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影响小鼠体细胞脂质体法转染效率的因素被引量：10: 2005年; 本实验主要研究脂质体量、质粒量、细胞在脂质体-质粒复合物中暴露时间、细胞传代次数以及细胞种类对转基因效率的影响.首先研究了脂质体量、质粒量和细胞在脂质体-质粒复合物中暴露时间对小鼠胎儿成纤维细胞(MFFC)的绿色荧光蛋白(GFP)转染效率的影响.结果表明,在本实验条件下,用传至3代的MFFC,24孔培养板中每孔接种4-10×104个细胞,70%-90%贴满程度,当脂质体(LipofectAMINE)4μg、质粒(pEGFP-N1)0.3μg,复合物作用时间为6h时获得的转染效率最高,为30.7%.用此方案比较不同传代次数的MFFC转染效率结果表明,原代细胞的转染效率为10.0%,3代为28.9%,到15代降到7.2%.说明随着传代次数的增加,转染效率逐渐降低.将MFFC、小鼠输卵管上皮细胞(MOEC)和小鼠颗粒细胞(MGC)分别传至3代,采用上述方案进行转染,转染效率分别是27.8%、13.7%和14.2%.可见不同种类细胞的转染效率不同.细胞周期检测表明,无论是不同代次的细胞还是不同种类的细胞,其转染效率高低与M期所占比例的多少有关.这为如何提高转染效率提供了有利的依据.; 于建宁苗德强马所峰谭秀文袁继红谭景和; 关键词：基因转移脂质体小鼠体细胞转染效率脂质体法

镁离子对小鼠卵母细胞电激活效果的影响: 2004年; 为探索镁离子对卵母细胞激活的作用 ,研究了电激液、操作液和培养液中镁离子对小鼠卵母细胞电激活效果的影响。注射 h CG后 18h获取的小鼠卵母细胞 ,在含有或不含有 Mg2 + 的电激液、操作液和培养液中进行电刺激、洗涤和培养 ,并于培养 6 h和 9h后分别检查原核形成情况。结果发现 ,当用既含钙又含镁离子的甘露醇 (PM)进行电刺激 ,用含 Mg2 +的 M2 (M2 )和 Whitten′s液 (WM)进行洗涤和培养时 ,卵母细胞激活率为 6 7.4 % ,而当电激液为不含 Mg2 +甘露醇 (PM- )时 ,激活率降至 5 1.3% ,2组间差异显著 (P<0 .0 5 )。用 PM-电刺激 ,以 M2或不含有 Mg2 + 的 M2 (M2 - )洗涤并用 WM或不含有 Mg2 +的 Whitten′s(WM- )培养 6 h,卵母细胞激活率分别为 5 0 .0 %、4 9.6 %和 5 3.8% ,3者间差异不显著 ,但显著 (P<0 .0 5 )低于用 PM、M2和 WM处理的对照组的激活率 (72 % )。培养 9h检查时 ,3个处理组的激活率均显著 (P<0 .0 5 )增加 (分别增加了 16 .7%、19.2 %和 18.2 % ) ,而对照组的激活率增加不明显 (5 % )。这些结果说明 ,电激液中的 Mg2 + 对卵母细胞的电激活率和原核形成速度有明显的促进作用 ,而操作液和培养液中的 Mg2 +; 周佳勃孙兴参罗明久谭景和; 关键词：镁离子小鼠卵母细胞

用小鼠单个MⅡ卵和2-细胞期胚胎构建cDNA文库: 2003年; 阶段特异性cDNA文库的构建和筛选是一种分离和克隆早期胚胎特异表达基因的有效方法.本研究利用小鼠单个MⅡ卵母细胞及发育至2-细胞的胚胎分别构建了cDNA文库.滴度分别为:6.5×106、7.2×107,基因片段平均长度为250-1500bp并用β-actin验证了文库的可靠性.这种利用单胚胎构建cDNA文库的方法,不仅解决了胚胎研究材料受限制的问题,而且在材料的发育时间上更加精确,更能反映胚胎发育的规律,是研究早期胚胎发育基因表达以及克隆胚胎发育相关基因的一种有效手段.; 李文雍王荣; 关键词：小鼠 CDNA文库植入前胚胎

