国家高技术研究发展计划(2001AA215441)
- 作品数：5 被引量：14H指数：3
- 相关作者：焦炳华王梁华张兴群袁勤生穆军更多>>
- 相关机构：第二军医大学华东理工大学中国科学院更多>>
- 发文基金：国家高技术研究发展计划国家自然科学基金上海市卫生系统百名跨世纪优秀学科带头人培养计划更多>>
- 相关领域：生物学医药卫生理学化学工程更多>>
- 高密度发酵制备重组人OCIF活性域多肽融合蛋白
- 2004年
- 以补料 分批发酵方式在 3 7L发酵罐上实现了人破骨细胞形成抑制因子活性域多肽(OCIFAD)的高密度发酵融合表达。通过参数控制。发酵液最终OD6 0 0 达 1 2 5 (相当于 35g湿菌体 L) ,表达量占菌体总蛋白 40 %左右 ,含量超过 0 6g L ,并且 90 %呈可溶性而直接具有生物学活性。直链淀粉树脂亲和层析法一步纯化 ,纯度达 90
- 张兴群王梁华焦炳华袁勤生
- 关键词：破骨细胞形成抑制因子融合蛋白发酵
- 高密度培养大肠杆菌TB1/pMAL-hOCIFm的优化条件被引量：5
- 2005年
- 利用Bioengeering3.7L自控式发酵罐,以分批培养和补料分批培养相结合的培养技术,高密度培养重组大肠杆菌TB1/pMAL-hOCIFm,生产重组人破骨细胞形成抑制因子成熟肽(recombinanthumanosteoclastogenesisinhibitoryfactormaturepeptide,rhOCIFm)。通过对碳、氮源补加方式以及溶解氧等参数的控制,使工程菌E.coliTB1/pMAL-hOCIFm的发酵菌体OD600达到57.8,rhOCIFm与MBP融合蛋白(hOCIFm-MBP)的含量达到3.2g/L。本研究为工业化生产rhOCIFm奠定了基础。
- 张兴群王梁华焦炳华袁勤生
- 关键词：发酵
- 重组人OCIF结构域D1～D6基因在毕赤酵母中的表达被引量：3
- 2004年
- 利用PCR以实验室构建的原核重组表达质粒pProEX-OCIF为模板扩增得到N末端融合有6×His标签和rTEV蛋白酶识别序列的人破骨细胞形成抑制因子(OsteoclastogenesisInhibitoryFactor,简称OCIF)结构域D1～D6(简称O CIFm)编码基因片段;将其与pMD18-T连接,转化大肠杆菌TOP10,筛选得到阳性重组质粒pMD18-OCIFm,双酶切重组克隆质粒pMD18-OCIFm得到OCIFm基因片段;将其定向插入甲醇营养型酵母分泌表达载体pPIC9中,构建获得重组表达质粒pPIC9-OCIFm.测序验证后,以限制性内切酶SalⅠ线化,电穿孔转化酵母宿主菌GS115.筛选得到阳性表达菌株后,甲醇诱导表达4d,SDS-PAGE和Westernblot对表达情况进行分析和确认.所获得的OCIFm基因片段在甲醇营养型酵母中表达量占菌体总蛋白的30%以上.利用Ni-NTA树脂对表达产物进行一步亲和层析纯化.活性测定表明纯化的表达产物可诱导体外培养的成熟破骨细胞样细胞的凋亡.表达产物的生物学活性较利用原核表达系统明显提高.
- 张兴群王梁华焦炳华袁勤生
- 关键词：阳性表达M基因重组表达质粒破骨细胞样细胞结构域毕赤酵母
- 一株具有抗菌和细胞毒活性的海洋嗜盐菌XD20的筛选和鉴定被引量：6
- 2006年
- 目的：从中国东海分离筛选活性海洋微生物，进而确定所获取的活性菌株的分类地位。方法：乘坐专业考察船只在中国东海海域进行系统采样，采用抗菌模型和细胞毒模型进行活性筛选。对获取的活性菌株进行形态特征研究、盐需求测试、核糖体rDNA ITS区序列分析，并将所测得序列在NCBI数据库中进行相似性搜索，选取其中相似性较高的序列以邻接法构建系统进化树，将该菌株分类鉴定到种。结果：从我国东海海域C01站位（122°26′30″，30°43′48″）30m水深处分离获得一活性菌株XD20，是一嗜盐菌株，能耐受高达10．0％的盐浓度，合适的生长盐浓度范围为2．5％～7．5％；它对白念珠菌具有抑菌活性，对SMMC7721细胞株和HeLa细胞株具有细胞毒活性。以菌丝断裂方式产生节孢子，孢子大小及形态与Wallemia sebi相符；rDNAITS区测序发现，该菌株序列与Wallemia sebi的多条序列相似程度较高，且差异均在ITS1和ITS2区，属于可变区。结论：活性菌株XD20首次从海洋中分离获得，为一嗜盐海洋菌株，鉴定为Wallemia sebi（Fr．）Arx。
- 穆军焦炳华孙炳达刘杏忠
- 关键词：抗真菌活性细胞毒活性海洋微生物
- 人破骨细胞形成抑制因子活性域片段在大肠杆菌中的融合表达
- 2005年
- 目的 在大肠杆菌中高效融合表达人破骨细胞形成抑制因子 (Osteoclastogenesisinhibitoryfactor,OCIF)活性域片段。方法 从中国人正常肝细胞系LO2中提取总RNA ,利用RT PCR得到OCIF活性域编码基因cDNA ,将其与pMD18 T连接 ,转化大肠杆菌K80 2 ,筛选得到阳性重组克隆载体pMD18 OCIFAD ,经双酶切得到OCIF活性域编码片段 ,将其插入pMAL c2载体中 ,转化大肠杆菌TB1。筛选得到阳性重组表达子后进行诱导表达。结果 所获得的OCIF活性结构域编码序列片段经测序与GenBank报道的完全一致。所表达的产物经SDS PAGE分析可见在相对分子质量 6 0 0 0 0处出现一条特殊条带 ,与预期的相对分子质量一致。Westernblot证实了表达产物能与抗人OCIF单抗发生特异性反应。结论 已成功地获得了人OCIF活性结构域编码片段的克隆 ,并实现了其在大肠杆菌中的融合表达。表达产物对体外培养破骨细胞的骨吸收功能有明显的抑制作用。
- 张兴群王梁华焦炳华袁勤生
- 关键词：破骨细胞大肠杆菌肝细胞系片段SDS-PAGE分析
