国家自然科学基金(30300124)
- 作品数：19 被引量：75H指数：5
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- 相关机构：山东大学山东省肿瘤医院第四军医大学更多>>
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- 短发夹状RNA抑制GCS基因在人乳腺癌细胞的表达及逆转其多药耐药被引量：3
- 2006年
- 目的构建葡萄糖神经酰胺合成酶(GCS)基因的短发夹状RNA(shRNA),观察其对人耐药乳腺癌细胞GCS表达的抑制及多药耐药的逆转作用。方法设计2对GCS基因编码的反向重复序列,中间间隔6个nt,体外合成并克隆至载体pSUPER。转染乳腺癌细胞,Westernblot和免疫细胞化学方法测定GCS表达。Westernblot、比色法检测细胞内caspase-3的表达,流式细胞仪分析细胞凋亡率。四氮唑盐(MTT)法检测半数细胞抑制浓度。结果酶切和DNA测序证实重组质粒构建成功。转染后GCS蛋白含量分别下降80%和82%,GCS表达阳性率降低为18·1%和16·7%。caspase-3表达和活性均显著增强,细胞凋亡率明显增加,细胞对化疗药物耐药性有明显下降。结论shRNA可有效抑制人耐药乳腺癌细胞中GCS表达,并可提高其对多种化疗药物的敏感性。
- 孙妍琳周庚寅孙建国林晓燕李红白艳花张翠娟
- 关键词：短发夹状RNA乳腺癌葡萄糖神经酰胺合成酶凋亡
- 肿瘤多药耐药及其基因治疗被引量：3
- 2005年
- 高鹏周庚寅
- 关键词：肿瘤多药耐药相关蛋白质类基因疗法
- 细胞衰老与肿瘤发生及药物治疗被引量：3
- 2005年
- 肿瘤细胞往往具有衰老障碍而表现出无限增殖的能力。细胞衰老障碍与肿瘤化疗和多药耐药关系密切,恢复肿瘤细胞衰老通路是肿瘤治疗和逆转多药耐药的一个很有前途的研究方向。
- 牟坤周庚寅
- 关键词：细胞衰老肿瘤化疗多药耐药
- 人乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶基因的表达和意义被引量：3
- 2005年
- 目的探讨葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramidesynthase,GCS)基因在人乳腺癌细胞的表达及意义。方法体外培养人耐阿霉素乳腺癌细胞MCF7/ADR和人敏感乳腺癌细胞MCF7,MTT法检测MCF7/ADR细胞耐药倍数,RT PCR法检测两种细胞GCSmRNA的表达,免疫细胞化学法检测GCS蛋白表达水平。结果MCF7/ADR细胞耐药倍数为53倍,RT PCR检测结果显示两种细胞均有GCSmRNA表达,且MCF7/ADR细胞GCSmRNA表达水平较MCF7细胞有显著升高(P<0.05),免疫细胞化学结果显示二者GCS蛋白均有表达且表达水平有显著差异(P<0.05)。结论GCS基因在乳腺癌细胞中表达,GCS对于乳腺癌的发生发展具有重要作用,GCS在耐药乳腺癌细胞的高表达证明GCS与肿瘤耐药密切相关,为肿瘤耐药的逆转治疗提供了新的方向。
- 孙妍琳周庚寅李锴男林晓燕高鹏郭成浩侯丽
- 关键词：乳腺肿瘤葡萄糖神经酰胺合成酶基因表达
- 靶向葡萄糖神经酰胺合成酶逆转乳腺癌多药耐药的研究
- 2005年
- 目的:探讨靶向葡萄糖神经酰胺合成酶(glucosylceramide synthase,GCS)对乳腺癌多药耐药的逆转作用及机制。方法:GCS反义寡核苷酸(GCSASODN)转染人耐药乳腺癌细胞MCF-7/AdrR,RT-PCR检测细胞GCS和多药耐药基因1(MDR1)mRNA的表达,免疫细胞化学染色检测细胞GCS蛋白和P-糖蛋白(P-gp)的表达,流式细胞仪分析细胞周期和凋亡。Caspase-3活性测定法检测Caspase-3活性改变。结果:GCSASODN转染人耐药乳腺癌细胞MCF-7/AdrR后,GCS和MDR1mRNA的表达水平分别为0.3、0.7,GCS蛋白和P-gp表达阳性率分别为23%、33%,GCS和MDR1的mRNA和蛋白水平较对照组有显著性差异(P<0.05)。转染后细胞周期改变不明显,但细胞凋亡增加为13.7±4.1,Caspase-3活性升高为0.0725±0.0003,与对照组差异有显著性(P<0.01)。结论:靶向GCS通过直接抑制GCS活性,并间接下调MDR1mRNA和蛋白表达,激活Caspase-3活性,诱导耐药细胞凋亡增加,有效逆转乳腺癌多药耐药。