ROS和丁内酯-I抑制山羊卵母细胞的减数分裂被引量：1: 2006年; 本文研究了ROS(Roscovitine)和丁内酯-I(ButyrolactoneI,BL-I)两种细胞周期依赖性激酶抑制剂对山羊卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用,并研究了抑制对卵母细胞成熟、激活和发育的影响。结果表明:ROS和BL-I对山羊卵母细胞减数分裂恢复的抑制作用具有浓度依赖性;200μmol/LROS、100μmol/LBL-I、100μmol/LROS+6·25μmol/LBL-I和50μmol/LROS+25μmol/LBL-I都能有效抑制山羊卵母细胞减数分裂的恢复,24h的抑制率分别为78·4%、80·9%、80·3%和77·8%。用ROS和BL-I抑制24h后转为正常培养24h,各处理组卵母细胞的成熟率(分别为81·3%、81·9%、83·2%和85·2%)与对照组(83·0%)无显著差异;成熟卵母细胞的化学激活率分别为93·3%、96·2%、92·5%和90·5%,与对照组(97·8%)无显著差异。然而,抑制处理后卵母细胞的卵裂率和桑椹胚率降低,未能发育到囊胚。ROS和BL-I抑制山羊卵丘扩展,并且转为正常培养后卵丘不能再扩展。ROS和BL-I能够浓度依赖性地抑制山羊卵母细胞减数分裂,二者既可单独,又可降低浓度联合使用,但抑制山羊卵母细胞的浓度远高于牛和猪卵母细胞的;ROS和BL-I抑制24h不影响山羊卵母细胞的成熟和激活能力,但影响卵母细胞的卵丘扩展和胚胎发育能力。因此,山羊卵母细胞减数分裂调控可能比它动物更精细[动物学报52(2):342-348,2006]。; 韩东吴延光兰国成韩正滨周佳勃谭景和; 关键词：山羊卵母细胞体外成熟减数分裂

山羊发情相关输卵管糖蛋白(gEGP)基因的克隆被引量：2: 2002年; The goat estrus\|associated oviductual glycoprotein(gEGP), which is an important secretary protein in oviduct, is directly associated with the zona pellucida of the ovulated oocyte and with the preimplantation embryo development. To elucidate the physiological function and fundamental mechanism,a goat genomic library, in which plague titer is 1\^15×10\+6 pfu/ml, was constructed. Then, with a probe derived from bovine EGP cDNA, the genomic library was screened and a 18 kb fragment containing the gEGP gene was obtained. After PCR with the primers based on the ovine EGP cDNA, two fragments of gEGP gene were obtained and then sequenced. The predicted exon sequence of gEGP gene shows 99 6%, 96 3%, 89 2%, 88 4%, 88 0%, 87 4%, 84 3%, 74 8% homology with the EGP cDNA of sheep, cow, pig, baboon, rhesus, human, hamster, mouse, respectively. Like the other members of EGP gene family, gEGP gene also has many properties of the chitinase super family, and demonstrates the phylogenetic and functional relativity of EGP family with chitinase family.; 徐庆勇刘桂生陈清轩; 关键词：基因克隆山羊

肝素处理山羊精子体外获能的研究被引量：18: 2004年; 系统研究了作用浓度、时间和温度以及输卵管上皮细胞和卵丘细胞对肝素处理山羊精子体外获能后的精子活力、质膜完整性、顶体完整率、获能比例及受精和卵裂的影响 ,为改善山羊精子体外获能效果和研究获能机理提供了必要的数据。主要实验结果如下 :1 在获能液中添加 5、10、2 5、50和 10 0 μg mL肝素处理 45min时 ,添加 50和10 0 μg mL肝素精子获能比率最高 (分别为 55%和 56% ) ,但添加 10 0 μg mL肝素处理后顶体完整率明显 (P <0 0 5)低于对照组。说明山羊精子获能的最佳肝素浓度为 50 μg mL。 2 随肝素作用时间 (0 ,10 ,2 0 ,3 0 ,45,60和 12 0min)的延长 ,获能精子比例逐渐提高。其中 ,肝素处理 45～ 12 0min各组的获能精子比例差异不显著 (P >0 0 5) ,处理12 0min组的精子活力和质膜完整率显著低于其它各组。说明 50 μg mL肝素处理精子获能的最佳时间是 45～ 60min。 3 在 42℃和 3 8 5℃下处理时 ,获能精子比例显著高于 15℃和 3 7℃ ,但 42℃处理后精子活力和顶体完整率显著低于其它温度。因此 ,3 8 5℃为山羊精子获能的最佳温度。 4 与输卵管上皮细胞共培养获能精子比例显著高于对照组和卵丘细胞组 ,但精子活力、质膜完整率和顶体完整率差异不显著。输卵管上皮组的受精率 (91 3 % )和卵?; 周佳勃吴延光刘丽清罗明玖常仲乐谭秀文刘娜谭景和; 关键词：肝素山羊精子体外获能顶体完整率卵裂

注射hCG后不同时间猪所排卵泡内COC的形态和卵母细胞减数分裂进程被引量：4: 2002年; 研究了超排处理注射 h CG后不同时间猪卵丘卵母细胞复合体 (COC)的回收率和形态、卵母细胞减数分裂进程以及 COC形态与生发泡 (GV)染色质构型之间的关系。结果表明 :(1)注射 h CG后 4 h COC的回收率为 5 3.1% ,明显低于注射 h CG后 18、2 2、2 4 h(71.2 %、76 .5 %、70 .0 % ,P<0 .0 5 ) ;(2 )注射 h CG后 18、2 2、2 4 h收集的 COC分别有98.9%、98.0 %、91.4 %的卵丘已经发生扩展 ,而注射 h CG后 4 h收集的 COC则无一发生卵丘扩展 ;(3)注射 h CG后 4h,有少量卵母细胞开始恢复减数分裂 ,至 18h左右开始发生生发泡破裂 (GVBD) ,到 2 2～ 2 4 h有 5 8.4 %～ 6 0 .0 %的卵母细胞发生 GVBD;(4)外层卵丘扩展、放射冠轻微扩展的卵母细胞处于 GV- 1期的比例 (6 9.6 % )明显高于卵丘完全扩展的卵母细胞 (47.8% )和放射冠部分扩展、卵丘已经脱落的卵母细胞 (2 9.3% ) ,而后 2者发生 GVBD的比例(40 %、4 4 % )则略高于前者 (2 7% )。; 孙兴参伊亚玲岳奎忠马所峰冯兴军谭景和; 关键词：HCG 减数分裂进程卵母细胞

