国家自然科学基金(39700154)
- 作品数：14 被引量：59H指数：5
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- 柔红霉素对培养人视网膜色素上皮细胞BAK和BCL-XL表达的影响被引量：6
- 2003年
- 目的 观察BAK和BCL-XL在正常培养和经柔红霉素处理后的人视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium,RPE)细胞中的表达。方法 人RPE细胞培养液中加入终浓度为200μg·L^(-1)柔红霉素作用12h,更换新鲜培养液继续培养24h后,运用抗BAK和BCL-XL的多克隆抗体进行免疫细胞化学染色,观察2种基因在RPE细胞中表达的变化。结果 BAK和BCL-XL在正常RPE细胞中均存在表达,但前者的染色强度大于后者(P<0.05),2者光密度分别为56.4±5.7和32.4±4.7,经柔红霉素处理后,RPE细胞BAK的染色强度增加(P<0.05),而BCL-XL的染色强度不变(P>0.05),其光密度值分别为79.2±6.5和34.7±3.9。结论 BAK和BCL-XL在人RPE细胞中存在表达。柔红霉素可以促进BAK的表达,这可能是其诱导RPE细胞凋亡的机理之一。
- 杜红俊惠延年王雨生韩泉洪马吉献
- 关键词：柔红霉素视网膜色素上皮BAK
- Bax过表达对培养人视网膜色素上皮细胞bak和bcl-xl表达的影响
- 2005年
- 目的观察bak和bclxl在正常培养和经bax转染后的人视网膜色素上皮(RPE)细胞中的表达。方法采用脂质体对正常培养人RPE细胞进行bax基因的转染,筛选阳性转染的细胞。实验分为正常细胞组,空载体组和基因转染组。运用抗bak和bclxl的多克隆抗体进行免疫细胞化学染色,观察两种基因在RPE细胞中的表达的变化。结果bak和bclxl各组细胞中都存在阳性表达。bak在三组细胞中的染色光密度分别为56.4±5.7,52.3±5.1和75.4±7.5,其中转基因组的染色强度高于正常和空载体组(P<0.05)。bclxl在三组细胞中的染色光密度分别为32.4±4.7,29.5±4.2和28.7±4.3,染色强度在三组之间没有明显差别(P>0.05)。结论bak和bclxl在正常人RPE细胞中存在表达。bax转染可以促进细胞bak的表达,这可能是其诱导RPE细胞凋亡的机制之一。
- 杜红俊惠延年王雨生韩泉洪马吉献
- 关键词：BAX基因视网膜色素上皮BAKBCL-XL
- 转染反义Bcl-2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响被引量：2
- 2003年
- 目的 :观察转染反义Bcl 2对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞 (RPE)凋亡的影响 .方法 :用Annexin V fluo ,琼脂糖凝胶电泳 ,TUNEL分别观察柔红霉素诱导正常RPE与转染反义Bcl 2的RPE的凋亡作用 .结果 :Annex in V fluo法在 4h即可检测到凋亡细胞膜的变化 ,琼脂糖凝胶电泳在 36h可检测到确切的梯状带纹 ,1 80 μg·L-1 柔红霉素作用 72h转染组与正常组凋亡指数分别为 0 .5 9和 0 .4 5 (P <0 .0 1 ) .结论 :转染反义Bcl 2可增加柔红霉素诱导的RPE凋亡的敏感性 .
