国家自然科学基金(30571396)
- 作品数：9 被引量：6H指数：2
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- 相关机构：吉林农业大学长春市动物检疫站辽宁医学院更多>>
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- 抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因的扩增及序列分析
- 2009年
- 从分泌抗猪囊尾蚴单克隆抗体杂交瘤细胞提取总RNA,以此为摸板,RT-PCR扩增出抗猪囊尾蚴单克隆抗体轻重链可变区基因,琼脂糖凝胶电泳检测显示约350 bp,符合鼠抗体特征。PCR产物与pMD18-T连接后转化JM109,蓝白斑法筛选出阳性重组子。以载体通用引物对阳性重组子进行鉴定,对证明为阳性的重组子测序。结果显示,轻链可变区和重链可变区基因符合鼠抗体轻链可变区和重链可变区基因特征,VH和VL有3个比较明显的CDR区和FR区。
- 种法政徐辞王石郑君赵权
- 关键词：猪囊尾蚴
- 囊虫病免疫诊断检测方法的研究进展被引量：3
- 2006年
- 本文综述了10种囊虫病免疫诊断方法,并对其优、缺点进行了分析。
- 徐鹏张晓雷赵权
- 关键词：囊虫病免疫诊断
- 仔猪人工感染囊尾蚴后血清抗体消长规律的研究
- 2007年
- 徐鹏刘孝刚李霞蔡亚南赵权
- 关键词：猪囊尾蚴病血清抗体抗体消长规律仔猪
- 猪囊尾蚴头节蛋白双抗体夹心ELISA检测方法的建立及初步应用
- 2010年
- 采用抗猪囊尾蚴头节蛋白单克隆抗体包被ELISA板,以兔抗猪囊尾蚴头节蛋白多抗作为捕获抗体,建立了猪囊尾蚴头节双抗体夹心ELISA检测方法,用该方法分别检测猪囊尾蚴、棘球蚴和猪蛔虫具有良好的特异性。用ELISA和RT-PCR同时检测120份样品,ELISA的特异性和敏感性分别为98.1%和80.0%,2种方法的符合率为95.8%。
- 蔡亚南张晓雷高瑞峰杨桂连徐鹏赵权
- 关键词：双抗体夹心ELISA单克隆抗体
- 仔猪人工感染猪囊尾蚴后外周血中淋巴细胞亚群的动态变化研究被引量：2
- 2007年
- 试验研究了仔猪人工感染猪囊尾蚴后外周血中CD_3^+、CD_4^+、CD_8^+T淋巴细胞的变化规律。将10头仔猪随机分为2组,即攻虫组和对照组,每组5头,用流式细胞仪检测攻虫后10,20,30,40,70 d试验猪外周血中T淋巴细胞亚群的变化情况。结果显示整个检测过程中CD_3^+T细胞比例一直处于较低水平。在感染初期CD_4^+T细胞和CD_8^+T细胞比例明显降低,且CD_4^+T细胞比例明显高于CD_8^+T细胞;感染中期CD_8^+T细胞数量有所增加,但仍以CD_4^+T细胞比例占优势;感染后期CD_4^+T细胞和CD_8^+T细胞数量都有所恢复。
- 徐鹏杨桂连刘孝刚蔡亚南姜晶赵权
- 关键词：猪囊尾蚴细胞免疫流式细胞术
- 猪囊尾蚴头节单克隆抗体的制备及特性鉴定
- 2010年
- 为制备抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体(MAb),本研究采用纯化的猪囊尾蚴头节(Cysticercus Cellulosae Scolex)作为抗原免疫BALB/c小鼠,通过杂交瘤细胞技术,获得3株分泌抗猪囊尾蚴头节MAb的杂交瘤细胞系(分别命名为2C6、3A5和4G10)。对这3株MAb进行生物学特性鉴定,其染色体平均记数为92±10对,经间接ELISA检测腹水效价分别为1:12800、1:6400和1:25600。亚类鉴定证实,这3株亚类均为IgG1型。Westernblot检测表明,3株纯化的MAb均可与猪囊尾蚴头节抗原发生特异反应;而与猪囊尾蚴囊壁和囊液抗原均不发生反应。本研究获得的3株MAb为猪囊尾蚴病免疫学诊断研究奠定技术基础。
- 蔡亚南张晓雷王泽徐鹏杨桂连刘春杰姜晶赵权
- 关键词：单克隆抗体
- 猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组载体的构建及表达
- 2010年
- 从绿脓杆菌ATCC27853菌株中提取基因组,PCR扩增PE40基因,与pMD18-T载体连接并转化感受态大肠杆菌JM109中,构建重组质粒pMD-PE40;经鉴定正确后将PE40基因插入抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因重组质粒pMD-ScFv中,构建重组质粒pMD-ScFv-PE40,经酶切、电泳回收目的片段,并亚克隆到表达载体pET-28a中,构建重组表达载体pET-ScFv-PE40;鉴定后转化E.coliBL21,IPTG诱导后进行SDS-PAGE和Western-blotting验证。结果表明,试验成功构建了重组表达载体pET-ScFv-PE40,目的片段约为1 800 bp;Western blotting证明重组蛋白具有一定的反应原性,为重组免疫毒素的制备及动物保护性试验奠定了基础。
- 郑君王石赵权种法政徐辞
- 关键词：单链抗体原核表达
- 猪囊尾蚴头节抗原的制备及间接ELISA方法的建立被引量：1
- 2010年
- 采用Sephadex G-200层析技术纯化猪囊尾蚴头节抗原,用纯化抗原包被ELISA板,建立间接ELISA方法。通过各种条件优化,最终确定最佳试验条件为:抗原最适包被量为30mg/L;血清稀释度为1∶800;血清最佳反应时间为60min。结果表明,该方法具有较好的稳定性和重复性,可用于分泌抗猪囊尾蚴头节单克隆抗体杂交瘤细胞株的筛选。
- 蔡亚南杨桂连徐鹏门静涛姜晶刘春杰赵权
- 关键词：猪囊尾蚴间接ELISA
- 猪囊尾蚴头节单链抗体-PE40重组蛋白的表达及抗虫活性分析
- 2008年
- 将含有抗猪囊尾蚴头节单链抗体基因(ScFv)和绿脓杆菌外毒素基因(PE40)的重组质粒pET28-ScFv-PE40转化到大肠杆菌BL21中,经IPTG诱导,表达产物通过SDS-PAGE和western blot鉴定,其表达蛋白的相对分子量约为68ku,表达量约占菌体总蛋白的13.8%。将融合蛋白通过金属Ni2+亲和层析柱纯化后,目的蛋白纯度在95%以上,可溶性蛋白的回收率约为50%,回收量为5mg/L。本研究所进行的纯化重组蛋白的体外杀伤六钩蚴试验表明,重组蛋白对六钩蚴具有较强的杀灭作用,而且与其剂量呈正相关性。
- 郑君赵权王石种法政徐辞
- 关键词：重组蛋白纯化活性分析
