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Src蛋白及其抑制剂与肿瘤关系的研究进展被引量：5: 2012年; 随着细胞内信号通路的研究进展,肿瘤分子靶向治疗逐渐成为研究的热点。Src蛋白与肿瘤的关系十分密切,在多种肿瘤细胞中高度活化和/或过量表达,与体内的多条信号通路相联系,可被多条信号转导途径所激活,并能够促进肿瘤的发生和发展。因此,达沙替尼、塞卡替尼、博舒替尼等Src蛋白的抑制剂在肿瘤中的作用逐渐引起人们的关注。; 吴静超王金环冯学泉; 关键词：SRC 肿瘤信号通路阻断剂

碱性成纤维细胞生长因子与信号转导和转录活化因子3在人胶质瘤细胞凋亡中的关系被引量：2: 2014年; 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）与信号转导和转录活化因子3（STAT3）在人胶质瘤细胞凋亡中的关系及可能的作用机制.方法以人胶质母细胞瘤U87细胞株和U251细胞株为研究对象,分为正常对照组、空载体组、实验组,分别构建携带靶向bFGF和STAT3小分子干扰RNA的重组慢病毒LV-bFGF-siRNA和LV-STAT3-siRNA,进行慢病毒转染.作用48 h后加入小分子抑制剂AG490 50 μmol/L、LY294002 20 μmol/L,选择性阻断JAK、PI3 K/Akt通路,作用24、48、72 h后,应用Western blot法检测bFGF、STAT3、pSTAT3（Tyr705）和pSTAT3（Ser727）的表达情况,用流式细胞仪、蛋白芯片、激光共焦显微镜分别检测细胞凋亡情况、凋亡相关蛋白表达及线粒体膜电位的变化.多组间均数比较采用单因素方差分析.结果 Western blot检测结果显示,JAK通路阻断后p-STAT3（Tyr705）的表达量随时间增加而降低,PI3 K/Akt通路阻断后p-STAT3（Ser727）的表达量随时间增加而降低;流式细胞仪检测结果显示,U87细胞株和U251细胞株中正常对照组、空载体组、实验组细胞的凋亡比例分别为17.97％±0.24％、18.26％±0.88％、46.57％±1.63％和15.94％±1.18％、16.88％±0.17％、39.34％±0.87％.正常对照组与空载体组相比差异无统计学意义（P值均＞0.05）,与实验组相比,差异均有统计学意义（F=697.41、729.58,P值均＜0.05）.蛋白芯片结果显示,实验组和空载体组相比,Bad、Caspase3、Cytochrome C、p27的表达量增加,XIAP的表达量下降.激光共焦显微镜下可见与正常组和空载体组相比,实验组细胞线粒体膜电位降低.结论人胶质母细胞瘤细胞中bFGF可通过作用于pSTAT3（Tyr705）来影响STAT3的磷酸化水平;阻断bFGF/STAT3信号转导通路可诱导胶质瘤细胞线粒体途径的细胞凋亡.; 冯学泉吴静超徐新女刘宏胜刘俊李家林张飚王金环; 关键词：成纤维细胞生长因子神经胶质瘤细胞凋亡

靶向信号转导和转录活化因子3的小干扰RNA与塞卡替尼联合治疗胶质瘤: 2014年; 目的观察携带靶向信号转导和转录活化因子3（STAT3）的小分子干扰RNA（siRNA）重组慢病毒（LV-STAT3 siRNA）与塞卡替尼（AZD0530）联合治疗在体内外抑制胶质瘤生长的效果.方法以人脑胶质瘤U87、U251细胞株和U87细胞BALB/c-nu裸鼠动物模型为研究对象,分为阴性对照组、空载体组、LV-STAT3 siRNA组、AZD0530组和LV-STAT3 siRNA与AZD0530联合治疗组.在体外实验中应用细胞计数试剂盒（CCK-8）方法检测细胞增殖,应用流式细胞仪检测细胞凋亡.在体内实验中,应用小动物活体成像技术动态监测肿瘤生长,3周后处死裸鼠,行免疫组织化学染色.结果体外实验中联合治疗组对U87和U251细胞增殖的平均抑制率分别达28.60％、36.36％（P＜0.05）;在U87细胞中,联合治疗组凋亡率最高[（55.28±1.59）％],其次为LV-STAT3siRNA组和AZD0530组[（46.38±1.76）％、（35.39±1.23）％],3组之间差异有统计学意义（P＜0.05）,在U251细胞中结果类似;体内实验中,第1周时LV-STAT3 siRNA组（8.05±1.09）、AZD0530组（7.54±1.07）和联合治疗组（7.19 ±0.73）发光值低于空载体组（11.14±1.59）,差异有统计学意义（P＜0.05）;第2周,AZD0530组（79.63 ±8.25）和空载体组（92.23±17.34）吸光度（A）值差异无统计学意义（P＞0.05）,LV-STAT3 siRNA组（63.78 ±13.46）和联合治疗组（61.57 ±7.84）A值低于AZD0530组和空载体组,差异有统计学意义（P＜0.05）.免疫组织化学显示,磷酸化STAT3和B细胞淋巴瘤/白血病-2（bcl-2）蛋白在阴性对照组、空载体组和AZD0530组的表达量分别约是LV-STAT3 siRNA组和联合治疗组的3、4倍（P＜0.05）.结论体外实验中联合治疗产生明显的协同抑瘤作用;体内实验中LV-STAT3 siRNA抑瘤效果显著,AZD0530效果不理想.; 李家林尚超冯学泉吴静超徐新女刘宏胜刘俊张飚王金环; 关键词：小干扰RNA 慢病毒胶质瘤