- 刘洪雷王雨生惠延年
- 关键词：转染反义BCL-2柔红霉素细胞凋亡增生性玻璃体视网膜病变
- 柔红霉素联合bax基因转染对兔实验性增生性玻璃体视网膜病变的影响被引量：5
- 2003年
- 目的 :观察柔红霉素 (DNR)和bax基因转染联合应用对兔实验性增生性玻璃体视网膜病变 (proliferativevitre oretinopathy ,PVR)形成的影响 .方法 :将 2 .5× 10 5个正常视网膜色素上皮 (retinalpigmentepithelial,RPE)细胞和 3.5×10 5个经bax基因转染的RPE细胞注入兔玻璃体腔 ,观察诱发兔眼PVR形成的能力 ,同时观察 10nmolDNR对PVR形成的抑制作用 .结果 :在 3,7,14 ,2 1和 2 8d时RPE组PVR的平均分级为 :0 .6 2 5 ,2 .0 0 0 ,3.0 0 0 ,4 .12 5和 4 .2 5 0 ,基因转染细胞组PVR的平均分级为 :0 .5 0 0 ,0 .875 ,2 .0 0 0 ,3.12 5和3.6 2 5 ,后者PVR分级均低于RPE细胞组 (P <0 .0 5 ) .2 8d时正常细胞组视网膜脱离发生率为 10 0 % (n =8) ,bax基因转染细胞组的视网膜脱离发生率为 6 2 .5 % (n =8) .在 7,14 ,2 1和 2 8d时 ,DNR对正常细胞组PVR的抑制率分别为6 0 % ,6 4 % ,5 7%和 5 7% ,对基因转染细胞组PVR分级的抑制率分别为 73% ,71% ,6 8%和 6 9% ,后者普遍大于前者 .结论 :DNR可以抑制PVR的形成 。
- 杜红俊惠延年王雨生韩泉洪马吉献
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变视网膜色素上皮BAX基因基因转染柔红霉素
- 增生性玻璃体视网膜病变的药物治疗进展被引量：4
- 2005年
- 孔源性视网膜脱离并发的增生性玻璃体视网膜病变(proliferativevitreoretinopathy ,PVR)为一系列的细胞活动 ,即去分化细胞的形成、迁移、粘附及增殖 ,形成视网膜表面膜并收缩 ,导致视网膜脱离手术失败。临床上对于PVR的手术治疗效果尚不理想。药物治疗包括柔红霉素、5 氟尿嘧啶和维甲酸等的应用。文章就PVR药物治疗的种类和不同给药途径作一简要回顾。
- 杜红俊王雨生惠延年
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变药物治疗
- 转染Zn^(2+)诱导表达反义bcl-2基因对人视网膜色素上皮细胞的影响
- 2004年
- 目的:观察转染Zn2+诱导表达的反义bcl-2 基因对人视网膜色素上皮(RPE)细胞的影响。方法:培养的正常RPE细胞与转染反义bcl-2 RPE细胞采用免疫组化,克隆形成试验、MTT,流式细胞仪,TUNEL分别予以观察。结果:转染后RPE细胞细胞骨架角蛋白表达阳性;硫酸锌诱导表达的安全剂量为160μmol/L;诱导表达反义bcl-2 RPE大部分细胞bcl-2 表达为阴性,部分弱阳性;在第10d细胞克隆形成率分别为(4.65±0.043)%与(4.85±0.085)%(P >0.05),诱导表达反义bcl-2 的RPE生长曲线在5d后表现为低增生率(P <0.01);柔红霉素作用后G2期细胞由9.9%增加至30.4%;180μg/L柔红霉素作用反义bcl-2转染组TUNEL阳性细胞可见典型凋亡小体。结论:转染可诱导表达的bcl-2 基因的RPE细胞可以进行细胞凋亡的后续研究。
- 刘洪雷王雨生惠延年
- 关键词：转染人视网膜色素上皮细胞免疫组化柔红霉素
- Bak和bcl-xl在增生性玻璃体视网膜病变玻璃体内细胞和视网膜前膜中的表达被引量：2
- 2004年