- 孙妍琳周庚寅赵胜梅牟坤张翠娟张晓芳相磊
- 关键词：葡萄糖神经酰胺合成酶乳腺肿瘤
- PTEN过表达增加人乳腺癌MCF-7细胞对阿霉素的药敏性被引量：2
- 2005年
- 目的 研究野生型PTEN体外瞬时转染对人乳腺癌MCF 7细胞的生长抑制作用和对阿霉素敏感性的增效作用。方法 构建带有人全长PTENcDNA的真核表达载体pEGFP C1 PTEN ,以脂质体介导的方法转染MCF 7细胞,观察对细胞生长的抑制作用。以MTT法检测细胞对阿霉素的敏感性。结果 PTEN使MCF 7细胞出现皱缩变圆,胞质出芽等凋亡形态学改变;流式细胞仪检测显示转染PTEN 4 8hG0 /G1期细胞增加了14 79% ,并出现凋亡峰(10 6 0 % ) ;PTEN显著降低阿霉素处理后的克隆存活率;PTEN转染组细胞对阿霉素的敏感性显著增加(χ2 =8 5 9,P <0 0 5 ) ,其半数致死剂量(IC50 )仅为空载体对照的1/ 2 (t=4 77,P <0 0 1)。结论 PTEN过表达诱导MCF
- 林晓燕周庚寅宋英华高鹏孙妍琳
- 关键词：人乳腺癌MCF-7细胞PTEN阿霉素药敏性过表达半数致死剂量
- 乳腺癌组织中多形上皮黏蛋白1表达与肿瘤侵袭力的研究被引量：2
- 2005年
- 目的 探讨多形上皮黏蛋白 1 (mucin1 )表达异常与乳腺癌细胞侵袭力的关系。方法 应用免疫组织化学方法检测 97例乳腺肿瘤组织中mucin1的表达。乳腺癌细胞株MCF 7转染反义寡核苷酸(ASODN)后,应用逆转录 聚合酶链反应 (RT -PCR)检测mucin1mRNA,应用流式细胞术检测mucin1表达阳性率,细胞侵袭实验检测细胞侵袭力。结果 mucin1在癌旁正常乳腺组织和乳腺良性肿瘤组织中均为细胞顶膜阳性表达,而在早期乳腺癌 (30例 )、乳腺浸润性癌 (18例 )、乳腺癌淋巴结转移灶(17例)中为整个细胞膜阳性表达。与乳腺原位癌相比,微小浸润癌的mucin1表达强度升高(P=0. 04),而乳腺浸润性癌与乳腺癌淋巴结转移灶之间mucin1表达强度差异无统计学意义(P=0. 56)。转染ASODN的乳腺癌细胞株,其mucin1mRNA和mucin1蛋白表达率显著下降 (P<0. 05),细胞侵袭实验中,侵袭细胞数明显减少(P<0 .05),正义组实验细胞无类似改变。结论 乳腺癌细胞mucin1在细胞膜的异常分布及表达升高可促使癌细胞间相互排斥而易于向周围侵袭生长,但该异常表达可能与其淋巴道转移关系不大。针对mucin1mRNA的ASODN可抑制乳腺癌细胞的侵袭能力。
- 高鹏周庚寅张庆慧相磊马超虞华鹏喻芳
- 关键词：阳性表达ASODN黏蛋白淋巴结转移灶瘤组织
- 转染抗mdr-1核酶基因逆转肿瘤细胞耐药性的研究被引量：9
- 2004年
- 目的 研究转染抗mdr 1核酶基因能否实现对乳腺癌细胞多药耐药 (MDR)的持久逆转。方法 构建增强型绿色荧光蛋白 (EGFP)为报告基因的核酶表达质粒并转染耐阿霉素的人乳腺癌细胞株MCF 7/ADR和敏感株MCF 7,激光共聚焦显微镜观察EGFP的表达 ,流式细胞术检测细胞转染率和P 糖蛋白含量 ,逆转录 (RT) 聚合酶链反应 (PCR)检测细胞的mdr1mRNA ,罗丹明 12 3(Rh12 3)外排实验检测细胞的P 糖蛋白转运功能。加入阿霉素 4 8h后 ,常规MTT法检测细胞存活率。