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牛肠激酶基因工程菌的构建、高密度发酵、纯化及活性鉴定被引量：5: 2006年; 肠激酶(enterokinase,EK)是一种专一识别DDDDK氨基酸序列、并水解K后肽键的丝氨酸蛋白水解酶.根据GenBank序列进行人工合成牛肠激酶轻链基因cDNA,测序正确后将其插入甲醇酵母分泌型载体pPICZαA,得到重组质粒pPICZαA/EKL,重组载体经线性化后转化Pichia pastorisSMD1168H,筛选得到重组牛肠激酶轻链工程菌.分别对重组酵母工程菌进行高密度发酵、rEKL(recombinant enterokinase light chain,rEKL)纯化、N端序列测定、生物学活性鉴定等研究工作.结果表明,发酵上清中rEKL含量高,纯化的rEKL专一性强、无其他杂酶活性、N端15个氨基酸序列与文献报道一致.; 李德华苟兴华胡海洋徐琦刘忠荣吴洽庆余晓东; 关键词：高密度发酵

重组人造血增效因子对猴外周血干细胞的快速动员作用被引量：1: 2005年; 目的观察重组人造血增效因子(rhHSF)对外周血造血干/祖细胞的快速动员作用。方法4只正常成年雄性猕猴连续4天皮下注射重组人粒细胞集落刺激因子(rhGCSF)10μg/(kg·d)后,第5天用rhHSF250μg/kg一次皮下注射。另4只正常成年雄性猕猴仅皮下注射rhHSF500μg/kg一次。观察两组外周血造血干细胞的动员效果。结果一次皮下注射rhHSF后45min、1h和3h,外周血CD34+细胞、CFUGM和中性粒细胞数明显升高并达高峰,其幅度分别为药前值的1.8、3.3和24.9倍。单独应用rhGCSF后4天,对外周血CD34+细胞、CFUGM和中性粒细胞数分别为基值的34.8、4.2和2.7倍;联合应用rhHSF和rhGCSF的动员作用更加明显,CD34+细胞、CFUGM数和中性粒细胞数分别增至基值的41.3、8.3和4.9倍。结论rhHSF能快速动员造血干/祖细胞和中性粒细胞至外周血,并与rhGCSF有明显的协同作用。; 谢玲刘耀文齐春梅熊国林王欣茹黄海潇余祖胤刘萍杨洁郝静董波陈松森罗庆良; 关键词：重组人粒细胞集落刺激因子外周血干细胞

基因工程药物研制过程中相关问题探讨被引量：1: 2005年; 以DNA重组技术为核心的现代生物技术是国际上优先发展的高技术领域之一。以基因工程技术为核心的生物药物已形成一个高新技术产业。利益驱使很多科研单位和企业投入大量资金到基因工程药物的开发中来。在基因工程制药选题立项时应首先考虑产品市场风险、研制过程中的技术风险和国家政策法规的修改所带来的风险;其次,在药学研究、临床前药理药效研究、临床研究、资料申报的具体过程中,要根据产品的具体特性确定好实验方案、工作计划和合作单位,并按药品注册管理办法的要求作好每一阶段的具体工作。就基因工程药物研究过程中的实际问题阐述了一些经验,希望对业内同仁有所帮助。; 于源刘忠荣余孝其吴洽庆; 关键词：基因工程药物药物研制生物技术生产工艺

重组人干细胞因子与重组人粒细胞集落刺激因子联合用药的猴毒性研究: 重组人干细胞因子(rhSCF)和重组人粒细胞集落刺激因子(rhG—CSF)是临床常用的造血生长因子(HGF),实验提示rhSCF和 rhG-CSF与IL3、IL-6、粒-巨噬细胞刺激因子、Epo等造血生长因子的各种联合应...; 宣尧仙陈国灿陈云祥徐潘生杨红忠陈颖陈浩卢祺炯李峰陈名友雒蓬轶刘忠荣王若卓钱伯初; 文献传递

干细胞因子的研究及其应用被引量：30: 2002年; 人干细胞因子 (hSCF)是新近发现的重要造血细胞因子 ,它是酪氨酸激酶受体c Kit的配体。SCF主要作用于早期造血干细胞、原始造血祖细胞 ,并且诱导这些细胞的存活、增殖和分化。SCF单独使用生物学作用低 ,但它与其它细胞因子具有强的协同作用。在临床Ⅰ、Ⅱ和Ⅲ期研究中 ,SCF和G CSF联合应用 ,与单独使用G CSF比较 ,CD34+ 细胞数增加 2～ 3倍。安进公司采用基因重组技术在大肠杆菌中生产的重组人SCF (r methSCF )商品名为STEMGENTM。SCF临床使用 ,包括体内干细胞扩增治疗 (exvivo)和用于基因治疗的体外培养造血干细胞。SCF与G CSF联合使用刺激扩增外周血干祖细胞 (PBPC) ,可用于干祖细胞移植 ,以增加患者所需PBPC的比例 ,减少收集PBPC的次数。本综述主要介绍了人SCF的功能。; 陈松森熊安琪; 关键词：人干细胞因子基因克隆生物学活性

人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物结构分析及活性研究被引量：2: 2003年; 目的　确证人干细胞因子基因在大肠杆菌表达产物的正确性。方法　通过蛋白质杂交 ,氨基酸末端序列分析 ,质谱分析及动物体内生物活性的研究 ,对人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物———重组人干细胞因子 (rhSCF)分子进行了鉴定。结果　大肠杆菌表达产物rhSCFN端 15个氨基酸序列及C端 2个氨基酸序列与理论推测一致 ,产物的相对分子质量为 185 83.75 ,质量肽谱与理论序列的重叠率为 98.2 % ,动物试验亦表明当与粒细胞集落刺激因子 (G CSF)联用具有显著的外周血干(祖 )细胞动员作用。结论　人干细胞因子基因大肠杆菌表达产物与理论推测完全一致 ,为其中试及临床试验奠定了基础。; 吴洽庆刘忠荣张思仲马用信雒蓬轶王红霞陈松森; 关键词：人干细胞因子大肠杆菌粒细胞集落刺激因子

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国家高技术研究发展计划(2001AA215401)