湖南省自然科学基金(07JJ6164)
- 作品数：6 被引量：25H指数：3
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- 相关机构：南华大学中南大学湖南师范大学更多>>
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- EB病毒LMP1促鼻咽上皮细胞增殖的蛋白分子鉴定被引量：9
- 2010年
- 目的:探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)促鼻咽上皮细胞增殖的分子机制。方法:采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-pLNSX(空载体)和RV-LMP1分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-pLN-SX与NP69-LMP1稳定表达细胞系,通过绘制细胞生长曲线、平皿克隆形成实验和软琼脂集落形成实验检测LMP1对NP69细胞增殖的影响;运用比较蛋白质组学方法鉴定LMP1在NP69细胞中参与调节的蛋白,并对部分蛋白表达进行验证。结果:(1)LMP1具有促鼻咽上皮细胞NP69增殖的作用(n=3,P<0.05)。(2)鉴定了22个LMP1参与调节NP69细胞的蛋白(表达上调的蛋白9个,下调的13个),实时荧光定量RT-PCR和Western blotting证实了部分上述蛋白的差异表达。结论:LMP1可能通过参与调节keratin19和vimentin等蛋白的表达促鼻咽上皮细胞NP69增殖。
- 张志伟张琼刘洁琼余艳辉贺智敏
- 关键词：EB病毒细胞增殖
- EB病毒潜伏性膜蛋白1转化NP69细胞的蛋白表达分析被引量：1
- 2009年
- 目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)转化鼻咽上皮细胞NP69的表达蛋白。方法采用比较蛋白质组学方法,鉴定NP69-pLNSX与NP69-LMP1细胞系中的差异表达蛋白,分析LMP1在NP69细胞中参与调节的蛋白。结果鉴定了LMP1在NP69细胞中参与调节有22个蛋白(表达上调的蛋白9个,下调的13个)。结论LMP1在NP69细胞中可能通过调节Vimentin和Keratin 19等蛋白的表达而起转化作用。
- 张志伟刘洁琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒差异表达蛋白质
- LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响被引量：1
- 2009年
- 目的探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)羧基末端第三活性区在鼻咽上皮细胞生长中的作用。方法采用逆病毒感染的方法,建立稳定表达野生型LMP1(LMP1WT)和突变型LMP1(LMP1△232-351)的鼻咽上皮细胞(NP69)系,然后通过细胞生长曲线、平皿克隆形成与软琼脂集落实验、细胞周期与抗凋亡检测等方法,观察LMP1羧基末端第三活性区对鼻咽上皮细胞生物学特性的影响。结果LMP1△232-351体外促转化细胞生长能力较LMP1WT明显降低(P<0.01);NP69-LMP1△232-351细胞的凋亡与细胞G1期分布均较NP69-LMP1WT细胞增加(P<0.01)。结论LMP1羧基末端第三活性区可能通过调节细胞周期与凋亡而影响鼻咽上皮生物学特性。
- 张志伟张琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒生物学特性
- EB病毒LMP1-CTAR3对NP69细胞增殖和蛋白质表达的影响被引量：14
- 2009年
- 为了探讨EB病毒潜伏性膜蛋白1(LMP1)第三个功能活性区域(CTAR3)在鼻咽上皮细胞NP69中的转化作用机制,采用逆病毒感染的方法,将浓缩的逆病毒RV-LMP1和RV-LMP1△232～351分别感染鼻咽上皮细胞NP69,建立NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351稳定表达细胞系.通过绘制生长曲线、平皿克隆形成试验和软琼脂集落形成试验比较野生型和突变型LMP1对NP69细胞增殖的影响,运用蛋白质组学方法鉴定NP69-LMP1与NP69-LMP1△232～351细胞间的差异表达蛋白,选用实时荧光定量RT-PCR与Western blot对其中部分蛋白质点差异表达进行验证.结果发现:a.突变型LMP1△232～351促NP69细胞增殖的能力较野生型LMP1明显降低(n=3,P<0.05);b.鉴定了LMP1-CTAR3在NP69细胞中参与调节的16个蛋白质(表达上调的蛋白质8个,下调的8个).c.实时荧光定量RT-PCR和Westernblot证实了部分上述蛋白质的差异表达.以上结果说明,LMP1-CTAR3是其发挥促细胞增殖的重要活性部位,可能通过参与调节G蛋白和异柠檬酸脱氢酶等蛋白质的表达而起作用.
- 张志伟张琼余艳辉欧阳咏梅贺智敏
- 关键词：EB病毒差异表达蛋白
- 白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌T-47D细胞株生长的抑制作用被引量：6
- 2009年
- 目的:观察白花蛇舌草醇提取物对乳腺癌细胞T-47D生长的影响。方法:采用平皿克隆形成实验、软琼脂集落形成实验和BrdUrd(溴脱氧尿苷)掺入实验,观察不同浓度的白花蛇舌草醇提取物(1.0μg/mL,3.0μg/mL,10μg/mL,30μg/mL,100μg/mL)对T-47D细胞锚定依赖性生长和软琼脂集落形成能力及核酸合成的抑制作用。结果:①随着白花蛇舌草醇提取物浓度的升高,对T-47D细胞的生长呈现明显抑制作用;②白花蛇舌草醇提取物可呈浓度依赖性抑制对数生长期T-47D细胞核酸合成。结论:白花蛇舌草醇提取物可能通过影响肿瘤细胞核酸合成而抑制T-47D细胞生长。
- 张志伟李瑜陈雪莲尹婵英智曹建国
- 关键词：白花蛇舌草
- hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达载体的构建与功能研究
- 2010年
- 为了探讨端粒酶催化亚单位(hTERT)启动子调控重组血管基膜衍生多功能肽(rVBMDMP)基因表达抑制肺癌细胞生长的作用机制,采用PCR方法,克隆hTERT启动子核心区片段,并检测其功能活性.然后,构建pLNSX/hTERT/rVBMDMP逆病毒载体,获取逆病毒,感染肺癌A549细胞,检测hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对细胞形态、细胞生长、细胞凋亡以及Caspase-3表达的影响.另外,观察hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达对裸鼠成瘤的抑制作用、瘤组织细胞的凋亡及Caspase-3表达情况.结果发现:a.hTERT启动子核心区能调控rVBMDMP基因的表达(n=3,P<0.05);b.hTERT启动子调控rVBMDMP基因的表达具有抑制肺癌A549细胞的生长和裸鼠成瘤作用(n=6,P<0.05);c.rVBMDMP基因表达能促进肺癌A549细胞凋亡和Caspase-3蛋白表达.以上结果说明,hTERT启动子调控rVBMDMP基因表达后,通过提高Caspase-3的表达水平,促进细胞凋亡而抑制肺癌A549细胞的生长.
- 张志伟贺修胜罗招阳李艳兰曹建国
- 关键词：HTERT启动子细胞凋亡CASPASE-3蛋白
