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大质粒DNA疫苗pSVK—CAVA高稳定性宿主菌的筛选与鉴定被引量：1: 2013年; 目的：从多种大肠杆菌感受态细胞中筛选出适合该研究大分子质粒DNA疫苗的宿主菌，鉴定其达到中试要求。方法：将疫苗质粒pSVK—CAVA（14．7kb）转化4种大肠杆菌化学感受态细胞并提取质粒，通过琼脂糖凝胶电泳实验检测质粒的形态结构。对基因工程菌进行生化检测，并通过连续传代法和酶切鉴定进行稳定性检测，同时将质粒DNA瞬时转染至293T细胞中检测质粒表达能力。选取质粒含量最高和稳定性最好的宿主菌作为原始种子分装冻存，将原始种子库扩大培养，逐级建立好主种子库和工作种子库即三级种子库。通过摇瓶培养实验在4种常用基础培养基中挑选出最适合质粒生产的培养基。结果：确定了XL-10Gold作为质粒DNA疫苗pSVK—CAVA的宿主菌，基因工程菌传代稳定性和结构稳定性良好，质粒能在293T细胞中体外表达。筛选出TB培养基为基础培养基，质粒容积产量达到9．9mg／L，比LB培养基提高了接近1倍。结论：该研究筛选出大肠杆菌XL-10God作为质粒DNA疫苗的宿主菌，解决了大质粒在常用宿主菌中不稳定的难题，并对基础培养基进行了初步优化。; 吴昊王宇朱晓明阎瑾琦张巍徐元基田仁礼殷小涛刘姣王琳于继云; 关键词：宿主菌 DNA疫苗高稳定性 GOLD

新型抗乳腺癌治疗性基因疫苗“普聚生”研究: 2014年; 核酸类的DNA疫苗药物是研究开发治疗性疫苗的理想路线。DNA疫苗主要通过内源性途径递呈抗原，同时也可进行交叉递呈，所以能引起细胞和体液双重免疫反应，是强大的疫苗输入系统。DNA疫苗更有利于激活细胞免疫应答，这对发展抗恶性肿瘤、抗慢性感染等重大慢性疾病的治疗性疫苗，是极为有利的，因为针对这些疾病的治疗，细胞免疫发挥着更重要的作用。其次， DNA疫苗成品主要为质粒DNA，可利用大肠杆菌原核系统，进行大规模生产和纯化，成本低廉。在常规条件下非常稳定，可长期保存，不需要冷链运输，对于产业化开发和应用非常有利。; 于继云; 关键词：治疗性疫苗基因疫苗乳腺癌细胞免疫应答 DNA疫苗质粒DNA

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国家高技术研究发展计划(2007AA022451)