国家高技术研究发展计划(2003AA241121002)
- 作品数：22 被引量：64H指数：5
- 相关作者：王春凤姜秀云何昭阳王春芳王会岩更多>>
- 相关机构：吉林农业大学山东宝来利来生物工程股份有限公司江西农业大学更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金吉林省杰出青年科学基金更多>>
- 相关领域：农业科学生物学轻工技术与工程医药卫生更多>>
- 植酸对枯草芽孢杆菌及其噬菌体的作用研究被引量：2
- 2015年
- 通过在培养基中添加不同浓度的植酸,探究了植酸对枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)0085和0090菌体生长、芽孢形成的影响及对枯草芽孢杆菌噬菌体P85和P90的抑制效果。结果表明,添加0.150%植酸对其噬菌体P85和P90有明显抑制效果,但影响芽孢的形成;添加0.070%植酸既可以在一定程度上抑制噬菌体P85和P90又不会影响枯草芽孢杆菌及芽孢的生长。
- 刘秀侠穆熙军赵效南王鑫孙学森谷巍
- 关键词：植酸枯草芽孢杆菌噬菌体
- 猪A组轮状病毒Vp6基因与乳酸菌非抗性表达载体的重组及在大肠杆菌中的表达
- 2005年
- 以猪A组轮状病毒mRNA为模板,应用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)技术,扩增了1194bp的Vp6基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-TVector中,构建克隆质粒pGEM-T-Vp6。用SacⅠ和KpnⅠ双酶切pGEM-T-Vp6和以胸苷酸合成酶基因(thymidylate synthase,thyA)为选择压力的非抗生素抗性的穿梭表达载体pW425t,并将纯化的Vp6基因亚克隆至表达载体pW425t中,构建出可以在乳酸菌与大肠杆菌之间穿梭表达的原核表达重组质粒pW425t-Vp6。将pW425t-Vp6转化至thyA基因缺陷型的大肠杆菌感受态E.coliX13中,经生长功能弥补筛选阳性克隆,通过SDS-PAGE分析,可见约44.88kD的融合蛋白。由Western blot分析,表明该蛋白具有与轮状病毒多克隆抗体的反应原性,从而为pW425t-Vp6在乳酸菌受体菌株中表达提供理论基础和实验依据。
- 王春凤丛彦龙刘尚高李玉
- 关键词：轮状病毒VP6基因大肠杆菌
- 猪源植物乳杆菌的诱变选育及其对小鼠免疫性能的影响被引量：2
- 2014年
- 为了获得1株具有较好耐酸耐胆盐、体外黏附率较高的植物乳杆菌,研究其对小鼠免疫性能的影响,试验将植物乳杆菌进行紫外诱变,对其耐酸和耐胆盐性能进行选育,将植物乳杆菌选育株BL-15冻干后,定量溶解,分3次口服(灌胃)BALB/c小鼠,采集血液、脾脏、粪便,处理后测定小鼠免疫性能指标的变化情况。结果表明,经过诱变后,从17株诱变株中成功筛选获得了1株耐酸耐胆盐较好、体外黏附率较高的植物乳杆菌BL-15,经小鼠口服后,提高了小鼠生长初期的脾脏指数及细胞因子IL-2的含量,加强免疫后肠内容物中SIgA含量与对照组相比,均差异显著(P<0.05)。说明该菌株可以诱导小鼠产生良好的黏膜免疫应答,提高小鼠的免疫性能。
- 程福亮王春凤聂兆晶姜艳萍王丽荣刘洋庆谷巍
- 关键词：植物乳杆菌诱变选育小鼠免疫性能
- 猪A组轮状病毒Vp4全基因的克隆与序列分析被引量：2
- 2005年
- 应用RT-PCR技术,从猪A组轮状病毒总RNA中扩增了2 331 bp的Vp4全基因,通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至克隆载体pGEM-T中,转化至受体菌株JM109中,通过质粒提取、限制性内切酶酶切、PCR、序列测定等方法鉴定,构建出重组阳性克隆质粒pGEM-T-Vp4。经DNASTAR软件分析核苷酸和氨基酸序列,结果显示该实验株与黑龙江株和美国株的同源性最高,均达到99%以上,并具有轮状病毒Vp4全基因的抗原表位区。
- 王春凤于守平杨树宝李玉
- 关键词：轮状病毒
- 猪轮状病毒VP6基因的原核表达载体构建和表达被引量：4
- 2008年
- 根据已报道的猪轮状病毒VP6基因序列设计了2对引物,利用pGEM-T-Easy-VP6重组质粒为模板,经PCR扩增获得了1 194 bp的产物。将扩增片段分别插入到pET5α和pGEX-4T-2构建表达载体,并分别在大肠杆菌BL21(DE3)Plyss和ER2566中表达。结果表明:成功构建了重组质粒,而且该片段在大肠杆菌中也成功表达,获得了大小为44 kD的蛋白。
