国家自然科学基金(30300169)
- 作品数：18 被引量：68H指数：4
- 相关作者：王胜军许化溪邵启祥仝佳毛朝明更多>>
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- 人AITRL胞外区基因克隆表达及重组蛋白生物活性分析被引量：1
- 2007年
- 目的:获得重组人活化诱导的肿瘤坏死因子超家族配体胞外区蛋白(sAITRL),分析AITRL蛋白的生物学功能。方法:从全长质粒AITRL-pMD18-T中扩增sAITRL cDNA,亚克隆至表达载体pQE30;将重组质粒转化至E.coliM15,IPTG诱导蛋白表达;表达蛋白用Ni2+-IMAC柱纯化、复性并Western blot鉴定,流式细胞仪检测sAITRL重组蛋白的结合活性,增殖试验分析sAITRL的生物学活性。结果:成功构建了sAITRL-pQE30原核表达载体;表达相对分子质量约15kD的重组蛋白;sAITRL能与活化淋巴细胞上的天然受体AITR结合,低浓度的sAITRL能促进淋巴细胞的增殖,而在高浓度下则抑制了淋巴细胞的增殖。结论:成功表达了具有生物学活性的sAITRL重组蛋白,AITR-AITRL相互作用在调节淋巴细胞增殖过程中起重要作用。
- 毛朝明王胜军仝佳马洁杨敏许小朋邱谷风唐莉邵启祥李龙许化溪
- 关键词：基因克隆原核表达重组蛋白
- CD4^+CD25^+调节性T细胞抑制小鼠自身免疫性甲状腺炎的发生被引量：9
- 2005年
- 目的 :研究CD4 + CD2 5 + Treg细胞对诱导小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎 (EAT)的影响。方法 :磁性细胞分离器 (MACS)分离CD4 + CD2 5 + T细胞 ,通过体外细胞增殖试验和IFN γ的测定研究CD4 + CD2 5 + T细胞对CD4 + CD2 5 - T细胞的免疫抑制作用 ,同时通过过继转移试验研究CD4 + CD2 5 + T细胞抑制小鼠EAT的发生。结果 :MACS分离的CD4 + CD2 5 + T细胞纯度可达到 85 %～ 94 % ,特异性表达FoxP3基因 ,体外能明显抑制效应性T细胞的增殖和IFN γ的产生 ;将CD4 + CD2 5 + T细胞与病理性CD2 5 - T细胞共同注射正常小鼠 ,可抑制病理性T细胞诱导EAT的发生。结论 :CD4 + CD2 5 +
- 王胜军许化溪王永忠胡嘉波马斌
- 关键词：CD4^+CD25^+T细胞实验性自身免疫性甲状腺炎小鼠
- 重组FoxP3腺相关病毒转染小鼠CD4^+CD25^-T细胞的实验研究被引量：3
- 2006年
- 目的:研究FoxP3(ForkheadBoxP3)基因在小鼠T细胞的表达情况,以及重组FoxP3腺相关病毒(adenoassociatedvirus,AAV)对小鼠CD4+CD25-T细胞功能的影响。方法:采用实时定量PCR检测CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25-T细胞FoxP3mRNA表达情况,利用基因重组技术构建FoxP3腺相关病毒载体,体外转染CD4+CD25-T细胞,通过细胞增殖试验观察转染CD4+CD25-T细胞功能变化。结果:CD4+CD25+T细胞较CD4+CD25-T相比高水平表达FoxP3基因mRNA,重组FoxP3腺相关病毒转染后的CD4+CD25-T细胞对CD3单抗的刺激呈低反应性,并且能抑制新鲜分离CD4+CD25-T细胞的增殖。结论:FoxP3基因转染的CD4+CD25-T细胞在体外具有抑制T细胞活化增殖的功能。
- 王胜军许化溪钱晖邵启祥马斌杨胜利
- 关键词：FOXP3T细胞腺相关病毒免疫调节
- 人AITRL基因克隆和序列分析被引量：1
- 2006年
- 目的:克隆人AITRL基因cDNA,同时对其序列进行分析。方法:采用RT-PCR方法,从人脐静脉内皮细胞株中获得AITRL基因的cDNA,克隆至pMD18-T载体,选择阳性克隆进行酶切鉴定和序列测定。结果:扩增得到的AITRL基因cDNA为534 bp,编码177个氨基酸残基,与GenBank中公布的序列完全一致。结论:获得人AITRL基因的克隆,为进一步研究其生物学功能奠定了良好基础。
- 毛朝明王胜军蒋茜马洁杨敏仝佳许小朋邱谷风唐莉邵启祥许化溪
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR人脐静脉内皮细胞
- 强力霉素调节大鼠骨髓来源树突状细胞免疫功能的初步研究被引量：2
- 2007年
