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沙拉沙星完全抗原的合成及多克隆抗血清制备被引量：3: 2014年; 为了制备沙拉沙星(SARA)多克隆抗血清,采用碳二亚胺(EDC)法将SARA分别与牛血清白蛋白(BSA)、卵清白蛋白(OVA)偶联,制备了免疫原SARA-BSA、包被原SARA-OVA。经SDS-PAGE电泳与紫外扫描初步判定偶联成功,然后用免疫原SARA-BSA分别按20、50μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫3次,每次间隔3周,于最后1次免疫10d后断尾采血,制备多克隆抗血清。采用间接ELISA方法测定多克隆抗血清效价,间接竞争ELISA方法测定其敏感性和特异性。结果显示,制备多克隆抗血清效价均达1∶10 000以上,IC50为623.5ng/mL,且与其他药物交叉反应率低,具有较好的特异性。; 刘儒彪胡骁飞孙亚宁王方雨蔡齐超邓瑞广张改平刘玺; 关键词：沙拉沙星人工抗原 ELISA

氟喹诺酮类药物多残留酶联免疫检测方法的建立被引量：23: 2014年; 【目的】氟喹诺酮类药物(FQs)在畜牧业中广泛用于预防和治疗细菌性疾病,不合理使用导致在动物性食品中残留,严重危害消费者健康,其检测受到世界各国重视。制备抗多种FQs单克隆抗体(m Abs),建立间接竞争ELISA(ic ELISA)检测方法,为动物性食品中FQs多残留检测奠定基础。【方法】环丙沙星(CPFX)羧基上引入氨基丁酸后为半抗原(CPFX-A),质谱鉴定;分别用碳二亚胺法(DDC)和混合酸干法将半抗原与牛血清白蛋白(BSA)和卵清蛋白(OVA)偶联合成免疫原(CPFX-A-BSA)和包被原(CPFX-A-OVA),紫外和红外光谱鉴定是否偶联成功;CPFX-A-BSA免疫Balb/c小鼠,间接ELISA和ic ELISA方法测定多抗血清效价和敏感性,选取抗血清效价高和敏感性好的鼠用于细胞融合;NS0细胞和脾细胞按1﹕5比例在PEG-1500作用下融合,筛选抗FQs杂交瘤细胞株,并进行效价、亚型、敏感性和交叉反应率鉴定;体内诱生腹水法制备m Ab,液体石蜡作为诱导剂,每只鼠注射108个杂交瘤细胞;选敏感性和广谱特异性好的腹水m Ab,建立ic ELISA标准曲线,对ic ELISA检测方法优化,在鸡肉中添加10种FQs进行测定,将测定结果与HPLC法比较,用SPSS 17.0软件进行显著差异性分析。【结果】半抗原改造和人工抗原合成成功;3只鼠血清效价均达到1﹕1.28×104以上,2号鼠血清效价最高(1﹕2.56×104),且IC50值最低(12.92 ng·m L-1),选择2号鼠作为细胞融合用鼠;4次亚克隆筛选并鉴定后获得3株敏感广谱特异的杂交瘤细胞,分别命名为2H5、3D11、4F4,细胞上清效价分别为1﹕1 600、1﹕1 600和1﹕800,腹水效价分别为1﹕1.6×106、1﹕8.2×105和1﹕8.2×105;ic ELISA方法的包被原浓度为1μg·m L-1,5%猪阴性血清4℃包被过夜,单抗1﹕40 000稀释,山羊抗鼠酶标二抗(Ga MIg G-HRP)1﹕8 000稀释;反应温度均为37℃,标准品与单抗同时加入反应15 min,洗板后加二抗反应25 min;显色10 min,2H5细胞株腹水敏感性和广谱特异性; 李新朋姜金庆钱爱东王自良范国英单晓峰康元环李艺; 关键词：环丙沙星氟喹诺酮类药物杂交瘤细胞株间接竞争ELISA