- 张二芹马强王会岩闫明田
- 关键词：猪轮状病毒VP6基因原核表达
- 猪A组轮状病毒主要蛋白的编码基因DNA疫苗联合免疫的研究被引量：2
- 2017年
- 为研究猪A组轮状病毒(PRV-A)血凝蛋白(VP4)、群抗原蛋白(VP6)和中和抗原蛋白(VP7)编码基因疫苗联合免疫的效力,本研究将表达PRV-AVP4、VP6、VP7蛋白基因的真核表达质粒pVAX1-VP4、pVAX1-VP6、pVAX1-VP7以pVAX1-VP4+pVAX1-VP7(B组)和pVAX1-VP4+p VAX1-VP6+pVAX1-VP7(A组)设计试验组,分别以100μg/只经肌肉注射途径免疫BLAL/c小鼠,间隔2周以相同剂量、途径加强免疫,共免疫3次,免疫后不同时间采血,采用ELISA检测血清抗体。结果显示,B组在免疫后14 d和42 d检测到RV抗体阳性(P/N≥2),A组在免疫后14 d、28 d、42 d均检测到RV抗体阳性(P/N≥2);脾脏免疫相关细胞测定结果表明,A组的CD4^+/CD8^+T淋巴细胞比值和CD19^+B细胞数量均高于B组,两组与对照组相比差异显著(p<0.05);淋巴细胞转化试验显示A组的SI值均高于B组,并且42 d时A、B两组差异显著(p<0.05)。上述结果表明,3组分联合免疫的DNA疫苗可以诱导小鼠产生较强的体液和细胞免疫应答,为PRV-A的核酸疫苗研究奠定了基础。
- 高艳都兴洋智海东王洪峰张峣付朝阳高宏雷王春凤
- 关键词：真核表达联合免疫
- 鹅细小病毒VP2结构蛋白基因重组植物乳杆菌的制备及表达产物检测
- 以鹅细小病毒染色体DNA为模板,PCR扩增GPV主要结构蛋白VP2基因,试剂盒回收纯化VP2基因后将其克隆入以氨苄青霉素为选择压力的pGEM-T克隆载体中,再转化E.coli JM109感受态细胞,筛选阳性克隆,提取重组...
- 李亚杰王春凤杨桂连郝凤奇袁起伟
- 关键词：鹅细小病毒VP2基因植物乳杆菌
- 文献传递
- 转猪轮状病毒VP6基因烟草的杂交检测被引量：1
- 2008年
- 为了确定VP6基因是否已整合到烟草的基因组中,通过PCR-Southern、Dot-Blot和Western-Blot方法检测转基因烟草,结果表明,VP6基因已经成功地转化到烟草中。
- 张二芹王云高婉丽陶爱丽李世访
- 关键词：转基因烟草杂交
- 重组鸡α-干扰素的表达及其生物活性的初步研究被引量：5
- 2014年
- 为获得重组鸡α-干扰素并对其进行生物活性研究,本试验对重组大肠杆菌进行诱导表达,收集重组鸡α-干扰素包涵体后进行复性纯化及免疫印迹试验,并通过测定病毒EID50,在接种H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的鸡胚中进行干扰素抗病毒活性试验,运用微变量细胞病变抑制法进行重组鸡α-干扰素抗病毒效价的测定。结果显示复性后重组鸡α-干扰素的免疫印迹试验成功获得了预期条带,在鸡胚中重组鸡α-干扰素具有显著的抗H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒等活性作用。在CEF/VSV细胞系上测定重组鸡α-干扰素的抗病毒效价为1.5×210 U/mg左右,高浓度重组鸡α-干扰素具有一定的细胞毒性。结果表明重组鸡α-干扰素蛋白具有免疫原性和抗原性,在鸡胚内具有较好的抑制或杀灭H9亚型禽流感病毒、新城疫病毒和传染性支气管炎病毒的效果,呈广谱性,抗病毒效价较高,为下一步抗病毒制品的创制奠定基础。
- 程福亮聂兆晶陈甜甜刘洋庆房栋崔兆连谷巍王春凤
- 关键词：生物活性
- 牛分枝杆菌Ag85B基因的克隆及其在大肠杆菌中的表达被引量：1
- 2006年
- 以牛分枝杆菌Vallee111染色体DNA为模板,根据已发表的Ag85B成熟蛋白基因的核苷酸序列设计合成特异性引物进行PCR扩增,获得约860bp的DNA片段。通过T-A克隆技术,将PCR产物克隆至pGEM-T载体中,成功地构建出克隆载体pGEM-T-85B。以BamH和EcoR双酶切pGEM-T-85B和pET28a(+),并将纯化的Ag85B基因亚克隆至pET28a(+)中,构建出原核表达载体pET28a-85B。将pET28a-85B转化至感受态E.coli BL21(DE3)中,经IPTG诱导和SDS-PAGE分析,可见约30000的外源蛋白带。Western blot分析发现,该蛋白具有牛分枝杆菌抗原性,从而为进一步研究Ag85B的亚单位疫苗及DNA疫苗奠定了基础。
- 姜秀云王春凤王春芳何昭阳
- 关键词：牛分枝杆菌克隆原核表达