- 目的 观察增生性玻璃体视网膜病变 (PVR)玻璃体内和视网膜前膜 (ERM)中细胞凋亡、bak和bcl xl基因表达、以及细胞凋亡和基因表达之间的关系。方法 对 12例PVRB级玻璃体切割液离心收集物 ,18例C级以上PVR的ERM进行研究 ,末端标记 (TUNEL)染色法检测凋亡细胞 ,免疫组织化学染色法检测bak和bcl xl基因的表达。结果 B级玻璃体切割液标本中bak和bcl xl阳性细胞百分数分别为 73 0 %和 65 1% ,TUNEL阳性细胞百分率平均为 2 7 2 %。C级以上PVR的ERM标本中bak和bcl xl的阳性细胞比例分别为 61 4%和 77 0 % ,TUNEL阳性细胞百分率平均为 18 6%。PVRB级的凋亡细胞百分数及bak的表达与C级以上标本之间相差明显 (P <0 0 5 ,P <0 0 1) ,而bcl xl的表达在两者间没有差别 (P >0 0 5 )。凋亡细胞bak表达与凋亡细胞百分数相关系数r值为 0 86(P <0 0 1) ,与bcl xl的r值为 0 3 2 (P >0 0 5 )。结论 PVR眼增殖细胞中可见bak和bcl xl的表达和细胞凋亡的存在。bak的高表达可能与PVR中增生细胞凋亡有关。
- 杜红俊惠延年王雨生韩泉洪马吉献
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变BAKBCL-XL
- Bcl-2表达降低对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞凋亡的影响被引量：7
- 2004年
- 目的 观察bcl 2表达降低对柔红霉素诱导人视网膜色素上皮细胞 (RPEc)凋亡的影响。方法 用DNA打点杂交、免疫组化、TUNEL分别观察bcl 2表达降低对柔红霉素诱导RPEc的凋亡作用。结果 DNA打点杂交阳性结果间接证明了外援基因的成功转染 ;诱导表达反义bcl 2 ,显示了在蛋白水平上bcl 2表达明显降低 (灰度值为 10 5 .7±6 0vs 74 .5± 5 .5 ) ;180 μ犂·L-1柔红霉素作用后反义bcl 2转染组可获得更高的凋亡指数(P <0 0 1)。结论 bcl
- 刘洪雷王雨生惠延年
- 关键词：反义BCL-2柔红霉素人视网膜色素上皮细胞凋亡
- Caspase-3在柔红霉素诱导的人视网膜色素上皮细胞凋亡中作用被引量：30
- 2001年
- 目的 探讨天冬酰胺特异酶切的半胱氨酸蛋白酶(caspase)成员 caspase- 3在柔红霉素诱导的人视网膜色素上皮 (RPE)细胞凋亡中的变化 .方法 原代培养的人 RPE细胞经 2 0 0μg· L- 1 柔红霉素诱导 8,2 4和 36 h后 ,按照 caspase- 3荧光检测试剂盒说明处理细胞 ,再通过荧光比色法间接检测细胞碎片中 caspase- 3的活性 .结果 正常 caspase- 3的活性为(0 .0 94± 0 .0 0 5 ) nmol AFC,8h后增加为 (0 .44 6± 0 .0 2 9)nm ol AFC,2 4h后为 (0 .75 4± 0 .0 5 6 ) nmol AFC,36 h又下降到 (0 .486± 0 .0 33) nmol AFC,但都高于正常水平 (P<0 .0 1) .加入特异性四肽抑制物 DEVD- CHO1μL 后活性为 (0 .0 40±0 .0 0 3) nm ol AFC,显著低于正常 (P<0 .0 1) .结论 Caspase-3参与了柔红霉素诱导的人视网膜色素上皮细胞的凋亡 ,柔红霉素可使其活性增加 .
- 杜红俊惠延年王雨生韩泉洪马吉献
- 关键词：柔红霉素视网膜色素上皮CASPASE-3细胞凋亡
- 增生性玻璃体视网膜病变的动物模型被引量：3
- 2006年
- 孔源性视网膜脱离并发的增生性玻璃体视网膜病变(PVR)为一系列的细胞活动导致的视网膜脱离手术失败的病变。其发生机制尚不完全清楚,药物治疗效果也不理想。为了研究PVR的发生、发展和治疗,需要首先建立PVR的动物模型。由于PVR的主要病理变化是细胞的过度增生,因而动物模型多以细胞增生模型为主,细胞种类有视网膜色素上皮(RPE)细胞、成纤维细胞、软骨细胞、血管内皮细胞等。其他的模型还包括炎症和细胞迁移模型。实验动物主要有兔、猴、猪和豚鼠等。文章就不同动物模型的制作方法和特点作一简要回顾。
- 杜红俊王雨生惠延年
- 关键词：增生性玻璃体视网膜病变动物模型视网膜脱离视网膜色素上皮