动物性食品中氟喹诺酮类药物多残留检测研究进展被引量：19: 2013年; 氟喹诺酮类药物是一类人工合成的抗菌药物,在兽医领域应用广泛,但其残留对人畜危害严重。论文对动物性食品中氟喹诺酮类药物多残留检测方法进展做一综述,主要包括微生物法,高效液相色谱法,液相色谱-质谱法,薄层色谱法,毛细管电泳法,ELISA方法,免疫亲和色谱法,免疫传感器法,胶体金免疫层析法,电化学发光法,分析了不同多残留检测方法的优缺点,为生产选择检测方法提供建议,也为进一步研究氟喹诺酮类药物多残留检测提供参考。; 李新朋姜金庆钱爱东丁菡李艺; 关键词：氟喹诺酮类药物动物性食品多残留检测

有机RFID标签在动物食品溯源中的应用前景被引量：22: 2012年; 无线射频识别(RFID)标签的高成本一直制约着RFID技术的普及应用,有机RFID标签因其成本较低而备受各国关注。该文对新型有机RFID标签在动物食品溯源过程应用的特点进行分析,并与传统的条码、无机RFID标签进行比较。对动物性食品溯源系统的各主要环节特点及其对标签技术的需求进行论证,并对3种标签技术在各环节中的应用进行分析,提出在溯源过程中引进有机RFID标签降低成本,以促进动物性食品追溯技术的广泛应用。; 赵秋艳汪洋乔明武宋莲军; 关键词：标签动物性食品 RFID

胶体金免疫层析法联检食品中5种典型沙门氏菌模型的建立和优化被引量：19: 2014年; 采用胶体金标记抗沙门氏菌单克隆抗体,将沙门氏菌单克隆抗体和驴抗鼠抗体(二抗)喷涂于硝酸纤维膜上分别作为检测线和质控线,研制能联检5种典型沙门氏菌(甲型副伤寒沙门氏菌、鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌、鸭沙门氏菌)的胶体金免疫层析试纸条。结果表明,该试纸条能达到同时检测5种沙门氏菌的目的,其中甲型副伤寒沙门氏菌的检测灵敏度最高,为105 CFU/m L;鼠伤寒沙门氏菌、猪霍乱沙门氏菌、肠炎沙门氏菌和鸭沙门氏菌的检测灵敏度为106 CFU/m L。沙门氏菌加入量为10~100 CFU时,增菌16~20 h,该试纸条能够检测出牛奶、鸡蛋样本中的5种沙门氏菌。本实验研制的试纸条能快速高效地联检食品中5种典型的沙门氏菌,特异性高、灵敏度好,在对多种沙门氏菌进行联检方面有很重要的应用价值。; 夏诗琪徐超莲刘道峰郭琦吴松松赖卫华; 关键词：沙门氏菌胶体金免疫层析试纸条联检

T2毒素人工抗原的合成及鼠源多克隆抗血清的制备被引量：6: 2013年; 合成并鉴定T 2毒素人工抗原,通过动物免疫制备敏感性高、特异性好的鼠源T 2毒素多克隆抗血清。采用琥珀酸酐法将T 2毒素活化为T 2HS,T 2HS在碳二亚胺(EDC)作用下与牛血清白蛋白(BSA)或卵清白蛋白(OVA)偶联,合成免疫抗原T 2 BSA和检测抗原T 2OVA,经鉴定后,分别按30、50μg/只的剂量免疫BALB/c小鼠,共免疫4次,每次间隔4周,最后1次免疫10d后,断尾采血,制备多抗血清。利用间接ELISA方法测定抗血清效价,间接竞争ELISA测定其敏感性和特异性。结果表明,免疫的6只小鼠效价均达到了1∶104以上,2号小鼠多抗血清的敏感性最好,其半数抑制质量浓度(IC50)为324ng/mL,且具有良好的特异性。成功合成了T 2毒素人工抗原,制备了多克隆抗体血清,为T 2毒素单克隆抗体的制备及其免疫学快速检测方法的建立奠定了基础。; 王坤李清州胡骁飞李文君孙亚宁王方雨职爱民邓瑞广张改平; 关键词：T2毒素人工抗原 ELISA