靶向碱性成纤维生长因子的小分子干扰RNA诱导胶质瘤U251细胞凋亡机制的初步探讨被引量：6: 2012年; 目的初步探讨靶向碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）的小分子干扰RNA（siRNA）诱导胶质瘤U251细胞凋亡的作用机制。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组，空载组和实验组按感染复数（MOI）=100分别进行空载体腺病毒（Ad—null）和含有bFGF小分子干扰RNA的重组腺病毒（Ad-bFGF-siRNA）转染，转染72h后通过Western blot方法检测相关蛋白的表达，并应用流式细胞仪和激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位的变化，多组间均数比较采用单因素方差分析（One—way ANOVA）。结果实验组细胞经转染Ad—bFGF—siRNA72h后，Western blot结果显示，与对照组和空载组相比bFGF蛋白表达明显降低，同时Cytochrome C、Caspase-3及Bax凋亡相关蛋白的表达增强，Bcl—xl和Bcl-2蛋白的表达降低；经流式细胞仪检测，线粒体膜电位高的细胞所占的比例实验组为74．4％±4．7％与对照组的92．1％±2．5％、空载组的90．9％±1．8％相比明显下降，差异有统计学意义（F=28．805，P〈0．05）；激光共聚焦显微镜的结果显示实验组的红色荧光与绿色荧光的比值为0．83±0．12与对照组的1．36±0．40和空载组的1．32±0．35相比明显下降，差异具有统计学意义（F=7．920，P〈0．05）。结论靶向bFGF的siRNA可能通过线粒体途径诱导胶质瘤U251细胞非淋菌性尿道凋亡。; 吴静超冯学泉王金环刘俊张飚徐新女刘宏胜; 关键词：成纤维细胞生长因子2 细胞凋亡

bFGF与IL-6／STAT3信号通路在胶质瘤细胞中的作用关系研究被引量：6: 2014年; 目的探讨碱性成纤维细胞生长因子（bfGf）与IL-6／STAT3信号通路在胶质瘤细胞中的作用关系。方法将U251细胞分为对照组、空载组和实验组，空载组和实验组按感染复数（multiplicity of infection，MOI）=100分别进行空载体腺病毒（Ad-GFP）和含有bFGF小分子干扰RNA的重组腺病毒（Ad—bFGF—siRNA）转染，通过Westernblot方法检测相关蛋白的表达，并应用ELISA方法检测细胞上清液中IL-6的水平变化。结果实验组细胞经转染Ad-bFGF-siRNA后，Westernblot结果显示，与对照组和空载组相比pSTAT3（TyrT05）和pSTAT3（Ser727）表达下降，呈时间依赖性，同时STAT3上游的激酶pERKl／2、pJAK2、Src及下游的效应蛋白CyclinDl、Bcl—xl表达均降低；ELISA法检测细胞上清液中IL-6的水平显示，实验组上清液中IL-6浓度与对照组和空载体组相比明显降低，差异均有统计学意义（P〈0．05）。结论腺病毒介导的bFGF小干扰RNA通过抑制IL-6的分泌，减少了胶质瘤U251细胞系的STAT3信号通路的活化，包括抑制上游的调节激酶JAK2、ERK及下游的效应分子CyclinDl和Bcl—xl的表达。; 冯学泉刘俊王金环徐新女张飚吴静超刘宏胜; 关键词：成纤维细胞生长因子白细胞介素6 胶质瘤

腺病毒介导靶向碱性成纤维细胞生长因子siRNA载体的构建及鉴定: 2014年; 目的构建一种高效"沉默"碱性成纤维细胞生长因子的小干扰RNA重组腺病毒载体,并为该载体在基因研究中提供相关资料。方法设计、合成优选的靶向bFGF特异性siRNA序列。采用限制性内切酶消化和T4 DNA连接酶连接的方法,将bFGF-siRNA序列克隆至腺病毒穿梭质粒pGStrack上,然后将重组穿梭质粒pGStrack-bFGF-siRNA和腺病毒骨架质粒pGSadeno体外LR位点进行特异性重组,将bFGF-siRNA基因转移至腺病毒骨架质粒pGSadeno上,最后重组骨架质粒pGSadeno-bFGF-siRNA。鉴定正确后经Pac Ⅰ酶切,转染HEK 293细胞,包装成重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA。同时在HEK 293细胞中进行病毒扩增,利用PCR方法对重组腺病毒进行鉴定,用微量全细胞病变法检测腺病毒滴度,用Western blot方法验证所构建载体作用效果。结果 PCR鉴定重组腺病毒rAd5-bFGF-siRNA构建成功;扩增后检测腺病毒滴度约为5×108 PFU/ml,Western blot结果显示目的基因蛋白沉默效率大于90%。结论应用LR重组法能成功构建携带靶向bFGF基因的siRNA重组腺病毒,该载体转染胶质瘤U251细胞株后目的基因蛋白沉默效率较高,为进一步的相关研究奠定可靠的基础。; 刘家美刘俊冯学泉徐新女刘宏胜张飚吴静超王金环; 关键词：碱性成纤维细胞生长因子腺病毒小分子干扰RNA

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国家自然科学基金(81101911)

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