结果 转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179后 ,两组实验细胞的mdr 1指数由 2 2 0分别降为 0 76和 1 4 0 ,P 糖蛋白表达率由 5 5 0 %降为 4 6 %和 18 2 % ,Rh12 3荧光强度由 2 2 0 %升为 4 6 2 %和 70 1% ,细胞存活率由 75 %降为 2 8%和 4 3%。并且核酶质粒可在细胞内稳定表达 ,转染RZ196、RZ179的实验细胞经G4 18筛选完成 2个月后 ,细胞质中仍可见明显的EGFP表达 ,细胞的mdr 1指数分别为 0 81、4 17,P 糖蛋白表达率分别为 5 2 %、19 5 % ,Rh12 3荧光强度分别为 5 1 4 %、71 6 % ,与刚完成筛选时的差异无显著性 (P >0 0 5 )。结论 转染抗mdr 1核酶质粒RZ196和RZ179均可持久逆转肿瘤细胞MDR 。
- 高鹏周庚寅张庆慧周成军甄军晖孙妍琳
- 关键词：基因转染肿瘤细胞耐药性多药耐药基因1
- 葡萄糖糖基神经酰胺合成酶特异性小干扰RNA表达载体的构建及其逆转乳腺癌细胞耐药的研究被引量：1
- 2005年
- 目的 构建葡萄糖糖基神经酰胺合成酶(GCS)小干扰RNA表达载体,观察其对乳腺癌耐药细胞(MCF- 7 /ADR)GCS基因表达和耐药性的影响。方法 设计合成2对GCS基因的特异性siRNA,分别定向克隆入真核表达载体pSUPER,构建pSUPER -GCS1和pSUPER -GCS2重组质粒,脂质体LipofectAMINE2000介导转染MCF -7 /ADR细胞,空载体pSUPER转染作为对照,逆转录聚合酶链反应(RT- PCR)分析GCSmRNA的表达,流式细胞仪观察GCS蛋白的表达,四氮唑盐法检测阿霉素对MCF -7 /ADR细胞的半数抑制浓度(IC50 ),流式细胞技术检测细胞凋亡率的改变。结果 酶切分析和测序证实成功构建了针对GCS的siRNA表达载体pSUPER -GCS1和pSUPER GCS2。两对重组质粒均可特异性抑制GCS基因表达,转染后48hGCSmRNA抑制率分别为89 .4%、88. 5%,GCS蛋白含量分别下降为8 .3%±1 .0%, 9. 2%±0 .8%,四氮唑盐法显示重组质粒对阿霉素耐药性相对逆转率分别为93. 7%、91. 6%,明显提高了乳腺癌细胞对于阿霉素的药物敏感性,流式细胞仪结果表明细胞凋亡率增加为15. 38±1 .16, 13. 92±1 .73,而空载体对照组无以上作用。结论 GCS特异性siRNA表达载体构建成功,且有效抑制了GCS基因表达,并通过诱导耐药细胞凋亡率增加,逆转乳腺癌细胞多药耐药。
- 孙妍琳周庚寅李锴男李文通宋现让高鹏
- 关键词：逆转特异性小干扰RNA合成酶神经酰胺
- 细胞表面糖蛋白表达异常与涎腺多形性腺瘤复发的关系被引量：2
- 2005年
- 目的研究多形上皮粘蛋白1(mucin1)和E_钙粘蛋白(E_cd)与涎腺多形性腺瘤复发的关系,探讨可预测涎腺多形性腺瘤复发的指标。方法以52例涎腺多形性腺瘤石蜡标本为研究对象,其中初发33例,复发12例,恶性7例。采用显微镜观察肿瘤周围包膜的状况,免疫组织化学检测初发、复发、恶性多形性腺瘤细胞的mucin1和E_cd蛋白表达情况。结果初发和复发多形性腺瘤的包膜状况差异无显著性(P>0.05)。初发多形性腺瘤细胞的mucin1蛋白表达阳性率(64%)与复发者(67%)的差异无显著性(P>0.05)。两者的差别表现为mucin1阳性表达部位分布不同,初发者主要为细胞顶膜染色(19/21),复发者主要为整个细胞膜染色(6/8),两者差异有显著性(P<0.05);恶性多形性腺瘤染色部位与复发者相同,且阳性表达率显著升高。3种肿瘤的E_cd表达阳性率差异无显著性(P>0.05)。结论多形性腺瘤的包膜状况在预测其复发潜能上实际应用性不强,多形性腺瘤细胞E_cd的表达改变与其复发潜能无显著关系。Mucin1在多形性腺瘤细胞膜上的异常分布,使其倾向于向周围分散生长,这种异常分布可作为预测多形性腺瘤复发的指标之一。
- 高鹏周庚寅宋向荣侯建新张翠娟马超
- 关键词：多形性腺瘤E-钙粘蛋白
