河北省自然科学基金(C2009001104)
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- 不同日龄大鼠颈上交感神经节神经元电转染方法
- 2011年
- 目的建立一种高效电转染不同日龄大鼠颈上交感神经节(superior cervical sympathetic ganglion,SCG)神经元细胞的方法。提高转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率。方法用传统的及经改良的神经元培养液分别培养电转染后的7日龄、14日龄和40日龄SD大鼠SCG细胞,24 h后用台盼蓝染色方法观察并计算细胞成活率;通过改变质粒DNA和siRNA与转染液比例,优化转染条件,于转染24h后在共聚焦显微镜下观察并计算转染效率或干扰效率。结果改良培养液可使14日龄以上SD大鼠SCG细胞转染后成活率达到75%以上,明显高于传统培养液转染后的成活率(P<0.01),且结果稳定,细胞状态良好,能够满足后续实验研究的要求;优化转染条件后,DNA的转染率及siRNA的干扰率显著提高,当DNA与转染液比例为1∶100(μg∶μL)时,细胞转染率最高;当siRNA与转染液比例为1∶50(μg∶μL)时干扰率最高。结论通过改良神经元培养液及优化转染条件,成功提高了电转染后细胞的成活率、转染效率和干扰效率,利用电转染方法可成功转染不同日龄SD大鼠SCG神经元。
- 刘丽赵志英张海林
- 关键词：电转染SIRNA
