振兴东北老工业基地项目([2004]2057)
- 作品数：11 被引量：21H指数：3
- 相关作者：方南洙李钟淑林涛李丽张宇更多>>
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- β-巯基乙醇对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响
- 2010年
- 在成熟培养液中添加不同浓度的β-巯基乙醇(β-Mercaptoethanol,β-ME),研究其对延边黄牛卵母细胞体外成熟及发育的影响。结果表明,将卵母细胞置于100μmol/L的β-巯基乙醇的成熟培养液中进行体外培养,其成熟率、卵裂率和囊胚发育率均好于对照和其他处理,说明β-巯基乙醇的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞的体外成熟培养。
- 李丽高璐张涛李钟淑方南洙
- 关键词：延边黄牛卵母细胞体外成熟
- 挤压去核法和盲吸去核法在延边黄牛体细胞核移植中的对比研究被引量：5
- 2009年
- 分别采用挤压去核法和盲吸去核法对延边黄牛卵母细胞进行去核处理,之后进行核移植,培养观察,比较两种去核方法对延边黄牛体细胞核移植效率的影响。挤压法的操作成功率和去核率明显高于盲吸法,盲吸法操作程序耗时比挤压法长,但是差异不显著。两种方法获得了相近的卵裂率和囊胚率,但挤压法构建的重组胚在囊胚数上高于盲吸法。挤压法在延边黄牛体细胞核移植上比盲吸法更有效。
- 林涛方南洙宋君博孙焕林李钟淑
- 关键词：核移植卵母细胞去核方法延边黄牛
- 延边黄牛体细胞克隆囊胚染色体标本制备的研究
- 2008年
- [目的]探讨适合延边黄牛体细胞克隆胚胎染色体标本制备的方法。[方法]利用延边黄牛体细胞克隆产生的囊胚制备染色体标本,采用传统的细胞遗传学方法,将延边黄牛体细胞克隆囊胚分别在含有0.11、.0和10.0μg/ml浓度秋水仙素的CR1aa培养液中继续培养4或6 h,以使细胞分裂停留在中期。处理后的囊胚移入柠檬酸钠低渗液中,室温下处理15～20 min。将低渗后的单个胚胎转移至载玻片上,固定并用体积分数为25%的Giemsa溶液染色1～5 h,蒸馏水冲洗脱色,于室温干燥。显微镜下计算胚胎细胞数和有丝分裂指数以及标本制备质量。[结果]结果表明,1.0μg/ml秋水仙素处理6 h后的染色体标本制备效果较为理想。[结论]该研究为制备延边黄牛体细胞克隆囊胚染色体标本提供适宜的试验参数。
- 吴昊祝文重胡艳明方南洙李钟淑
- 关键词：染色体制备秋水仙素囊胚延边黄牛
- 不同来源的牛皮肤成纤维细胞原代培养效果对核移殖胚发育的影响被引量：1
- 2009年
- 培养延边黄牛不同部位(耳部和腹部)和不同品种(黑白花、利木赞、延边黄牛)耳部的皮肤成纤维细胞,观察原代培养效果并用其核移植,探讨原代培养效果与囊胚发育率的关系。以组织块贴壁率、组织块发育率、组织块的细胞贴壁率作为原代培养效果的衡量标准;传3～5代后进行核移植,分别统计囊胚发育率。结果表明:延边黄牛腹部皮肤的生长效果明显好于耳部皮肤,并且囊胚发育率高于耳部皮肤。利木赞牛皮肤生长效果明显好于延边黄牛和黑白花,延边黄牛与黑白花差异不显著。与之对应,利木赞囊胚发育率显著高于延边黄牛与黑白花,延边黄牛与黑白花差异不显著。
- 孙焕林方南洙胡艳明林涛刘佳丽孔金超李钟淑
- 关键词：原代培养成纤维细胞核移植
- 末期去核在牛体细胞核移植中的应用
- 2009年
- 受体卵母细胞的去核对核移植的效率起决定性作用。很多去核方法已经应用到体细胞核移植当中,并且成功地产生了核移植胚胎。通常我们使用第二次减数分裂中期(MⅡ期)的卵母细胞作为受体细胞进行去核,但是去核效率很低。虽然使用荧光染料和紫外线的照射来完成去核程序可以提高去核效率,但是这些措施有损害细胞质的危险。所以,一种避免使用DNA染料和紫外线照射又能提高去核效率的末期去核方法被发展起来了。本文详述了牛卵母细胞末期去核方法在体细胞核移植中的应用,为从事哺乳动物克隆研究的学者提供参考。