影响山羊体外受精的因素被引量：11: 2004年; 以屠宰山羊卵母细胞为材料研究了公羊个体、附睾不同部位精子、成熟培养和受精时卵丘存在与否、卵丘扩展程度及卵龄对山羊体外受精的影响。结果表明 :1)不同公羊精液在受精、卵裂和桑椹 /囊胚率上都有显著差异 ;2 )附睾尾精子和鲜精的受精、卵裂和桑椹 /囊胚率无显著差异 ,但显著高于附睾体和附睾头精子 ;3)成熟培养 2 4和 2 7h卵母细胞的的桑椹胚 /囊胚率显著高于培养 2 1和 30h卵母细胞 ;4 )卵丘扩展 3和 4级卵母细胞受精和桑椹胚 /囊胚率显著高于扩展 0和 1级卵母细胞 ;5 )成熟培养前机械去卵丘严重影响卵母细胞体外受精和桑椹胚 /囊胚率 ;6 )受精前完全去掉卵丘显著影响桑椹胚; 周佳勃吴延光罗明久韩东刘丽清常仲乐谭景和; 关键词：山羊卵母细胞精子体外受精

乙醇及6-DMAP对小鼠卵母细胞孤雌激活的研究被引量：14: 2002年; 实验研究了乙醇、6-DMAP以及二者联合使用时对注射hCG后18小时采集的小鼠卵母细胞孤雌激活的效果。结果证明:(1)用5％的乙醇分别作用5和10分钟及10％的乙醇分别作用5和10分钟,小鼠卵母细胞的孤雌激活率分别为41.3％、63.7％、57.9％和85.6％。说明在一定范围内,随着乙醇浓度和作用时间的增加,小鼠卵母细胞孤雌激活率有上升的趋势。(2)用2mM 6-DMAP作用2、4和6小时,小鼠卵母细胞的孤雌激活率分别为 12.0％、25.0％和40.0％。说明随着6-DMAP作用时间的增加,小鼠卵母细胞的孤雌激活率有所升高。(3)用5％乙醇作用5分钟,再用含有2mmol/L 6-DMAP的培养液培养6小时,小鼠卵母细胞的孤雌激活率可达65.5％,明显高于单独使用5％乙醇作用5分钟或单独使用2mmol/L 6-DMAP作用6小时卵母细胞的孤雌激活率。(4)用10％的乙醇作用5分钟,再用含有2mmol/L 6-DMAP的培养液培养6小时,小鼠卵母细胞的孤雌激活率达到100％,远远高于单独使用10％乙醇作用5分钟或单独使用2mmol/L 6-DMAP作用6小时卵母细胞的孤雌激活率。(5)在单独使用乙醇刺激时,激活卵母细胞中直接卵裂(2-细胞)的比率随乙醇作用强度的增加而增加,最高达62.5％;但6-DMAP则抑制激活卵母细胞的直接卵裂,增加二原核卵的比例。; 兰国成王子玉马所峰苗义良谭景和; 关键词：乙醇 6-DMAP 小鼠卵母细胞孤雌激活

卵泡表面直径判断山羊卵母细胞的发育能力被引量：4: 2004年; 试验探讨了山羊卵泡表面直径与实际直径的相关性及卵泡直径与卵母细胞直径和卵母细胞发育能力的关系。结果显示:(1)山羊卵巢表面直径1.5～2.5mm以上卵泡,其表面直径和实测直径相关性显著(r=0.72),可以利用表面直径对这群卵泡进行分类;(2)表面直径1.5～2.5mm以上卵泡,其卵母细胞已经达到最大直径(约130μm),透明带体积也达到最大(约7×105μm3);在此之前的有腔卵泡,卵母细胞直径和透明带体积均随着卵泡直径增加而增加;(3)不同直径卵泡其卵母细胞减数分裂能力不同:≤0.5mm直径卵泡卵母细胞未获得恢复减数分裂的能力;0.8～1.2mm直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂,但只能发育到M 期;1.5～2.5mm和3.0～5.0mm直径卵泡卵母细胞可恢复减数分裂并发育到M 期,24h时M 期比率分别为93%和91%。; 马所峰苗义良李威兰国成王子玉罗明玖常仲乐谭景和; 关键词：山羊卵母细胞发育能力透明带

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