三聚氰胺胶体金免疫层析方法的建立被引量：7: 2013年; 建立了一种快速检测三聚氰胺的胶体金试纸条的方法,其中包括胶体金的制备、金标抗体的制备、试纸条的组装和测试等步骤。结果表明:三聚氰胺快速检测试纸条的检测限为10 g/L,检测时间为10min,可实现原料乳不经处理直接上样,是一种简便准确的快速检测方法。; 夏骏赖卫华涂继平徐国茂张新宇冯荣华衷平海何小立; 关键词：胶体金三聚氰胺免疫层析

铬离子单克隆抗体的制备及食品总铬含量检测胶体金免疫层析试纸条的研制被引量：4: 2016年; 目的:制备三价铬离子螯合物单克隆抗体(Cr^(3+)-EDTA m Ab),研制胶体金免疫层析试纸条(Cr-Strip)。方法:用异硫氰酯法合成Cr^(3+)-i EDTA-BSA,UV和ICP-AES进行鉴定;细胞融合技术筛选Cr^(3+)-EDTA m Ab细胞株,体内诱生腹水法制备Cr^(3+)-EDTA m Ab,并对其特性进行分析;应用Cr^(3+)-EDTA m Ab研制Cr-Strip,并测定其性能。结果:筛选出3株杂交瘤,最好的是2A11G5,Ka为2.69×109L/mol,对Cr^(3+)-EDTA的IC50为9.84μg/L,与其他重金属离子无交叉反应;Cr-Strip的检测时间为10 min,检测限为5μg/L,其检测结果与ICP-AES符合率为100%。结论:制备出了高质量的Cr^(3+)-EDTA m Ab,研制出更为灵敏的Cr-Strip。; 王亚楠王晓斐丁菡张海棠范国英王自良; 关键词：单克隆抗体胶体金免疫层析

司帕沙星人工抗原合成及鼠源多克隆抗血清的制备被引量：3: 2013年; 为合成并鉴定司帕沙星(Sparfloxacin,SPFX)人工抗原,制备出相应的鼠源多克隆抗体。采用DCC法将半抗原SPFX与载体蛋白牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫原SPFX-BSA和包被原SPFX-OVA,采用UV和SDS-PAGE鉴定与分析;用小鼠进行免疫,采用间接ELISA测定多抗血清效价、阻断ELISA鉴定其抑制。结果表明,SPFX与BSA偶联后,波峰右移,并且SDS-PAGE电泳中BSA的泳动速度大于SPFX-BSA,初步说明SPFX与BSA偶联成功;6只小鼠血清效价均达到1×104以上,且3号小鼠多抗血清敏感性最好,半数抑制质量浓度(IC50)为237.36μg/L。通过系列鉴定,成功制备出司帕沙星免疫原和包被原,获得高效价、特异性好、亲和力较高的鼠源抗SPFX多克隆抗体血清。; 贾国超职爱民宋春美刘珍张静王玲玲李梦琴张改平; 关键词：司帕沙星人工抗原 ELISA

抗重金属铜离子单克隆抗体的制备及其免疫学特性被引量：4: 2016年; 为制备抗Cu^(2+)的高效价、敏感、特异的单克隆抗体,采用已合成的铜离子人工抗原Cu^(2+)-ITCBEBSA免疫Balb/C小鼠,通过间接ELISA和阻断ELISA筛选备用小鼠,用细胞融合技术制备抗Cu^(2+)的单克隆抗体。结果筛选到4株特异性强、灵敏度高的杂交瘤细胞,其中杂交瘤细胞株2B8培养上清中的抗体效价采用间接ELISA检测为1∶(1.28×10~3),用其制备的腹水中抗体效价为1∶(5.12×10~5),该单克隆抗体为IgG1/κ型,对Cu^(2+)-EDTA的半数抑制质量浓度(IC_(50))为29.78μg/L,与Zn^(2+)-EDTA的交叉反应率(CR)为26.0%,与其他金属螯合物没有交叉反应,表明获得特异性较好的抗Cu^(2+)的单克隆抗体,可用于铜离子的免疫学检测。; 孙勇付世杰秦保亮王亚楠姜金庆王自良; 关键词：铜离子单克隆抗体免疫学特性

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国家科技支撑计划(2011BAK10B01)

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