- 林涛胡艳明祖晶李钟淑方南洙
- 关键词：体细胞核移植卵母细胞
- EDTA-Na、半胱氨酸对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响被引量：2
- 2010年
- 在成熟液中添加不同浓度的乙二胺四乙酸钠(EDTA-Na)、半胱氨酸,研究两者对延边黄牛卵母细胞体外成熟及克隆胚胎体外发育的影响。结果表明:(1)将卵母细胞置于100μmol/L的EDTA-Na的成熟液中培养,其成熟率和后期发育率均好于其他浓度组;(2)将卵母细胞置于0.56 mmol/L的半胱氨酸的成熟液中进行培养,成熟率和后期发育率均优于其他浓度组。试验结果证明此两种药的最佳浓度适合进行延边黄牛体细胞克隆中卵母细胞体外成熟培养。
- 李丽韩岩尹多李钟淑方南洙
- 关键词：延边黄牛半胱氨酸卵母细胞克隆胚胎体外成熟
- 哺乳动物体细胞克隆胚胎端粒酶活性的研究进展被引量：1
- 2010年
- 端粒酶(telom erase)是一种蛋白质与RNA组成的核糖核蛋白,是目前发现的唯一能够延长端粒的一种RNA依赖性DNA聚合酶。在DNA复制过程中丢失的端粒可以被有活性的端粒酶修复回来。哺乳动物端粒酶在发育中受调控,端粒的重编程可能是由于早期胚胎不同时期的端粒酶活性而造成的,因此,研究端粒和端粒酶重编程将为哺乳动物体细胞克隆技术奠定重要的理论基础。本文综述了端粒和端粒酶的结构和功能,及其与哺乳动物体细胞克隆早期胚胎发育的关系,并在此基础上探讨了端粒酶在体细胞克隆动物胚胎发育中的重要作用。
- 张宇尹多李丽方南洙李钟淑
- 关键词：哺乳动物体细胞克隆端粒酶
- 产肠毒素大肠杆菌(ETEC)的两种抗原制品对蛋鸡免疫原性的对比研究被引量：7
- 2006年
- 目的采用产肠毒素大肠杆菌(ETEC)K88标准菌株,研究其不同浓度的菌毛及全菌两种抗原对蛋鸡的免疫原性,并确定最佳的抗原浓度。方法用SDS-PAGE鉴定菌毛蛋白的纯度,通过间接ELISA法检测特异性卵黄抗体(IgY)的效价。结果菌毛蛋白对蛋鸡的免疫原性优于全菌;纯化的菌毛蛋白对蛋鸡的免疫原性优于粗菌毛蛋白,其诱导的抗体效价最高可达1∶480000,初免84天后未见有明显的下降趋势;菌毛蛋白最佳浓度为2mg/ml,全菌最佳浓度为1010cfu/ml。结论本研究为制备高效价特异性IgY抗体奠定了基础。
- 李晓宇甄宇红金礼吉徐永平
- 关键词：免疫原性IGY抗体效价
- 延边黄牛卵母细胞激活后第二极体排出的研究被引量：3
- 2008年
- 用乙醇激活不同卵龄(22 h,24 h,26 h,28 h,30 h)的延边黄牛卵母细胞,对第二极体的排出、鉴别以及核物质与第二极体位置关系进行了研究。结果:(1)延边黄牛卵母细胞第二极体排出率随卵龄的增加而增多,而且激活后培养3 h第二极体出现率最高。(2)第二极体的鉴别:根据第一极体退化残留物或第一极体分裂为2个小极体来鉴别第二极体;当2个极体同时存在时,第二极体体积略小、形状不规则。(3)通过Hoechst33342染色观察,核物质与第二极体几乎全部相邻。
- 林涛李晓霞刁云飞祖晶方南洙
- 关键词：延边黄牛卵母细胞
- 延边黄牛体细胞克隆早期胚胎端粒酶活性的测定被引量：2
- 2010年
- 为了解延边黄牛体细胞克隆早期胚胎发育过程中端粒酶活性的变化规律,采用实时荧光定量PCR法检测体细胞克隆早期胚胎及卵母细胞端粒酶活性。研究结果表明,端粒酶活性在未成熟卵母细胞相对水平较高,2-细胞至16-细胞胚胎的端粒酶活性总体水平相对较低(P<0.05),桑椹胚的端粒酶活性总体水平显著升高(P<0.05),在囊胚阶段达到最高。
- 张宇徐颖吴昊方南洙李钟淑
- 关键词：实时定量PCR早期胚胎端粒酶活性
