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IL-18-PE38融合基因真核表达载体的构建及其在软骨细胞中的表达被引量：3: 2005年; 目的构建含有白细胞介素-18(IL-18)及毒素融合基因的真核表达载体,并研究其在软骨细胞中的表达情况。方法通过分子克隆技术,将IL-18-PE38融合基因插入真核表达载体PsecTag2B中,构建真核表达载体PsecTag2B-IL-18-PE38,经EcoR单酶切及PCR鉴定。脂质体法将其转入原代软骨细胞,通过荧光免疫细胞化学法鉴定其瞬时表达。结果经EcoR单酶切及PCR鉴定证实IL-18-PE38融合基因成功克隆入真核表达载体PsecTag2B中。荧光免疫细胞化学法荧光显微镜照片证实此重组基因可在软骨细胞膜及细胞浆中表达。结论证实了IL-18-PE38融合基因可在软骨细胞中表达,为进一步研究其对类风湿关节炎的治疗奠定了基础。; 吴瑕张林屈艺李明远蒋中华李虹; 关键词：真核表达载体软骨细胞脂质体

mM IP-1α-DT390重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达研究: 2007年; 目的构建小鼠M IP-1α(mM IP-1α)基因和白喉杆菌外毒素DT 390基因的真核融合表达载体,并对其功能进行初步研究。方法通过RT-PCR获得mM IP-1α基因,插入含DT 390基因的真核质粒SRα,获得真核表达载体SR-αmM IP-1-αDT 390。重组载体经PCR、限制性内切酶酶切及DNA序列测定鉴定,用Po lyF ect脂质体转染N IH 3T 3细胞,然后用免疫荧光技术检测目的蛋白的表达,并利用转染N IH 3T 3细胞后的培养上清体外测定mM IP-1-αDT 390融合蛋白的选择性细胞毒活性。结果成功构建真核表达质粒SR-αmM IP-1-αDT 390,mM IP-1-αDT 390融合蛋白可在N IH 3T 3细胞株中正确表达,细胞转染上清对小鼠活化T淋巴细胞具有较强的细胞抑制效应。结论mM IP-1-αDT 390融合基因真核表达载体的获得及功能的部分研究为进一步研究其抗炎效果和临床应用奠定基础。; 吕梅励李虹梁伟波陈文捷贾怡蒋忠华张卫东张林; 关键词：巨噬细胞炎症蛋白-1Α 重组免疫毒素真核表达

牛MBP诱导BALB/c和C57BL/6小鼠实验性变态性脑脊髓炎样反应的研究被引量：4: 2005年; 为了进一步研究实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)动物模型,采用从新鲜牛脊髓中提取的MBP免疫诱导非敏感品系BALB/c小鼠和C57BL/6小鼠,通过对实验动物的症状、中枢神经系统的病理改变及细胞因子水平变化的检测,较成功地建立了C57BL/6、BALB/c小鼠的EAE模型,实验方法稳定可靠。; 贾怡陈文捷李虹张林李明远官鹏蒋中华吕梅励梁伟波周斌; 关键词：C57BL/6 BALB/C 髓鞘碱性蛋白 IFN-Γ

大鼠IP-10-PE38 KDEL重组免疫毒素真核表达载体的构建及表达被引量：1: 2007年; 目的构建大鼠干扰素诱导蛋白10(rIP-10)基因和铜绿假单胞菌外毒素衍生物(PE38KDEL)基因的真核融合表达载体,并研究其在NIH3T3细胞中的表达情况。方法通过PCR获得本实验需要的rIP-10基因片段,通过酶切原核表达载体PRKL459K-IL-4-PE38KDEL获得铜绿假单胞菌外毒素衍生物PE38KDEL基因,再通过适当的酶切及连接反应,构建rIP-10与PE38KDEL融合基因的真核表达载体pcDNA3.1(+)-rIP-10-PE38KDEL。重组质粒经限制性性内切酶,PCR及DNA序列测定证实构建成功后,用PolyFect脂质体转染NIH3T3细胞,然后用免疫荧光技术检测rIP-10-PE38KDEL融合蛋白在NIH3T3细胞的表达。结果酶切分析、PCR及DNA序列测定证实,rIP-10-PE38KDEL融合基因被成功克隆入真核表达质粒载体pcDNA3.1(+),免疫荧光技术检测证实重组基因可在NIH3T3细胞表达。结论rIP-10-PE38KDEL融合基因可在NIH3T3细胞中表达,为进一步研究其对自身免疫病的Th1细胞靶向毒性及临床应用奠定基础。; 孙岚祁志荣张琴林媛李明远张林蒋忠华李虹; 关键词：PE38KDEL 重组免疫毒素 NIH

