陕西省自然科学基金(2004C210)
- 作品数：2 被引量：5H指数：1
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- 相关机构：西安交通大学医学院第一附属医院北海道大学更多>>
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- 相关领域：医药卫生更多>>
- 核定位信号在JC病毒样颗粒入核转运中的作用被引量：1
- 2007年
- 目的探讨JC病毒（JCV）主要外壳蛋白VP1所含核定位信号（NLS）在JCV病毒样颗粒（VLP）入核转运中的作用。方法应用位点诱变法将JCV野生型VP1（wtVP1）氨基末端3个氨基酸：第5位赖氨酸、第6位精氨酸、第7位赖氨酸分别置换为丙氨酸、甘氨酸、丙氨酸，制备成NIS变异的VP1（△NIS-VP1）。编码△NLS-VP1的基因克隆到原核表达质粒pET-15b中，体外表达、重组VP1 NLS变异的病毒样颗粒（△NLS-VLP），异硫氰基荧光素（FITC）标记后感染地高辛渗透或未渗透的SVG细胞，荧光显微镜观察VLP入核转运。结果wtVP1组成的病毒样颗粒（mtVLP）可以进入地高辛渗透或未渗透的SVG细胞核，而△NLS-VLP只能进入细胞浆，不能进入细胞核；体外转染后，wtVP1主要在SVG细胞核表达，而△NLS-VP1主要在细胞浆表达；包裹外源性DNA的VLP感染SVG细胞后，则wtVLP包裹的DNA在细胞浆和细胞核内均可检测到，而△NLS-VLP包裹的DNA只能在细胞浆检测到，不能在细胞核内检测到。VLP体外结合分析发现，wtVLP与胞浆转运因子（impomn）α、β均可结合，而△NLS-VSP与importin α、β不能结合。结论、VP1 NLS对于VLP入核转运是必需的，VLP的入核转运是由VP1 NIS与importin相互作用介导的。
- 屈秋民曹红梅乔晋杨华
- 关键词：JC病毒病毒样颗粒核定位信号
- JC病毒样颗粒可直接转运进入细胞核被引量：5
- 2005年
- 目的 探讨JC病毒 (JCV)病毒样颗粒 (VLP)是否可以直接转运进入细胞核。方法 应用JCV主要外壳蛋白VP1体外表达、重组VLP ,在其表面标记异硫氰基荧光素 (FITC) ,同时在其内部包裹荧光染料Cy3,感染培养的HeLa细胞和SVG细胞 ,荧光显微镜观察VLP入核转运。结果 HeLa和SVG细胞感染包裹Cy3的FITC VLP时 ,FITC与Cy3同时出现于细胞核内相同部位 ;而感染FITC VP1与Cy3混合物时 ,FITC虽可在细胞核内检测到 ,但Cy3信号几乎消失。包裹Cy3的VLP用SDS PAGE展开 ,荧光显像后行考马斯亮蓝 (CBB)染色 ,发现Cy3和VLP移行至不同部位 ,证明Cy3不能与VP1结合 ,提示VLP以完整的颗粒形式转运进入细胞核。应用包裹外源性DNA的VLP感染培养的HeLa和SVG细胞 ,发现包裹的DNA在细胞浆和细胞核内均可检测到 ,提示JCV入核过程与VLP相同。结论 VLP可以不经裂解直接转运进入细胞核 ,JCV入核转运可能与VLP相同。
- 屈秋民郭峰乔晋泽洋文长岛和郎
- 关键词：病毒样颗粒JCVJC病毒微镜观察G细胞核转运