- 目的:探讨强力霉素(Doxycycline,Dox)对大鼠骨髓来源树突状细胞(rat bone marrow-derived dendriticcells,RBM-DCs)表型和功能的影响。方法:无菌分离SD大鼠骨髓细胞,经重组大鼠GM-CSF(recombinated rat GM-CSF,rrGM-CSF)4 ng/ml+重组大鼠IL-4(recombinated rat IL-4,rrIL-4)4 ng/ml+Dox 100 ng/ml,500 ng/ml和1 000ng/ml诱导8天,同时设立rrGM-CSF 4 ng/ml+rrIL-4 4 ng/ml为对照组。于激光共聚焦显微镜下观察Dox对RBM-DCs形态学变化的影响;采用流式细胞仪分析RBM-DCs表面标志的变化;最后用同种异体混合淋巴反应检测RBM-DCs对同种异体T淋巴细胞的刺激能力。结果:激光扫描共聚焦显微镜下观察细胞形态未发现各组与对照组之间有明显差别;流式细胞术分析表明:不同剂量的Dox均可下调未成熟RBM-DCs表面CD11c,OX62,MHC-Ⅱ,CD86和CD80分子的表达;经Dox处理的RBM-DCs刺激T淋巴细胞增殖的能力下降。结论::Dox可能通过调节RBM-DCs表面分子的表达,来调节RBM-DCs的免疫功能。
- 张慧史蓓蕾俞黎娅黄莉莉宗扬勇彭鑫申卫红邵启祥
- 关键词：强力霉素免疫调节
- CD4^+CD25^+调节性T细胞与肿瘤免疫治疗被引量：1
- 2007年
- 毛朝明王胜军
- 关键词：肿瘤免疫耐受CD4^+CD25^+调节性T细胞免疫治疗
- 转染T-bet基因的人胃癌SGC-7901细胞分泌IFN-γ的作用被引量：2
- 2009年
- 采用基因克隆与腺相关病毒包装技术，构建人Thl细胞特异性转录因子T-bet基因的腺相关病毒载体，并转染入胃癌细胞系SGC-790I细胞。检测转染细胞IFN-γ的分泌功能及其对SGC-7901细胞生物学作用的影响。结果：（1）获得含有T-bet基因的重组腺相关病毒（rAAV—eGFP-T—bet）；（2）用rAAV-eGFP—T-bet感染SGC-7901细胞后，约30％～40％的细胞出现绿色荧光。对被感染细胞进行RT—PCR，扩增出1670bp的T-bet，并经Westernblot证实；（3）转染后的细胞测得388bp的IFN-γ目的条带和IFN-γ蛋白的表达。由此表明，人T-bet基因的腺相关病毒载体rAAV—eGFP—T-bet，可成功转染SGC-7901，并致使转染细胞分泌IFN-γ。为进一步开展T-bet基因干预治疗肿瘤的研究奠定了基础。
- 邱谷风王锁英王胜军邵启祥马洁杨敏许小朋毛朝明苏兆亮黄新祥许化溪
- 关键词：T-BET基因重组质粒腺相关病毒载体IFN-Γ
- T细胞疫苗抑制自身免疫性甲状腺炎的发生
- 2004年
- 目的 研究T细胞疫苗 (TCV)在小鼠实验性自身免疫性甲状腺炎 (EAT)发生中的阻断作用及可能机制。方法 磁珠分离CD4 + T细胞 ,体外活化 ,戊二醛处理获得T细胞疫苗 ,体内接种EAT小鼠。通过EAT评价、细胞因子测定及细胞增殖试验了解TCV对EAT的阻断作用 ;流式细胞术测定小鼠CD4 + CD2 5 + T细胞百分率。结果 TCV接种后小鼠体内自身抗体水平明显下降 ,甲状腺无明显病理变化 ,IL 2和IFN γ水平以及Tg刺激的淋巴细胞增殖能力均显著降低 ,同时CD4 + CD2 5 + T细胞百分率较EAT组有明显增高。结论 TCV接种能明显抑制小鼠EAT的发生 ,可能与机体内CD4 + CD2 5 +
- 王胜军许化溪邵启祥王永忠李良菊
- 关键词：T细胞疫苗甲状腺炎调节性T细胞
- 小鼠GITRL基因的克隆和序列分析被引量：5
- 2004年
- 目的 :克隆小鼠GITRL基因全长编码区的cDNA ,同时对其序列分析。方法 :采用RT PCR方法 ,从小鼠树突状细胞获得GITRL基因的cDNA ,克隆至pMD18 T载体 ,选择阳性克隆并进行序列测定。结果 :扩增得到的GITRL基因编码区cDNA的全长 5 19bp ,编码 173个氨基酸残基 ,与GeneBank中发表的序列完全一致。结论 :获得小鼠GITRL基因的克隆 ,为进一步研究其生物学功能提供基础。
- 王胜军马斌仝佳许化溪杨胜利
- 关键词：CDNA克隆RT-PCR调节性T细胞小鼠
- 小鼠CD4^+CD25^+调节性T细胞分离和鉴定被引量：2
- 2005年
- 目的:体外分离CD4+CD25+调节性T细胞并进行初步鉴定。方法:磁性细胞分离器(magneticcellsorting,MACS)分离CD4+CD25+T细胞,流式细胞术(flowcytometry,FCM)分析细胞纯度,逆转录-多聚酶链反应(reversetranscription-polymerasechainreaction,RTPCR)检测FoxP3基因,体外细胞增殖试验研究CD4+CD25+T细胞对CD4+CD25-T的免疫抑制作用。结果:MACS分离的CD4+CD25+T细胞纯度可达到85%～94%,并且特异性表达FoxP3基因,体外能明显抑制效应性CD4+CD25+T细胞的增殖。结论:通过MACS可分离高纯度CD4+CD25+T细胞,并且CD4+CD25+Treg细胞在体外具有明显抑制效应性T细胞的功能。
- 马洁王胜军胡嘉波马斌许化溪
- 关键词：CD4^+CD25^+T细胞免疫调节小鼠
