚胎干细胞在多能性分子标志上的差异,并结合本实验室开展绵羊胚胎干细胞研究的实际经验,对目前家畜胚胎干细胞建系中可能存在的多能性候选信号通路及分子标志进行了探讨。
- 赵云程陈博周川张秀华黄俊成
- 关键词：家畜胚胎干细胞多能性信号通路候选基因
- 3种基础培养液对昆明小鼠ESC生长的影响
- 2010年
- 以昆明小鼠的囊胚及胚胎干细胞为材料,用组成成份清楚的培养体系,研究不同的基础培养液(h-DMEM,DMEM/F12,Knockout DMEM)对昆明小鼠胚胎干细胞生长的影响。分别将小鼠囊胚置于以上3种培养液为基础的培养液(M1、M2、M3)中,4 d后观察原代集落形成率;取正常培养较小的胚胎干细胞集落,分别接种在上述培养液中培养观察;单细胞传代并观察结果;以碱性磷酸酶染色及OCT-4免疫荧光染色鉴定。3种基础培养基中原代集落形成率分别为100%,100%,96.3%;Knockout DMEM与DMEM/F12中的胚胎干细胞增殖的速度远快于h-DMEM中的增殖速度;单细胞传代的昆明小鼠胚胎干细胞都能形成集落;经AKP染色和OCT-4免疫荧光染色,证明3种培养体系中的胚胎干细胞均符合胚胎干细胞的特性。Knockout DMEM与DMEM/F12较DMEM更有利于胚胎干细胞的生长。
- 陈世彬赵云程况玲叶小芳李丽黄俊成
- 关键词：昆明小鼠
- 不同处理方法对萨福克肉羊超排回收效果的影响被引量：11
- 2011年
- 对119只萨福克肉羊进行超排处理,其中48只为首次超排处理,71只为第二次超排处理。结果表明,首次超排胚胎回收率显著高于二次超排胚胎回收率(P<0.05);首次超排和二次超排间供体羊平均黄体数、胚胎可用率均差异不显著(P>0.05);供体羊经第二情期或埋栓同期发情处理后均能达到预期的效果,但首次超排和二次超排供体羊胚胎回收率均差异显著(P<0.05)。
- 陈童林嘉鹏黄俊成
- 关键词：萨福克肉羊超排胚胎移植
- 玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响
- 2011年
- 为详细了解玻璃化冷冻对绵羊卵母细胞中母源基因mRNA表达量的影响,分别玻璃化冷冻GV期和IVM期(18、24h)绵羊卵母细胞,解冻后进行体外培养。GV期和IVM期卵母细胞经过冷冻-解冻后,卵裂率(10.37%、23.17%、33.07%)均极显著低于对照组(82.96%,P<0.01),且冷冻-解冻后的GV期卵母细胞卵裂率极显著低于冷冻-解冻后的IVM期卵母细胞(P<0.01)。本试验利用荧光实时定量PCR技术检测4种母源基因:Gdf9(生长分化因子-9)、Zar1(合子阻泄因子)、Mater(胚胎必要的母体抗原)、Dnmt1(DNA甲基化转移酶1)在不同处理后的绵羊卵母细胞中的mRNA含量。结果表明,4个基因的mRNA在GV期的表达量均高于IVM期的卵母细胞(P<0.01);经玻璃化冷冻处理后,4个基因的mRNA表达量升高,其中GV期含量最高(P<0.01)。结果提示,绵羊GV或IVM期卵母细胞玻璃化冷冻导致母源基因mRNA表达量升高,可能会对胚胎发育产生负面影响。
- 王静王静林嘉鹏石庆华陈博汪立芹赵云程
- 关键词：玻璃化冷冻荧光实时定量PCR