一种新型重组免疫毒素DT390-Rantes真核表达质粒的构建及功能: 2005年; 目的构建一种新型重组免疫毒素DT390-Rantes的真核表达质粒,并对这种免疫毒素的功能进行初步研究。方法通过RT-PCR的方法,从小鼠肝脏中获得Rantes基因;将Rantes基因插入到含有DT390片段的真核质粒SRα中,构建成重组质粒;重组质粒转入大肠杆菌JM109,筛选出含有正确插入片段的克隆;限制性内切酶酶切图谱分析重组质粒,并进行DNA序列分析;用脂质体介导法转染NIH3T3细胞,免疫荧光检测重组质粒的表达情况;MTT法测定DT390-Rantes的表达活性。结果经过酶切分析及DNA测序证实,Rantes基因正确插入到真核表达质粒SRα中,并在NIH3T3细胞中表达;MTT法证实,重组免疫毒素DT390-Rantes能在体外杀伤活化的T细胞。结论成功地构建了一种新型重组免疫毒素真核表达质粒DT390-Rantes-SRα,该质粒可在真核细胞中瞬时表达,其转染上清对活化的T细胞具有杀伤作用。; 贾怡李虹陈文捷吕梅励李明远蒋忠华张林; 关键词：免疫毒素 RANTES DT390 真核表达

免疫毒素IP10-DT390核酸制剂对实验性变态反应性脑脊髓炎的治疗作用: 2007年; 研究重组免疫毒素杀伤活化T细胞后,对实验性变态反应性脑脊髓炎(EAE)的发生和发展产生的抑制作用。利用含有编码重组免疫毒素IP10-DT390的真核质粒,直接导入动物肌肉,使IP10-DT390在骨骼肌内表达,通过IP10-DT390对活化T细胞的选择性杀伤,探索对EAE的治疗效果。实验结果显示,这种新型免疫毒素核酸制剂可以减轻EAE模型鼠的发病症状、选择性的减少中枢系统自身活化的T淋巴细胞浸润、降低外周血T细胞数量,而对免疫反应的其他成分影响不明显。该免疫毒素核酸制剂可能成为治疗有关自身免疫性疾病的一种新的有效方法。; 陈文捷李虹贾怡李明远蒋中华吕梅励张林; 关键词：IP10 DT390 重组免疫毒素 T细胞

mMIP-1α-DT390核酸制剂治疗实验性变态反应性脑脊髓炎的研究: 2007年; 目的新型重组免疫毒素mMIP-1α-DT390核酸制剂对实验性变态反应性脑脊髓炎治疗的效果研究。方法用MBP免疫C57BL/6小鼠诱发EAE,建立人多发性硬化症的动物模型。将构建的真核质粒SRα-mMIP-1α-DT390直接导入EAE模型小鼠C57BL/6肌肉,使重组免疫毒素在其骨骼肌内高效表达。通过对模型小鼠的临床症状的评分、病理切片所显示的中枢神经系统炎症细胞浸润的情况及流式细胞技术检测的外周T细胞的动态变化等指标对核酸制剂的疗效进行评估。结果新型免疫毒素mMIP-1α-DT390核酸制剂治疗EAE模型小鼠,使小鼠临床症状得到改善:发病延迟、平均临床评分下降、症状严重程度降低;神经系统的病理切片显示治疗后小鼠的脑部活化的淋巴细胞浸润减轻;流式细胞仪检测结果显示治疗后小鼠外周血T细胞数量下降,而B淋巴细胞基本维持正常水平。结论所有检测指标均提示该免疫毒素mMIP-1α-DT390核酸制剂可有效的治疗自身免疫性疾病。; 吕梅励李虹梁伟波陈文捷贾怡李明远蒋忠华张林; 关键词：MIP-1Α DT 重组免疫毒素

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国家高技术研究发展计划(2002AA214101)