广东省卫生厅资助课题(B2009192)
- 作品数：2 被引量：1H指数：1
- 相关作者：叶晓霞陈东霍克克吴民华石彦更多>>
- 相关机构：复旦大学广东医学院更多>>
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- 羧基末端结合蛋白CtBP2与泛素结合酶UBE2Ⅰ的相互作用被引量：1
- 2011年
- 目的筛选并确定人羧基末端结合蛋白CtBP2的相互作用蛋白。方法用酵母双杂交技术,以人CtBP2为诱饵蛋白筛选人肝cDNA文库,获得与之相互作用的候选蛋白,采用酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验确认相互作用的特异性,最后利用荧光蛋白融合表达技术和荧光显微镜观察确认CtBP2与其相互作用蛋白的亚细胞共定位情况。结果酵母双杂交筛选获得了41个与Bd-CtBP2相互作用的阳性克隆,编码10个不同的蛋白,其中有4个克隆编码泛素结合酶UBE2Ⅰ的不同片段。从人肝cDNA文库中扩增获得UBE2Ⅰ的全长编码序列,酵母共转化和细胞免疫共沉淀实验证实CtBP2与UBE2Ⅰ能够特异性结合。亚细胞定位研究表明GFP-CtBP2弥散分布于细胞核,DsRed-UBE2Ⅰ不均匀分布于细胞核,有部分点状聚集。两者共转染时能够呈点状共定位于细胞核。结论人CtBP2能够在细胞核内与UBE2Ⅰ特异性相互作用,是UBE2Ⅰ的靶蛋白。
- 叶晓霞石彦霍克克陈东吴民华
- 关键词：酵母双杂交免疫共沉淀
- 利用SMART技术构建中国人肝组织cDNA酵母双杂交文库
- 2010年
- 目的:针对人类肝脏蛋白质组计划中大规模基因克隆及构建肝脏蛋白相互作用图谱的研究需要,改造酵母双杂交载体pPC86和pDBleu,并构建中国人肝组织cDNA文库,为肝脏蛋白质组计划的研究奠定基础。方法:设计并合成特定寡核苷酸序列,经过处理形成具有黏性末端的双链DNA片段,插入到pPC86、pDBLeu载体相应的酶切位点处,从而获得改造的新载体。利用改造后的载体、中国人正常肝组织mRNA和Clontech公司SMART文库构建试剂盒构建NpDBLeu-cDNA文库。结果:酶切鉴定和DNA测序证实改造后载体插入位点和序列正确,成功获得新载体NpPC86和NpDBLeu。滴度测试表明,所构建NpDBLeu肝组织cDNA文库容量为1.93×106cfu,转化子重组效率为95.2%,扩增文库达到109cfu·mL-1。结论:利用SMART技术成功构建了中国人肝组织cDNA酵母双杂交文库。
- 叶晓霞霍克克陈东梁艳清
- 关键词：SMART技术肝组织CDNA文库
