南京市医学科技发展项目(ZKX10019)
- 作品数：2 被引量：3H指数：1
- 相关作者：史颖莉陈捷顾林袁春桃袁春桃更多>>
- 相关机构：南京医科大学南京医科大学附属南京妇幼保健院更多>>
- 发文基金：南京市医学科技发展项目国家自然科学基金更多>>
- 相关领域：医药卫生更多>>
- TCAB1基因RNAi慢病毒载体的构建及在人子宫内膜间质细胞中沉默TCAB1基因的效应被引量：3
- 2012年
- 目的构建TCAB1基因RNAi慢病毒载体,为子宫内膜异位症(EMs)的基因靶向治疗提供理论依据。方法化学合成3条靶向TCAB1基因的siRNA,转染HEK-293T细胞,24h后采用荧光素酶报告系统筛选有效siRNA,其对TCAB1mRNA有明显抑制作用。针对已经筛选确定的TCAB1基因RNAi有效靶序列,合成靶序列的Oligo DNA,退火形成双链DNA,与经XhoI和HpaI酶切后的LV1载体[含U6启动子和绿色荧光蛋白(GFP)]连接产生LV1-shRNA慢病毒载体,PCR筛选阳性克隆,测序鉴定。用LV1-shRNA、pRev、pVsvg、pcgv四质粒共转染包装细胞HEK-293T细胞,包装产生慢病毒,分别于转染后48h、72h收取病毒上清,感染人子宫内膜间质细胞(ESC),进行RT-qPCR检测TCAB1基因相对表达量,检测LV1-shRNA干扰效率。结果 PCR和测序证实,成功构建TCAB1 shRNA的慢病毒载体LV1-shRNA。结论成功构建TCAB1基因的RNAi慢病毒载体,其转染ESC细胞后显著抑制了TCAB1的表达,为子宫内膜异位症的基因靶向治疗提供了实验基础。
- 陈捷顾林史颖莉袁春桃倪婕
- 关键词：SHRNA慢病毒载体
- TCAB1在子宫内膜异位症在位内膜中的表达及其作用
- 2014年
- 目的:探讨TCAB1在内异症(EMs)患者中的表达及其可能的致病机制。方法:选取EMs患者在位内膜和正常妇女子宫内膜。Western blot法检测TCAB1蛋白表达。原代培养EMs患者在位内膜间质细胞(ESC)和正常内膜ESC,实时定量PCR检测TCAB1mRNA表达。构建TCAB1慢病毒沉默表达载体,感染ESC株THESCs,G418筛选稳定沉默表达TCAB1的细胞株后,分别采用MTT、流式细胞术观察细胞增殖和凋亡的变化。结果:与正常患者比较,EMs在位内膜中TCAB1呈异常高表达(P=0.006);在位内膜ESC中也呈高表达趋势(P=0.0014)。TCAB1基因在ESC中沉默表达能抑制细胞的增殖(P<0.05)、促进其凋亡(P<0.001)。结论:TCAB1在EMs患者呈异常高表达,可能通过提高逆流子宫内膜抗凋亡能力使之更易于在盆腹腔内生长,这有望为内异症临床治疗提供新的研究方向。
- 史颖莉陈捷钱宁倪婕鲍爱梅袁春桃顾林
- 关键词：子宫内膜异位症发病机制
